【正文】 氨基酸序列 ? SELEX技術(shù) 隨機(jī)序列 → PCR擴(kuò)增 → 特異性結(jié)合 → 重復(fù)篩選 親和洗脫 ? 目標(biāo)產(chǎn)物的洗脫方法有特異性洗脫和非特異性洗脫。通用性配體對生物大分子的專一性雖然不如特異性配體，但通過選擇合適的洗脫條件也可以得到很高的分辨率。因此，利用免疫親和層析法，特別是以單抗為配基的免疫親和層析法是高度純化蛋白質(zhì)類生物大分子的有效手段。 （ 8）肝素 肝素（ heparin） 是存在于哺乳動(dòng)物的肝、肺、腸等臟器中的酸性多糖類物質(zhì)，分子量一般為 5～ 30KD，具有抗凝血作用。spa cer a rmsSma l l l i gand ( 1,00 0)Ri sk of st er i c i nt er f er en ce wi t h b i nd i ng be t ween m at r i x an d t ar ge t m ol e cu l eOft en ne ed sp ac er ar mbut w atc h o ut fo r adsor pti on to the spac er !Spa c e r arm? 加入間臂的長度要恰當(dāng)，太短則效果不明顯；太長則容易由疏水性非特異吸附造成彎曲，反而降低吸附效率。 吸附蛋白質(zhì)量增多 選擇親和作用力較小的染料有利于解吸 吸附與解吸 ? 采用磷酸鹽緩沖液，在 常用解吸方法： ? 增加鹽濃度 ? 改變 pH值 ? 采用水溶性高聚物 ? 親和洗脫 ? 最后對雜蛋白進(jìn)行變性處理，洗滌、緩沖液平衡再生介質(zhì)。 基團(tuán)專一性大分子親和色譜 ? 指用對某一類結(jié)構(gòu)相近的物質(zhì)有親和性的大分子作為親和配基偶聯(lián)在色譜介質(zhì)上進(jìn)行的色譜技術(shù)。 ? 染料親和層析已成功的分離純化了多種酶 。另外還有甲苯磺酰氯法、雙功能試劑法。因此組氨酸可與蛋白質(zhì)發(fā)生親和結(jié)合作用。 在生物體內(nèi)蛋白酶的抑制劑可與蛋白酶的活性部位結(jié)合，抑制酶的活性，必要時(shí)保護(hù)生物組織不受蛋白酶的損害。 特異性配體一般是指只與單一或很少種類的蛋白質(zhì)等生物大分子結(jié)合的配體。 ? 生物分子間的 親和識別 包括抗體 抗原、酶 底物、激素 受體等親和作用。 基質(zhì)的選擇 理想的基質(zhì)應(yīng)符合下面的要求： 1．極低的非特異性吸附。 ? 理想的配基濃度為 110μmol/L。 （ 5）輔酶和磷酸酰苷 各種脫氫酶和激酶需要在輔酶（ coenzyme）的存在下表現(xiàn)其生物催化活性，即脫氫酶和激酶與輔酶之間具有親和作用。另外溴化氰活化的基質(zhì)與配體結(jié)合不夠穩(wěn)定，尤其是當(dāng)與小配體結(jié)合時(shí)，可能會出現(xiàn) 配體脫落 現(xiàn)象。 48 ? 將活化的介質(zhì)與金屬螯合劑偶聯(lián) ， 再用金屬離子溶液處理制成金屬螯合親和層析柱 。 色譜介質(zhì)制備： ? 將抗體通過化學(xué)方法結(jié)合在色譜介質(zhì)上 ? 抗體之間交聯(lián)形成不溶性衍生物 ? 單抗問世后 , 不少生物技術(shù)公司在研制適宜于培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞的生物反應(yīng)器及其培養(yǎng)基。 ? 隨著新的合成基質(zhì)和偶聯(lián)化合物的出現(xiàn)以及對免疫親和色譜研究的深入 , 必將使免疫親和色譜在工業(yè)性生產(chǎn)純化蛋白質(zhì)的應(yīng)用上逐漸得到發(fā)展。 ? 平衡緩沖溶液洗去未螯合的金屬離子 ? 加入適宜濃度的 NaCl和選擇合適 pH值有利于減少非特異性吸附。 環(huán)氧基活化法 在熱的濃堿溶液中 ， 多糖類化合物與環(huán)氧氯丙烷作用生成環(huán)氧化合物； 在堿性條件下 ， 其環(huán)氧化合物又能與氨基酸或蛋白質(zhì)上氨基偶聯(lián) 。這些輔酶可用做脫氫酶和激酶的親和配基。 ? 腺嘌呤 N6氨基接到載體上 ， 對脫氫酶和甘油激酶有吸附力 。 3．較好的理化穩(wěn)定性。 概述 ? 生物分子能夠區(qū)分結(jié)構(gòu)和性質(zhì)非常接近的其他分子，選擇性地與其中某一種分子相結(jié)合，生物分子間的這種 特異性