《無(wú)病毒植物的培養(yǎng)》ppt課件-文庫(kù)吧
2024-12-21 11:58 本頁(yè)面
【正文】 該是防治病毒的有效途徑 。 有不少化學(xué)物質(zhì)能抑制病毒復(fù)制 ， 例如孔雀綠 、硫尿嘧啶 、 8氮鳥(niǎo)嘌呤 、 以及某些病毒抑制劑 。 如 Viraz01e(病毒唑 )和一些蛋白質(zhì) 、 核酸合成抑制劑等 。 由于病毒的復(fù)制和寄主的代謝過(guò)程關(guān)系非常密切 ， 因此 ， 要找出既干擾病毒復(fù)制 ， 又不影響寄主細(xì)胞正常代謝的藥劑十分困難 。 利用這些化合物處理整株植物去病毒的效果雖不理想 ， 但 培養(yǎng)離體的組織 、 細(xì)胞和原生質(zhì)體等卻可能有良好效果 。 如在培養(yǎng)基中加入 2— 硫尿嘧啶 可以除去煙草愈傷組織中的 PVY病毒 ， 加入 放線菌素 D可以抑制原生質(zhì)體中的病毒復(fù)制等 。 鈍化、抑制和清除植物病毒的一些化合物 三、生物學(xué)方法 （ 1） 莖尖培養(yǎng)脫毒的理論基礎(chǔ) a、 病毒在植物體內(nèi)的轉(zhuǎn)移是通過(guò)維營(yíng)束系統(tǒng)完成的 ，在分生組織區(qū)域內(nèi)沒(méi)有維管束組織 ， 病毒只能通過(guò)胞間連絲傳遞趕不上細(xì)胞的不斷分裂和活躍的生長(zhǎng)速度； b、 在分裂旺盛的分生組織內(nèi) ， 病毒的復(fù)制受到旺盛代謝活動(dòng)的限制； c、 在植物分生區(qū)域內(nèi) ， “ 病毒鈍化體系 ” 的活性較其他部位的活性高； d、莖尖分生組織內(nèi)高濃度的植物內(nèi)源激素可能會(huì)抑制病毒的增殖。 （ 2）莖尖培養(yǎng)脫毒苗的方法 在解剖鏡下剝?nèi)∏o尖 。 考慮到脫毒效果及提高成活率 ， 一般切取 — 培養(yǎng) ， 不同的植物莖尖對(duì)外源激素的反應(yīng)不同 。 莖尖大小 :過(guò)大時(shí)接種易成活 ， 但脫毒效果差 ， 過(guò)小時(shí)難成活 ， 但脫毒效果好 。 一般以帶有 12片葉原基為好 ， 大小為 ， 超過(guò) ，脫毒效果差 。 培養(yǎng)基 :只要能使莖尖快速生長(zhǎng) ， 分化快的培養(yǎng)基均適于脫毒 。 一般以 MS較好 ， 添加一定比例的細(xì)胞分裂素就行 。 馬鈴薯的芽 莖尖的結(jié)構(gòu) 微莖尖 普通莖 尖 馬鈴薯脫毒苗 康乃馨不同莖尖培養(yǎng)與康乃馨斑駁病毒的脫除情況 (3)莖尖培養(yǎng)法脫除植物病毒的技術(shù)關(guān)鍵 ① 同一種病毒在不同植物體內(nèi)分布部位不同 。 例：煙草花葉病毒 (TMV)在如下植物中的熒光反應(yīng) 。 煙草： l4片葉原基中未見(jiàn) TMY特異熒光 撞羽矮牽牛：一兩片葉原基未見(jiàn) TMV特異熒 光 ， 而在三四片葉原莖中可見(jiàn) TMV熒光 。 番茄： 1片葉原莖中未見(jiàn) TMV特異熒光 。 所以在用莖尖培養(yǎng)脫毒時(shí) ， 必須認(rèn)真確定病毒在植物莖尖中的分布部位 ， 然后確定培養(yǎng)莖尖的大小 . 如：番茄：只能取生長(zhǎng)錐或僅帶一片葉原基的莖 尖進(jìn)行培養(yǎng)； 撞羽矮牽牛：可取生長(zhǎng)錐或帶一兩片葉原基 的莖尖進(jìn)行培養(yǎng)； 煙草：可取帶 4片葉原基的莖尖進(jìn)行培養(yǎng) 。 利用莖尖堵養(yǎng)法脫除植物病毒時(shí) ， 最好找出莖原基所帶葉原基的數(shù)目與生長(zhǎng)點(diǎn) (莖尖 )大小的相關(guān)性 ，這樣在取材時(shí)就方便多了 。 ? 莖原基 ~ 莖原基帶 2片葉原基 ~ 莖原基帶 4片葉原基 ~ 莖原基帶 6片葉原基 ~ ② 不同病毒種類(lèi)在同一種植物中分布部位不同。 甘薯 斑紋花葉病毒 、 縮葉花葉病毒： 分布于 羽毛狀花葉病毒： 分布于 馬鈴薯 馬鈴薯卷葉病毒 、 Y病毒： 分布于 ； X病毒： 分布于 G病毒： 分布于 S病毒： 植物各部位器官和組織培養(yǎng)去分化誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織 ， 然后從愈傷組織再分化產(chǎn)生芽 ， 長(zhǎng)成小植株 ， 可以得到無(wú)病毒苗 。 說(shuō)明病毒顆粒會(huì)在愈傷組織的培養(yǎng)過(guò)程中逐漸消失 。 愈傷組織脫病毒的機(jī)理 ? 可能的原因有： ①病毒在植物體內(nèi)不同器官或同一器官的不同組織中分布不均勻，由那些無(wú)病毒細(xì)胞增殖產(chǎn)生的愈傷組織就是獲得無(wú)病毒苗的基礎(chǔ)。 ②有些愈傷組織細(xì)胞中病毒濃度較低，在愈傷組織細(xì)胞快速分裂過(guò)程中，病毒的復(fù)制能力衰退或丟失。 ③繼代培養(yǎng)的愈傷組織容易產(chǎn)生抗性變異細(xì)胞，因而可能出現(xiàn)不帶病毒的愈傷組織。但經(jīng)愈傷組織產(chǎn)生無(wú)病毒苗的脫毒途徑容易產(chǎn)生變異，可能導(dǎo)致植株喪失其原有的優(yōu)良性狀，當(dāng)然也有可能產(chǎn)生有益的變異，但頻率極低。 先將砧木種子進(jìn)行表面消毒 ， 以后再接到 1%瓊脂以 MS無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基培養(yǎng)發(fā)芽 ， 用苗齡約 2周的幼嫩實(shí)生苗作砧木 。 把實(shí)生苗從試管中取出 ， 在無(wú)菌條件下切去頂部 ， 留下 1 ， 將子葉和液芽除去 ， 把根切短至 4—6cm長(zhǎng) 。 從田間或溫室旺盛生長(zhǎng)的成年樹(shù)剪取一小段新梢 ， 經(jīng)消毒后在超凈臺(tái)上用顯微操作法取出僅帶 13個(gè)葉原基的莖尖約1mm大小作穗用 。 采用倒 T字形的水平切口 。 嫁接苗用液體濾低橋培養(yǎng)基培養(yǎng) 。 成活率 30%— 50%， 嫁接成功的植株移植到土壤之前至少要有兩片展開(kāi)的真葉 。 蘋(píng)果微體嫁接莖尖大小與脫毒成功率 蘋(píng)果不同取材時(shí)期對(duì)微體嫁接成功率的影響 蘋(píng)果微體嫁接莖尖大小與脫毒成功率 試管微體嫁接在果樹(shù)方面發(fā)展最快 (1)嫁接植物不受與珠心及有性實(shí)生苗相關(guān)的幼年階段的影響 。 (2)許多栽培品種通過(guò)嫁接繁殖了許多世代 ，因此果樹(shù)研究者和種植者關(guān)于這些品種的自根苗的根冠大小 、 病蟲(chóng)害情況以及耐寒性等了解得很少 。 (3)莖尖組織培養(yǎng)繁殖結(jié)合熱處理可產(chǎn)生無(wú)病毒植物 ， 因此 ， 許多研究者
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