病毒的傳分析ppt課件(編輯修改稿)
2025-02-01 14:11 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 sus突變分為三類； 無(wú)義抑制基因 （ su＋ ） 實(shí)質(zhì) ： tRNA基因發(fā)生了突變，例如琥珀型抑制基因‘ su3＋ ’在 UAG密碼于上插入了一個(gè)酪氨酸，這是因?yàn)?tRNA加基因的反密碼子的一個(gè)突變， tRNATry，正常的反密碼于是 GUA，它按擺動(dòng)規(guī)則譯讀酪氨酸密碼子 UAU(C)。‘ su3＋ ’菌株的 tRNATry含有反密碼子 CUA，它識(shí)讀琥珀型密碼子 UAG，并插入酪氨酸而防止終止。 （二）無(wú)義突變與無(wú)義抑制突變 無(wú)義突變： 指一個(gè)為氨基酸編碼的密碼變?yōu)榻K止密碼的突變。 無(wú)義抑制突變： 指能抑制無(wú)義突變表現(xiàn)的突變。 表 53 5種琥珀抑制基因的性質(zhì) 琥珀型抑 插入的 合成的蛋白質(zhì) 赭石型抑 制基因 氨基酸 占野生型 % 制基因 su1+ 絲氨酸 28 su2+ 谷氨酰胺 14 su3+ 酪氨酸 55 su4+ 酪氨酸 16 + su5+ 賴氨酸 5 + 四、噬菌斑分析（ The plaque assay） 1. 噬菌斑（ plaque） 噬菌體感染固體培養(yǎng)基上的菌苔（ lawn），溶菌后形成的圓形清亮的斑。 Opaque lawn of bacteria Clear areas of plaque 2. 噬菌體濃度的測(cè)定方法 （ 1）逐步稀釋原溶菌液（ 10 10 10 107） （ 2）感染平板培養(yǎng)基上的細(xì)菌菌苔（ lawn） （ 3）計(jì)數(shù)形成的噬菌斑 （ 4）計(jì)算原溶菌液中的噬菌體數(shù)目。 公式： 噬菌斑數(shù) /mL 稀釋倍數(shù) 原始噬菌體濃度 = 23 105 10ml 原始濃度： phages/ml ?噬菌體感染 第二節(jié) 噬菌體突變型的重組實(shí)驗(yàn) 一、 T2突變型的兩點(diǎn)測(cè)交 但 10年未引起重視！ （ 1） 1936年 生突變體，形成的噬菌斑的外形與野生型噬菌體的噬菌斑有明顯的區(qū)別。 （ 2） Hershey和 Luria的發(fā)現(xiàn) 1946年第 11屆冷泉港會(huì)議上 Hershey和Luria宣布發(fā)現(xiàn)噬菌體 r、 h突變，Delbruck和 Hershey發(fā)表了噬菌體重組。 三人獲 1969年 Nobel prize（生理或醫(yī)學(xué)） ① 噬菌斑的形態(tài)： ② 宿主范圍： h：噬菌體能在 B和 B/2品系上生長(zhǎng) h+：只能在 B品系上生長(zhǎng)。 （ 3） Hershey使用兩個(gè)表型特征 能在 B和 B/2混合菌苔上產(chǎn)生透明斑。 能在 B和 B/2混合菌苔上產(chǎn)生半透明斑。 r： 快速溶菌，噬菌斑大，邊緣清楚。 噬菌斑小，邊緣模糊。 r+： 噬菌斑與基因型 B和 B/2混合菌苔 （ 4）、噬菌體雜交 ① . 親本噬菌體（ T2）基因型 hr+：透明，小斑，邊緣模糊 h+r：半透明，大斑，邊緣清楚， ② 雜交過程 —— 混合感染實(shí)驗(yàn) 兩個(gè)親本噬菌體 混合感染 B和 B/2，觀察菌苔上出現(xiàn)的噬菌斑特征。推斷噬菌體的基因型。 mixed infection experiments 混合感染（ mixed infection） B/2 T2 phage （ 5） 雜交結(jié)果 在 B和 B/2混合菌苔上出現(xiàn)了 4種噬菌斑。 噬菌斑表型 推測(cè)基因型 親本型 透明 小 h r+ 半透明 大 h+ r 重組型 半透明 小 h+ r+ 透明 大 h r 半大 半小 透小 透大 （ 6） 重組機(jī)理 h+r h+r h+r h r+ h r+ h r+ h+r h+r h+r hr+ hr+ h r+ 噬菌體染色體在細(xì)菌體內(nèi)復(fù)制 不同的噬菌體染色體在細(xì)菌體內(nèi)交換重組 h+r+ h+r h+r hr+ hr+ h r h+r+ h+r h r+ h r 釋放出的 4種子代噬菌體 部分噬菌體DNA重組 （ 7）噬菌體重組值與基因作圖 ① 重組值的計(jì)算 重組噬菌體的噬菌斑數(shù) 總噬菌斑數(shù) 100% ② 基因圖距 用兩個(gè)基因的重組值表示基因間的遺傳距離。 （ h+r+ + hr） total plaques 100% Hershey和 Rotman1949年的 T2雜交結(jié)果 基因型 噬菌斑 百分率 hr+ 42 76% h+r 34 h+r+ 12 24% hr 12 r h 24 （ 8）、 T2噬菌體的遺傳圖 ① Hershey的迷惑 a. Hershey后來(lái)分離出多種突變的 T2 噬菌體： r r r13 用 hr的不同突變體雜交，計(jì)算 h與不同 r之間的重組值并繪制遺傳圖。 h與不同 r之間的重組值 雜交 子代各種基因型的百分比 h+r+ hr+ h+r hr 重祖率 % hr+ h+r1 12 42 34 12 24 hr+ h+r7 56 32 13 hr+ h+r13 59 39 r1 h 24 r7 h 13 r13 h h與不同 r之間的位置關(guān)系 r1 h r7 r13 r
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