無病毒植物的培養(yǎng)ppt課件(編輯修改稿)
2025-02-01 11:58 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 認為對通常采用嫁接繁殖的果樹進行試管嫁接是很適宜的 。 (4)試管微體嫁接除了可培育無病毒植株外 ，還可解決難以生根的園藝植物的生根問題和進行嫁接親和力的研究 。 柑桔類 80%以上的種類具有多胚性 ,而單胚占的比例很小 。 ? 柑橘類植物中有不少多胚品種，一顆種子內(nèi)除一個合子胚外，還有數(shù)個至數(shù)十個由珠心細胞形成的無性胚，稱做 珠心胚。 因為 病毒通常是經(jīng)維管束的韌皮組織傳播 的 ， 而珠心與維管束系統(tǒng)無直接聯(lián)系 。 由珠心組織誘導產(chǎn)生的植株就可免除病素毒的危害 。 ① 它與合子胚不同，不是受精的產(chǎn)物，而是由體細胞產(chǎn)生的，因此具有和母體相同的遺傳組成； ②與合子胚一樣，在珠心胚和植株之間無維管組織連系，因此即使母體植株感染了病毒，珠心胚也是無毒的； ③在自然條件下，珠心胚一般都不能發(fā)育成熟，只有適時從種子中剝離出來，接種在人工培養(yǎng)基上，珠心胚才能長成植株，而這些植株應當是不帶病毒的母體無性系。 珠心胚具有 3個特征 花藥培養(yǎng)的最初目的 ， 是培育起源于花藥內(nèi)部花粉粒的單倍體植株 ， 并使單倍體加倍 ， 作為育種材料的來源 。 但經(jīng)大量實驗表明花藥培養(yǎng)所得的植株有 95%以上是能開花結果的多倍體 ， 而且生長發(fā)育都優(yōu)于母株 。 已證明 ， 經(jīng)愈傷組織培養(yǎng)出來的花藥植株是不帶病毒的 ， 借此方法 ， 不僅可快速培育出大量的無毒植株 ， 并可省去病毒鑒定工作 ， 對基層生產(chǎn)應用實為一舉兩得的事情 。 三、分離莖尖的培養(yǎng)情況 第一種： 是生長停止 ， 接種的組織并有擴大 ， 顏色逐漸變褐而枯死 ， 這種情況大多是生 長點在分離接種過程中受傷 而造成的； 第二種： 是生長太慢 ，莖尖接種后顏色逐漸變綠，但不見增大，最后成綠色小點。這是由于 生長素濃度偏低，或培養(yǎng)溫度過低 所造成的，如果立即轉(zhuǎn)入較高濃度生長素的培養(yǎng)基中，或提高培養(yǎng)溫度，即能促進莖尖生長； 第三種： 是生長過旺 ， 接種后莖尖明顯增大 ， 約培養(yǎng)一同后即在莖尖基部產(chǎn)生愈傷組織 ， 但不易見到莖尖的伸長 ， 組織顏色也較澆 。 這是由于培養(yǎng)莖 生長素濃度偏高 ， 或光照弱 ， 溫度高 而造成的 。為此應將培養(yǎng)材料轉(zhuǎn)入生長素濃度較低的培養(yǎng)基中 ， 或降低溫度 ， 提高光照強度來解決 。 否則時間長了愈傷組織會表換生長分化能力； 第四種： 是生長正常 、 在營養(yǎng) 、 激素 、 溫度 、 光照等各方面條件正常的情況下 ， 接種的莖尖顏色逐漸變綠 ， 基部逐漸增大 ， 有時形成少量的愈傷組織 ， 莖尖也逐漸伸長 ， 培養(yǎng)一個月左右轉(zhuǎn)入無基素的基本培養(yǎng)基 ， 莖尖繼續(xù)伸長 ， 并產(chǎn)生根系 ，最后發(fā)育成完整植株 。 第三節(jié) 無病毒植株脫毒程序 一、材料準備 1．決定植物種類及品種。選用生長健壯，遺傳性一致的品種為材料，并探明該品種除所脫除 的病毒在寄主中的位置。 2．了解該植物體內(nèi)所具有的病毒種類及危害的程 度。根據(jù)植物所帶病毒種類，選擇指示植物 (敏感植物 )。 3．決定脫除病毒的方法：“莖尖培養(yǎng)”還是“熱處理”還是“微體嫁接”。 二、生長點分離和培養(yǎng) (莖尖培養(yǎng)為例 ) 1．從罹病的植株上切取頂芽或腋芽。 2．材料表面滅菌、決定滅菌藥劑、濃度、時間。 3．根據(jù)病毒在寄主內(nèi)分布位置決定切取莖尖大小。如果熱處理，那么決定熱處理的溫度、時間。 4．接種成功率與莖形狀結構有關。 例 馬鈴薯、百合生長點呈半圓形較大、好分離。 番薯、矮牽牛、香石竹呈半圓形，也比較好分離。 大麗花、菊花生長點扁平、并被對生葉原基夾住難分離。 草莓，葉原基上生有密集茸毛，生長點埋在肉質(zhì)凹形槽 內(nèi)，不僅難分離且容易污染。 三、無病毒植物的鑒定 通過莖尖分生組織培養(yǎng)、熱處理脫毒法、微體嫁接法而培養(yǎng)成的植株，不一定都是無病毒植株。 當前用于病毒檢測的方法有如下 3種： ①血清鑒定法； ②生物鑒定法 (敏感植物或指示植物 )； ③電子顯微鏡鑒定法。 采用單一鑒定法并不十分可靠。特別是對一些特異性病毒，單一鑒定方法可靠性更差。最好三種方法同時鑒定，可以獲得理想的結果。 (一 ) 指示植物鑒定法 原理 指示植物法是利用病毒在其它植物上產(chǎn)生的枯斑作為病毒種類鑒別的標準 ， 也即枯斑和空斑測定法 。 指示植物兩種類型 一種是接種后產(chǎn)生系統(tǒng)性癥狀 ， 出現(xiàn)在病毒擴展到的植物非接合部位 ， 通常沒有局部明顯病斑； 另一種是只產(chǎn)生局部病斑 ， 常由壞死 、 褪綠或環(huán)斑構成 。 常用的指示植物： 千日紅 、 曼陀羅 、 豇豆 、心葉煙 、 辣椒 、 莨菪等 。 每種病毒都有自己的敏感植物如： 馬鈴薯病毒的敏感植物： 千日紅、黃花煙、心葉煙、 毛葉曼陀羅； 大蒜病毒的敏感植物： 藜、千日紅； 草莓病毒的敏感植物： 威州草莓 (從八倍體野生種選出 )、 野草莓、野紅草莓 等。 桃紅葉病毒的敏感植物： 旱金蓮 。 大麗花病毒的敏感植物： 昆落阿藜、莧色藜、心葉煙、克里芙蘭煙、矮牽牛、黃瓜。 香石竹病毒的敏感植物： 昆落阿藜、莧色藜 。 菊花病毒的敏感植物：矮牽牛、豇豆。 敏感植物鑒定病毒的方法： A、摩擦接種法： 取培養(yǎng)植株的葉片榨汁，將其汁用摩擦法接種到各自的敏感植物上，然后視其病斑有無，來判斷是否脫除了病毒。 接種后如若敏感植物葉片表現(xiàn)病斑，可根據(jù)病斑類型判斷，還有哪種病毒沒有脫除。 例：馬鈴薯體內(nèi)各種病毒在其敏感植物上表現(xiàn)的癥狀 ： X病毒侵染千日紅 (葉片呈枯斑 )； M、 S病毒侵染千日紅 (葉片呈突起枯斑 )； X病毒侵染黃花煙 (葉片呈花葉 )； Y病毒侵染黃花煙 (葉片花葉或條斑或呈明顯脈綠帶 )； X病毒侵染心葉煙 (葉片呈花葉 )； Y病毒侵染心葉煙 (葉片呈條斑 )； P／ G帶毒體侵染心
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