植物離體培養(yǎng)育種ppt課件(編輯修改稿)
2025-05-28 02:17 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 eloping at the edges of the explant No BAP BAP reduced to mg. l1 No NAA Poor shoot development and no roots. Extensive callus generation Poor shoot development and no roots NAA reduced to mg. l1 More balanced development of roots and shoots. However, undifferentiated callus is developing at the edges of the explant Profuse development of roots and a reduced number of shoots. Undifferentiated callus is developing at the edges of the explant 有機(jī)物質(zhì) (Vitamins and amino acids) Vit B1 Vit B6 Vit B3 Vit B5 肌醇 CH LH ME YE 硫胺素 鹽酸吡哆醇 煙酸 泛酸鈣 水解酪蛋白 (casein hydrolysate) 水解乳蛋白 (lactoalbumin hydrolysate) 麥芽提取物 (malt extract) 酵母浸出物 (yeast extract) 促進(jìn)細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)基的反應(yīng) 固化劑（ gelling agent） ?瓊脂 ?來于 seaweed ?對(duì)植物組織有一定的生理作用 ?用量一般為 710g/L，即 %（ W/V） ?太大，培養(yǎng)基過硬； ?太小，培養(yǎng)基不易凝固 ?不同品牌的瓊脂對(duì)外植體的反應(yīng)也不一樣。 ?其它 gelling agent： ?Gelrite（脫乙酰吉蘭糖膠）： ?透明， Pseudomanas種發(fā)酵產(chǎn)物（多糖） ?成分穩(wěn)定。 碳源 ?營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) ?滲透壓穩(wěn)定劑 類型 蔗糖 、 葡萄糖、果糖、山梨醇、麥芽糖、淀粉等 濃度 25%（ W/V） ?低濃度適合于原生質(zhì)體培養(yǎng) ?高濃度適合于胚和花藥培養(yǎng) 作用 蔗糖長(zhǎng)時(shí)間高溫處理會(huì)發(fā)生焦糖化，形成 蛋白黑素，抑制細(xì)胞生長(zhǎng) pH計(jì) 培養(yǎng)基的 pH pH值： ~6 ?： the agar will not gel properly ?6： the gel may be too firm ?滅菌后 pH會(huì)降低 ?培養(yǎng)材料降低 pH：產(chǎn)生有機(jī)酸， N利用 測(cè)定方法 ?pH試紙 ?pH計(jì) pH調(diào)整方法 ?1N的 HCl和 NaOH ?在加入 agar前調(diào) pH 培養(yǎng)基的選擇和配制 選擇 ?擇材料和種類而異 ?參考前人的研究 ?MS培養(yǎng)基最為基本： ?高濃度的 N、 K和 NH4+ ?自己試驗(yàn) 配制 配母液（ Stock solution) 取樣 加成分 測(cè) pH ok 母液的配制 ?大量元素 ?微量元素 ?濃縮 10倍（量加大 10倍） ?在配制 1L培養(yǎng)培養(yǎng)基時(shí)，只取 100ml ?濃縮 100倍（量加大 100倍） ?在配制 1L培養(yǎng)培養(yǎng)基時(shí)，只取 10ml 以 KNO3為例 1L培養(yǎng)基需要量為 19g。 在配制母液時(shí)，增加 10倍量，為 190g。在母液中的濃度為 190g/L，即 在配制培養(yǎng)基時(shí)，取 10ml， 10ml 無(wú)菌室 培養(yǎng)室和接種室 室內(nèi)滅菌可用 2%新潔爾敏擦洗 75%乙醇噴霧 UV照射 20分鐘 培養(yǎng)基 滅菌方法 ?高溫高壓蒸氣滅菌 ?過濾滅菌 121176。 C， ,1520分鐘，時(shí)間過長(zhǎng)，培養(yǎng)基成分易變性失效 在高溫高壓下易分解的培養(yǎng)基和激素類 器皿和接種工具的滅菌 解剖刀、鑷子、剪刀等工具采用干熱滅菌法， 用烘箱滅菌， 120 176。 C時(shí) 1小時(shí) 外植體的滅菌原則 ? 充分滅菌，但不能損傷外植體 ? 不同外植體，滅菌要求不一樣 常用方法 ?75%乙醇 ?氯化汞（升汞） ?次氯酸鈉 表面殺菌，具濕潤(rùn)和殺菌作用，浸 30秒 常用濃度 %處理 510分鐘，有殘毒 濃度 210%，時(shí)間 1530分鐘，對(duì)植物無(wú)害 培養(yǎng)所需環(huán)境條件 光照強(qiáng)度 ：一般而言，愈傷組織的形成并不需要光照； 培養(yǎng)前期 10004000lx，后期 10000 lx。 光照時(shí)數(shù) ：不同培養(yǎng)的組織其光照時(shí)間不同，如煙 草愈傷組織采用 1000 lx 16小時(shí) /日培養(yǎng)； 而花椰菜組織培養(yǎng)則以 4000 lx 9小時(shí) /日 光照為宜。 光質(zhì) ： 一般采用日光燈作為光源。組織培養(yǎng)中關(guān)鍵 的器官形成作用，是種光形態(tài)發(fā)生現(xiàn)象， 是受光敏色素控制的。 溫度 ： 一般習(xí)慣將培養(yǎng)物置于恒溫下，通常應(yīng)用的溫度 為 25OC 左右。 光 167。 3 通過花藥及花粉培養(yǎng)的單倍體育種 ? 單倍體植物在育種上的意義 概念： 凡是具有配子體的染色體數(shù)的植物稱為單倍體植物 。單倍體 ≠一倍體 ， 是一個(gè) “ 半倍體 ” 。 單倍體在自然界普遍存在 ， 1922年發(fā)現(xiàn)了曼陀羅的單倍體植株 ， 但自然發(fā)生率很低 （ ~%） 。 人工誘導(dǎo)單倍體在育種上的用途 ? 從單倍體的染色體加倍即可獲得純合的二倍體 ， 也可獲得純合的多倍體 ， 育種途徑快速 。 ? 有利于遠(yuǎn)緣雜種新類型的培育和穩(wěn)定 。 ? 單倍體植物與誘變育種相結(jié)合 ， 可以加速誘變育種的進(jìn)程 。 花藥及花粉培養(yǎng)工作的進(jìn)展 ? 起始于 20世紀(jì) 40年代 ， 最初研究目的是調(diào)節(jié)和控制從花粉母細(xì)胞到成熟花粉的生長(zhǎng)發(fā)育 。 大約經(jīng)過半個(gè)世紀(jì)的發(fā)展 ， 通過花藥和花粉培養(yǎng)誘導(dǎo)形成單倍體植物 ， 目前在世界范圍內(nèi)已得到普及 ， 已從 170多種植物成功地誘導(dǎo)形成花粉起源植株或愈傷組織 ， 以茄科 、 十字花科蔬菜作物研究居多 。 在曼陀羅 、 番茄 、 麝香百合 、 銀杏 、 煙草 、 矮牽牛等植物上都較早誘導(dǎo)成功單倍體植物 。 花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù) 1. 花藥培養(yǎng)技術(shù)流程圖 切下花蕾 消毒 10分鐘 沖洗兩次 花藥接種培養(yǎng) 愈傷組織或胚狀體 再生培養(yǎng) 完整植株 花藥和花粉
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