離體快繁與脫毒28h(編輯修改稿)
2025-06-08 02:55 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 和葉片。一般煉苗時間為 10— 30D。 移栽前的工作 2 移栽時應(yīng)注意的問題 （ 1）防止菌類滋生 ①苗底部培養(yǎng)基要洗干凈 ②殺菌劑處理苗的根部 ③定時用殺菌劑處理種植基質(zhì) 常用殺菌劑： KMnO4,百菌清、多菌靈、托不津，使用濃度 ％ 移栽時應(yīng)注意的問題 （ 2）保持小苗水分供給平衡 (3)移栽時選擇合理的種植基質(zhì) 基質(zhì)要疏松透氣，有適宜的保水性，易于滅菌處理，不利于雜菌滋生：常用珍珠巖，椰糠，蛭石，細(xì)沙，泥炭。 移栽時應(yīng)注意的問題 泥炭 珍珠巖 椰糠 移栽時應(yīng)注意的問題 一般強(qiáng)度較高的慢射光較好 (4)注意一定光照，溫度條件 ５試管苗的鑒定 （１）形態(tài)學(xué)鑒定 （２）細(xì)胞學(xué)鑒定 五、植物組織培養(yǎng)中應(yīng)注意的問題 ? 褐變（褐化） ? 污染 ? 玻璃化 １ 褐變 （１）褐變 褐變 ：指在組織培養(yǎng)過程中，由培養(yǎng)材料向培養(yǎng)基中釋放褐色物質(zhì)，致使培養(yǎng)基逐漸變成褐色，培養(yǎng)材料也隨之慢慢變褐而死亡的現(xiàn)象。 ? 褐變現(xiàn)象 ? ? 褐變原因 ?有的植物材料在接種后材料的表面出現(xiàn)褐色物質(zhì)甚至培養(yǎng)基也呈褐色的現(xiàn)象，褐色會嚴(yán)重影響外植體的生長分化，成為植物組織培養(yǎng)的一大障礙。 （ 組織中的多酚氧化酶被激活，使酚類物質(zhì)被氧化生產(chǎn)生棕褐色醌類物質(zhì)而引起褐變。 ） 褐變影響因素 ? 基因型 ? 材料的生理狀態(tài) ? 培養(yǎng)時間 （２）克服褐變的方法 選擇適宜的外植體 （幼嫩材料、春季取材） 改善營養(yǎng)條件 （連續(xù)培養(yǎng)） 在培養(yǎng)基中加入一些附加物 活性炭 抗氧化劑 ＶＣ ＰＶＰ（聚乙烯吡咯烷酮 ） ＢＳＡ（牛血清蛋白） 褐變的防止 ?三個選擇 分生能力強(qiáng)的外植體 合適的無機(jī)鹽成分濃度、合適的蔗糖濃度和 激素水平 適宜的溫度 ?兩個加入 （活性碳、抗氧化劑） ?一個連續(xù) （連續(xù)將材料進(jìn)行轉(zhuǎn)移） ２ 污染 細(xì)菌污染 真菌污染 污染 細(xì)菌污染的特點(diǎn) ? 在培養(yǎng)材料附近出現(xiàn)黏液狀菌斑，一般接種 12天一 5可發(fā)現(xiàn)。特別應(yīng)注意一種呈乳白色的細(xì)菌污染，這種細(xì)菌為芽孢桿菌，外被莢膜，耐高溫，一般滅菌劑難以殺死，可隨培養(yǎng)材料、用具傳播，可出現(xiàn)在培養(yǎng)基表面，也可呈滴形云霧狀存在于培養(yǎng)基內(nèi)，發(fā)現(xiàn)及時淘汰，并對用過的器具嚴(yán)格高溫滅菌。 真菌污染的特點(diǎn) ? 培養(yǎng)基上長霉，一般接種 35天就可先，霉的顏色有黑、白、黃等，真菌污染的特點(diǎn)是污染部分有不同顏色的霉菌，接種 3天，有時多達(dá) 10天才能表現(xiàn)。 （２）克服方法 ? 外植體滅菌不徹底 ? 培養(yǎng)基及各種器具清潔滅菌不徹底 ? 人為因素 ? 超凈工作區(qū)被污染 ? 環(huán)境不清潔 細(xì)菌污染 ? 表現(xiàn) ： 發(fā)酵狀 水漬狀 滴形云霧狀 ? 污染原因： 培養(yǎng)基滅菌不過關(guān) 接種器具污染 操作污染 交叉污染 真菌污染 ? 表現(xiàn) ： ? 灰、白、黃、綠菌絲體、孢子組成絨毛狀物有色圈 ? 污染原因 ： ? 培養(yǎng)室濕度過大 ? 瓶口積落有灰塵和孢子。 材料內(nèi)部帶菌 ? 在培養(yǎng)基中表現(xiàn)的癥狀 ? 外植體接觸培養(yǎng)基部位長菌 ? 外植體損傷部位長菌 ? 外植體生長不良或表現(xiàn)出缺綠 ? 診斷 ? 培養(yǎng)基添加有機(jī)物檢測 人為因素（工作人員本身）：工作服、帽、口罩、酒精擦手。 物品因素 器皿和用具 培養(yǎng)皿：洗 → 熱壓 玻璃器皿：洗 → 干熱（干熱箱）或晾干 接種用具：用 CCL4布擦 → 濕布擦 → 泡 75%~95%酒精 → 燒 培養(yǎng)基：濕熱 培養(yǎng)材料 外部細(xì)菌：用水沖洗 → 化學(xué)藥劑處理 內(nèi)部細(xì)菌 莖尖培養(yǎng) 加抗生素：青霉素、利福平 操作的空氣：洗刷地板 95%酒精擦超凈工作臺 用化學(xué)試劑薰蒸（甲醛或者甲醛： 高錳酸鉀 =10:1) 污染來源 作好接種前準(zhǔn)備 ? 接種室的滅菌 ? 超凈工作臺的滅菌 ? 接種器皿、用具的滅菌 ? 工作人員接種前應(yīng)做的準(zhǔn)備工作 ? 材料的滅菌 ? 接種室的地面，墻壁要擦洗干凈 ? 接種前一夜用甲醛熏蒸 10ml/m2 ? 接種室還可以采用紫外燈滅菌 作好接種前準(zhǔn)備 ? 開風(fēng)機(jī)前將紫外燈打開 30分鐘以上 ? 之后開風(fēng)機(jī) 15分鐘 ? 用 95%酒精洗工作臺面 作好接種前準(zhǔn)備 、用具的滅菌 ? 用具先用 95%酒精浸泡，后于酒精燈外焰灼燒 作好接種前準(zhǔn)備 ? 個人衛(wèi)生，穿工作服 ? 用 70%酒精擦手 作好接種前準(zhǔn)備 ?一個典型的材料滅菌流程 ?常用滅菌劑 ?滅菌關(guān)鍵性問題 作好接種前準(zhǔn)備 適當(dāng)?shù)拇钆? 適當(dāng)?shù)臐舛? 適當(dāng)?shù)臅r間 一個典型的滅菌流程 材料的預(yù)處理 (剪切、清洗 ) 75%酒精 (20 s) %升汞 (15 min) 無菌水沖洗 （ 6次） 瀝干 接種 注意接種操作 — 防止空氣污染 ? 防止空氣污染 ? 防止操作帶來的污染 ? 防止器皿用具污染 防止空氣污染 接種時在近火焰處打開瓶口，使瓶傾斜，以免空氣中微生物落入瓶中 正 確 錯 誤 防止操作帶來的污染 A 整個接種操作應(yīng)在近火焰處進(jìn)行，且動作要迅速 正 確 錯 誤 接種過程中盡可能達(dá)到懸空要求 防止操作帶來的
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