【文章內(nèi)容簡介】 謝系統(tǒng)按次序地轉(zhuǎn)向合成噬菌體的組分與部件，合成的“原料”來自寄主細(xì)胞。 微生物學(xué) 噬菌體核酸的復(fù)制和蛋白質(zhì)合成方式（難點(diǎn)） ? T偶數(shù) 雙鏈 DNA噬菌體 為例 早期 次早期 晚期 基因組的轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)譯 北方民族大學(xué) 微生物學(xué) 早期基因 次早期基因 晚期基因 ⑦ 晚期轉(zhuǎn)譯 晚期蛋白(頭部蛋白 ,尾部蛋白 ,裝配蛋白 ,溶菌酶等 ) ④ 次早期轉(zhuǎn)譯 次早期蛋白（ DNA酶 ,DNA聚合酶 ,晚期mRNA聚合酶等 ) ② 早期轉(zhuǎn)譯 早期蛋白(次早期mRNA聚合酶 ,更改蛋白等 ) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 親代 DNA鏈 ① 早期轉(zhuǎn)錄 早期 mRNA ～～～～～～～～～ 宿主原有蛋白(RNA 聚合酶 ) ③ 次早期轉(zhuǎn)錄 次早期 mRNA ～～～～～～～～～～～ ⑥ 晚期轉(zhuǎn)錄 晚期 mRNA ～～～～～～～～～～～～～～～ 139。 239。 339。 439。 539。 639。 739。 839。 939。 1039。 1139。 1239。 1339。 1439。 1539。 ⑤ DNA復(fù)制 子代 DNA鏈 ⑧ 裝配出大量子代噬菌體 增殖過程大約 15min左右 成熟（裝配） ? 已合成的各部件按一定順序裝配的過程。 (約30種不同蛋白和至少 47個(gè)基因參與 ) ? 裝配過程（ 7min左右） 北方民族大學(xué) 微生物學(xué) 裂解（釋放） ? 寄主細(xì)胞破裂（是如何破裂的？） ? 噬菌體裂解量 (burst size)： 每個(gè)宿主細(xì)胞破裂后所產(chǎn)生的子代噬菌體量 T4:100,T2:150 （ 思考：裂解與自外裂解的區(qū)別？） 吸附 侵入 增殖 成熟 (裝配） 裂解 (釋放） 宿主細(xì)胞 整個(gè)過程大約 15min～ 25min 烈性噬菌體 （ virulent phage)感染細(xì)胞后能迅速引起宿主細(xì)胞破裂釋放子代噬菌體的噬菌體。 北方民族大學(xué) 微生物學(xué) 噬菌斑 熒光假單胞菌 由一個(gè)噬菌體復(fù)制增殖并裂解細(xì)菌后形成，稱為噬菌斑，不同噬菌體噬菌斑的形態(tài)與大小不盡相同。 每毫升試樣中所含有的具侵染性噬菌體粒子數(shù)，也即噬菌斑形成單位（ pfu)數(shù)（感染中心數(shù)） 效價(jià) 北方民族大學(xué) 微生物學(xué) 噬菌體效價(jià)的測定方法 雙層平板法：精確測定，普遍采用 底層平板： ～ 2％瓊脂培養(yǎng)基 上層平板： 含～ 1％瓊脂的上層培養(yǎng)基、對數(shù)期 宿主菌懸液、合適稀釋度噬菌體試樣三者混勻。 置于 37℃10 余小時(shí)，計(jì)數(shù) 電鏡計(jì)數(shù)：成斑率 北方民族大學(xué) 微生物學(xué) 噬菌體效價(jià)的測定方法 —— 雙層平板法 下層培養(yǎng)基 雙層培養(yǎng)基 敏感菌 +上層培養(yǎng)基 噬菌體稀釋液 培養(yǎng) 噬菌斑 噬菌斑 敏感菌菌苔 北方民族大學(xué) 微生物學(xué) 單層平板法與雙層平板法比較 北方民族大學(xué) 微生物學(xué) 雙層平板法與電鏡計(jì)數(shù)比較 ? 前者是計(jì)有感染力的噬菌體粒子，后者是計(jì)噬菌體的總數(shù)。 ? 用雙層平板法測出的效價(jià)比用電鏡直接記數(shù)得到的效價(jià)低。 ? 成斑率 =根據(jù)噬菌斑測定出的效價(jià)和用電鏡記數(shù)得到的效價(jià)之比 北方民族大學(xué) 微生物學(xué) 3. 噬菌體的一步生長曲線 一步生長曲線可反映每種噬菌體的 3個(gè)最重要的特性參數(shù) 潛伏期（ latent phase） 裂解期（ rise phase ） 裂解量（ burst size） ? 它是定量描述烈性噬菌體生長規(guī)律的實(shí)驗(yàn)曲線 ? 定量描述烈性噬菌體生長規(guī)律的曲線，觀察 一群噬菌體感染一群細(xì)胞所發(fā)生的變化。 北方民族大學(xué) 微生物學(xué) ? 測定一步生長曲線的步驟 ? 噬菌體稀釋液加到高濃度宿主細(xì)胞中，保證每個(gè)細(xì)胞最多不超過一個(gè)噬菌體吸附 ? 用噬菌體抗血清中和尚未被吸附的噬菌體 ? 用培養(yǎng)液稀釋混合液，并中止抗血清作用，室溫培養(yǎng) ? 間斷取樣進(jìn)行效價(jià)測定，得一曲線 北方民族大學(xué) 微生物學(xué) T4噬菌體的一步生長曲線 一步生長曲線 ? 潛伏期 指噬菌體侵入寄主細(xì)胞到寄主釋放新的子代噬菌體的最短時(shí)間，分為隱晦期和胞內(nèi)累積期 隱晦期： 指在潛伏期前期人為裂解細(xì)胞以后裂 解液無侵染性的一段時(shí)間 胞內(nèi)積累期： 潛伏后期，在隱晦期后人為裂解液呈現(xiàn)侵染性的一段時(shí)間 ? 細(xì)胞內(nèi)已經(jīng)開始裝配噬菌體粒子 北方民族大學(xué) 微生物學(xué) ? 裂解期 從被感染的第一個(gè)細(xì)胞裂解到最后一個(gè)細(xì)胞裂解完畢所需的時(shí)間。潛伏期以后宿主細(xì)胞迅速裂解、溶液中噬菌體粒子急劇增多的一段時(shí)間。 ? 平穩(wěn)期 感染的細(xì)胞全部裂解，溶液中噬菌體效價(jià)達(dá)最高點(diǎn)的時(shí)期 裂解量： 每個(gè)受染細(xì)胞所產(chǎn)生的子代病毒顆粒的平均數(shù)目。 ＝裂解末期平均噬菌體數(shù) /潛伏期平均數(shù) ＝平穩(wěn)期的病毒效價(jià) /潛伏期病毒效價(jià) 北方民族大學(xué) 微生物學(xué) 4. 噬菌體危害及防治 噬菌體污染現(xiàn)象 : 輕者使發(fā)酵周期延長，發(fā)酵單位降低；產(chǎn)品產(chǎn)量和質(zhì)量下降，重則造成倒罐，釀成經(jīng)濟(jì)損失。 噬菌體污染原因 : 菌種：不純，夾有噬菌體或本身是溶原菌 空氣：過濾系統(tǒng)，管道拐角、死角處滅菌不夠 預(yù)防噬菌體污染的措施 ： ①?zèng)Q不使用可疑的菌種；②嚴(yán)格保持環(huán)境衛(wèi)生；③決不排放或隨便 丟棄活菌液；④注意通氣質(zhì)量；⑤加強(qiáng)管道及發(fā)酵罐的滅菌；⑥不斷篩選抗性菌種，并經(jīng)常輪換生產(chǎn)菌種。 ( 表示溫和噬菌體的 DNA) 含有前噬菌體的寄主細(xì)菌，能正常生長繁殖而不被裂解，與溫和噬菌體長期共存 敏感細(xì)菌被溫和噬菌體感染而轉(zhuǎn)變成溶原性細(xì)菌的過程 感染宿主細(xì)胞后不能完成復(fù)制循環(huán)，噬菌體基因組長期存在于宿主細(xì)胞內(nèi)，沒有成熟噬菌體產(chǎn)生。 附著或整合在寄主細(xì)胞染色體上的溫和噬菌體的 DNA。 噬菌體感染細(xì)胞后，將其核酸整合（附著）到宿主的核 DNA上，并且可以隨宿主 DNA的復(fù)制而進(jìn)行同步復(fù)制，在一般情況下，不引起寄主細(xì)胞裂解的噬菌體。 溶原化