親和色譜ppt課件(編輯修改稿)
2025-06-01 22:19 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 IgG分子的主干部分） A蛋白不與抗體（ IgG）的抗原結(jié)合部位結(jié)合，而且任何抗體的 Fc片斷的結(jié)構(gòu)都非常相似， 因此 A蛋白可作為各種抗體的親和配基， 但不同抗體的結(jié)合常數(shù)有所不同。 （ 4）凝集素 凝集素 (lectin)是與糖特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)（酶和抗體除外）的總稱，大部分凝集素為多聚體，含有兩個以上的糖結(jié)合部位，不同的凝集素與糖結(jié)合的特異性不同。例如，常用做親和配基的 伴刀豆球蛋白 A(concanavalin A， con A)與葡聚糖和甘露糖的親和結(jié)合作用較強(qiáng)，而麥芽糖凝集素（ wheat germ agglutinin， WGA）與 N乙酰葡糖胺（ Nacetylglucosamine）的親和結(jié)合作用較強(qiáng)。 （ 5）輔酶和磷酸酰苷 各種脫氫酶和激酶需要在輔酶（ coenzyme）的存在下表現(xiàn)其生物催化活性，即脫氫酶和激酶與輔酶之間具有親和作用。輔酶主要有輔酶 Ⅰ （煙酰胺腺嘌呤二核苷酸，nicotinamideadenine dinucleotide， NAD）、輔酶 Ⅱ （煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸， NAD phosophate， NADP）和三磷酸腺苷（ adenosine triphosphate， ATP）等。這些輔酶可用做脫氫酶和激酶的親和配基。此外，磷酸腺苷（ adenosine 5’monophosphate， AMP）、二磷酸腺苷（ adenosine2’， 5’diphosphate， ADP）的腺苷部分與上述輔酶的結(jié)構(gòu)類似，與脫氫酶和激酶同樣具有親和結(jié)合作用，可用做這些酶的親和配基。 （ 6）過渡金屬離子 Cu2+、 Ni2+、 Zn2+、 Co2+等過渡金屬離子可與 N、 S和 O等供電原子（ electron donor atom）產(chǎn)生配位鍵，因此可與蛋白質(zhì)表面的組氨酸（ His）的咪唑基、半胱氨酸（ Cys）的巰基和色氨酸（ Trp）的吲哚基發(fā)生親和結(jié)合作用，其中以 His的咪唑基的結(jié)合作用最強(qiáng)。過渡金屬離子與咪唑基的結(jié)合強(qiáng)弱順序是 Cu2+＞ Ni2+＞ Zn2+≥Co2+ 。 （ 7）組氨酸 在各種氨基酸中，組氨酸的性質(zhì)比較獨(dú)特：具有弱疏水性、咪唑環(huán)為弱電性。因此組氨酸可與蛋白質(zhì)發(fā)生親和結(jié)合作用。雖然這種親和作用的機(jī)理尚不十分清楚，但利用固定化組氨酸吸附蛋白質(zhì)以及吸附蛋白的洗脫實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，靜電和疏水性相互作用均有可能參與親和結(jié)合。在鹽濃度較低和 pH約等于目標(biāo)蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的溶液中，固定化組氨酸的親和吸附作用最強(qiáng)，隨著鹽濃度增大，親和吸附作用降低。因此利用組氨酸為配基可親和分離等電點(diǎn)相差較大的蛋白質(zhì)，洗脫則可采用增大鹽濃度的梯度洗脫法。 （ 8）肝素 肝素（ heparin） 是存在于哺乳動物的肝、肺、腸等臟器中的酸性多糖類物質(zhì)，分子量一般為 5～ 30KD，具有抗凝血作用。肝素與脂蛋白、脂肪酶、甾體受體、限制性核酸內(nèi)切酶、抗凝血酶、凝血蛋白質(zhì)等具有親和作用，可用作這些物質(zhì)的親和配基。肝素的親和結(jié)合作用在中性 pH和低濃度鹽溶液中較強(qiáng)，隨著鹽濃度的增大結(jié)合作用降低 活化 基質(zhì)的活化是指通過對基質(zhì)進(jìn)行一定的化學(xué)處理，使基質(zhì)表面上的一些化學(xué)基團(tuán)轉(zhuǎn)變?yōu)橐子诤吞囟ㄅ潴w結(jié)合的活性基團(tuán)。 溴化氰活化法 溴化氰活化法是最常用的活化方法之一，活化過程主要是生成亞胺碳酸活性基團(tuán)，它可以和伯氨 (NH2)反應(yīng)，主要生成異脲衍生物。反應(yīng)如下： 介質(zhì)活化與耦聯(lián) 活化耦聯(lián)過程 20ml、 2mol/L碳酸氫鈉 +20g濕瓊脂糖，冰浴 45min 攪拌過程中加入溴化氰， 45℃ 10min 過濾，冷蒸餾水和緩沖液洗滌 加入溶于緩沖液中的配基，攪拌 2h， 4℃ 保存 這種方法的 缺點(diǎn) 是溴化氰活化法的基質(zhì)和配體偶聯(lián)后生成的異脲衍生物中氨基的
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