熒光標記蛋白的發(fā)展(編輯修改稿)
2025-05-30 18:45 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 化角度來講 , 所有已知的熒光素酶都是氧化酶 , 它利用分子氧來氧化底物 , 使產(chǎn)物分子處于一種激發(fā)態(tài)而發(fā)光。這種酶 /底物的相互作用是生物發(fā)光的普遍模式。 而 GFP 是第一個例外 , 它的 27kDa 的單體由 238 個氨基酸構成 , 本身就是一個生物發(fā)光系統(tǒng)。其熒光機制是自身含有的 , 綠色熒光的發(fā)射僅需分子氧的存在 , 而 無需其他外源輔因子 ② GFP 的表達 無種屬特異性 。不管細胞的種類和位置如何 , 都能夠自主表達 。 ③ GFP 還能克服穿透、毒素、光漂白等不利因素 [1]。 GFP 的熒光可以耐受福爾馬林的固定 , 因而可以制成長期保存的標本 。 ④ 對細胞內(nèi) GFP 的 檢測非常簡單 , 用顯微鏡、熒光計、熒光激活細胞分選儀等就可實現(xiàn) 4， GFP目前存在的 不足 ( 1) 檢測靈敏度還有待提高 , 而且其熒光信號強度方面的非線性性質(zhì)使得定量非常困難。 ( 2) 新生 GFP 折疊和加工 成為具有熒光活性形式的 過程十分緩慢 , 使得某些快速過程如轉(zhuǎn)錄的激活過程還難以用該方法進行研究。 ( 3) 紫外激發(fā)對某些 GFP 有光漂白和光破壞作用 , 導致熒光信號快速喪失。 ( 4) 多數(shù)生物具有微弱的自發(fā)熒光現(xiàn)象 , 并有著類似的激發(fā)和發(fā)射波長 , 這些熒光背景會影響某些 GFP 的檢測。 Saturday, May 28, 2022 FHP（ fluorescent highlighter proteins光激活蛋白即第二類熒光
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