【文章內(nèi)容簡介】 2bp ? 該增強子的特點如下： ? 對依賴于 TATA框的轉(zhuǎn)錄的增強效應高于不依賴 的情況 ? 距離效應 : 離 72bp越近的容易起始轉(zhuǎn)錄 ? 轉(zhuǎn)錄方向離開 72bp的起始序列優(yōu)先轉(zhuǎn)錄 ? 細胞類型的選擇：不同類型中作用有差異 表明其作用具有細胞或組織特異性（調(diào)節(jié)蛋白） （ 5） GC框 （ GC box） ? 位于－ 90附近，較常見的成分 ? 核心序列為 GGGCGG ? 可有多個拷貝，也可以正反兩方向排列 （ 6）其他元件 ? 八聚核苷酸元件 （ octamer element OCT元件 ） 一致序列為 ATTTGCAT ? KB元件 一致序列為 GGGACTTTCC ? ATF元件 一致序列為 GTGACGT ? 還有一些位于起始點下游的相關(guān)元件 （ 7） 不同元件的組合情況 不同元件的 數(shù)目、位置、和排列方向 均有差異 例如： SV40的早期啟動子中有 6個 GC框 小結(jié)： ★ 不同啟動子中 每種元件與轉(zhuǎn)錄起始點的距離不同 ★ 不同啟動子中的相應元件互相交換 ,形成的雜交 啟動子功能沒有變化 ★ 各種元件將相應的蛋白因子結(jié)合到啟動子上， 組成起始復合物， 蛋白因子間的相互作用決定 了轉(zhuǎn)錄的起始 RNApol Ⅲ 啟動子結(jié)構(gòu) （ 1） 分為三類，每種識別方式不同 a、 下游啟動子（內(nèi)部啟動子） 位于轉(zhuǎn)錄起始點的下游 5SRNA 和 tRNA基因 可分為兩類 b、 上游啟動子 snRNA 三、 真核生物轉(zhuǎn)錄的起始 ? 三種 RNApol均沒有對啟動子特異序列的識別能力 ? 轉(zhuǎn)錄起始過程需要很多的輔助因子 (轉(zhuǎn)錄因子 )參與 , 并且按一定順序與 DNA形成復合物 ,協(xié)助 RNApol定 位于轉(zhuǎn)錄起始點 RNApol Ⅰ TBP因子 RNApol Ⅱ ★ RNApol Ⅲ 的轉(zhuǎn)錄起始 ◎ 兩種內(nèi)部啟動子的轉(zhuǎn)錄起始需要三種輔助因子 TFⅢ A 一種含鋅指結(jié)構(gòu)的蛋白 TFⅢ B 由 TBP和 BRT、 B” TFⅢ C 至少 5個亞基以上 ? TBP 的作用 ★ 所有 RNApolⅢ 的轉(zhuǎn)錄起始都需要 TBP ★ 在 RNApolⅠ 的轉(zhuǎn)錄起始過程中 ,TBP是 SL1的 組份，起定位 RNApolⅠ 的作用 ★ RNApolⅡ 的轉(zhuǎn)錄起始由 TBP識別 TATA框 ? TBP 起定位作用 ,所以又稱定位因子 （ positioning factor） 第四節(jié) 轉(zhuǎn)錄延伸 Transcription Elongation 一、 起始到延伸的轉(zhuǎn)變 ★ 始于第一個磷酸二酯鍵的形成 ★ 伴隨著 DNA分子和酶分子構(gòu)象的變化 Prok. ? 起始時， σ因子有利于 β 和 β’亞基具有與 DNA專一 性結(jié)合所要求的構(gòu)象 ? 起始后 , σ因子解離 , β 和 β’ 亞基構(gòu)象發(fā)生變化 Euk. ? 多種輔助因子的共同作用來保證這一轉(zhuǎn)變 二、 延伸過程（ Prok） ★ 酶與產(chǎn)物 RNA不解離 ★ 底物 NTP不斷加到 RNA鏈的 3’OH 端 ★ 形成一個磷酸二酯鍵后，核心酶向前滑動 ★ 延伸位點不斷地接受新的 NTP， RNA鏈不斷延伸 ? 始終保持三元復合物的結(jié)構(gòu) 轉(zhuǎn)錄泡 ★ RNApol 結(jié)合和轉(zhuǎn)錄的 DNA模板區(qū)域，有 17bp左右 DNA形成解鏈區(qū) ★ 轉(zhuǎn)錄泡處雜交雙鏈很短 ? 胰臟 RNAase______其長度 10bp（不準確） ? 推測也就兩個核苷酸左右 拓撲學問題 Φ RNA合成過程中，轉(zhuǎn)錄泡兩端要發(fā)生拓撲轉(zhuǎn)變 ? RNApol 的前沿 ….. 解螺旋作用 ? RNApol 后端 …..DNA 的螺旋化 （保持 ………… ） Φ 超纏問題的解決靠 DNA旋轉(zhuǎn)酶 Φ RNADNA雜交鏈也要求作旋轉(zhuǎn)運動 旋轉(zhuǎn)酶 轉(zhuǎn)錄過程中的延宕 （ 1） RNA的合成速度大約 30 ~ 50 個核苷酸／秒 ,與蛋白 質(zhì)的合成速度相近（ 15個 AA／ sec） （ 2） 模板 DNA中 G／ C 的存在 延宕 （ G／ C后的 8~10 個核苷酸） 延宕作用在 RNA鏈的終止和釋放中起重要作用 思考 : 延宕發(fā)生的原因 ? 第五節(jié) 轉(zhuǎn)錄的終止 Transcription termination ☆ 終止過程： 酶停止添加底物 →→ 釋放 RNA鏈 →→ 酶解離 終止反應 … 雜合雙鏈的氫鍵斷裂， … 重新形成雙螺旋，酶的解離。 ☆ 終止子（ terminator）：在轉(zhuǎn)錄的過程中，提供轉(zhuǎn)錄終止 信號的 RNA序列 真正起終止作用的是 RNA序列－－－與啟動子不同 ☆ Euk. 都具有－－－－一種基因表達調(diào)控的手段 一、原核生物的終止子 終止子的種類 （ 1） 內(nèi)在終止子（不依賴 ρ因子的終止子） 體外實驗中，只有核心酶和終止子就足以使轉(zhuǎn)錄終止 （ 2） 依賴 ρ因子的終止子 蛋白質(zhì)輔助因子－－ ρ因子 存在時，核心酶終止轉(zhuǎn)錄 兩者有共同的結(jié)構(gòu)特征（序列差異） 不依賴 ρ因子的終止子 結(jié)構(gòu)特征 : ? 一是形成一個發(fā)夾結(jié)構(gòu) 莖 …. 7~20 bp 的 IR序列形成（富含 G/C） 環(huán) …. 中間不重復序列形成 發(fā)夾結(jié)構(gòu)的突變可阻止轉(zhuǎn)錄的終止 ? 二是 6 ~ 8 個連續(xù)的 U串（發(fā)夾結(jié)構(gòu)末端） 不依賴ρ終止子結(jié)構(gòu) IR IR 莖部富含 GC 依賴 ρ因子的終止子 （ 1） 結(jié)構(gòu) IR序列中的 G／ C 對含量較少 發(fā)夾結(jié)構(gòu)末端沒有固定特征 （ 2） 靠與 ρ的共同作用而實現(xiàn)終止 無連續(xù) U串 G/C含量較少 二、 原核生物轉(zhuǎn)錄的終止 不依賴 ρ因子的終止子終止轉(zhuǎn)錄 （ 1） 新生 RNA鏈發(fā)夾結(jié)構(gòu)形成 與 RNApol發(fā)生作用 造成高度延宕（典型的有 60秒左右） （ 2） RNApol暫停為終止提供了機會 ， 6 ~ 8個連續(xù)的 U 串可能為 RNApol與模板的解離提供了信號 RNA－ DNA之間的 rU－ dA 結(jié)合力較弱 阻止 RNA鏈的釋放 于是： RNA－ DNA解離 三元復合體解體 RNApol解離 轉(zhuǎn)錄終止 （ 3） 真正的終止點不固定，在 U串中的任何一處 （ 4） IR序列和 U串同等重要 IR中的 G／ C對含量的減少 U串的縮短或缺失 （ 5） DNA上與 U串對應的為富含 A／ T的區(qū)域 說明： AT富含區(qū)在轉(zhuǎn)錄的終止和起始中均起重要的作用 依賴 ρ因子的終止子終止轉(zhuǎn)錄 （ 1） 通讀（ read through）： 在依賴 ρ 因子的轉(zhuǎn)錄終止 過程中， RNApol 轉(zhuǎn)錄了 IR 序列之后，雖發(fā)生 一定時間的延宕，但如果沒有 ρ 因子存在，則 RNApol 會繼續(xù)轉(zhuǎn)錄 （ 2） ρ因子 a、 活性形式為六聚體 促進轉(zhuǎn)錄終止的活性， NTPase 活性 b、 RNA長度大于 50nt時，依賴 RNA的 NTPase活性最大 說明： ρ因子識別和結(jié)合的是 RNA （ 3） ρ因子對終止子的作用 a、 ρ因子與 RNA結(jié)合（終止子上游的某一處， RNA的 5’端 ） b、 ρ因子沿 RNA從 5’→3 ’ 移動（ NTP水解供 能 ） （終止子處的較長時間的延宕給 ρ因子追趕的機會 ） c、 ρ 因子與 RNApol 相互作用而造成轉(zhuǎn)錄的終止 ρ結(jié)合上來追