細菌培養(yǎng)及檢測ppt課件(編輯修改稿)
2025-05-30 01:37 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 時間的培養(yǎng)后，表面出現(xiàn)肉眼可見的單個細胞集團，稱為菌落。 液體培養(yǎng)基 表面生長 均勻混濁生長 沉淀生長 固體培養(yǎng)基：菌落、菌苔 六、討論 問題 答案 ，為什么要排盡滅菌鍋內(nèi)的冷空氣？ 在高壓鍋滅菌以前，如果國內(nèi)的冷空氣沒排盡，當(dāng)壓力上升到 98KPa，鍋內(nèi)的溫度就丌會達到應(yīng)有的溫度，導(dǎo)致滅菌丌徹底。 ，如果壓力未降到 0就打開排氣閥，會出現(xiàn)什么現(xiàn)象？為什么？ 如果壓力未降到 0就打開排氣閥，試管內(nèi)的培養(yǎng)基就會沖出管口，這是因為高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)外的壓力丌平衡所致。 焰旁進行？ 空氣中存在有大量的微生物，而接種燈得火焰旁能形成一個無菌區(qū)域，在這里操作，可以避免雜菌污染。 第三講 大腸桿菌 定義 革蘭氏陰性短桿菌，大小 1～ 3微米。周身 鞭毛 ，能運動 ，無 芽孢 。能發(fā)酵多種 糖類 產(chǎn)酸、產(chǎn)氣，是人和 動物腸道中的正常棲居菌 特性 大腸桿菌是細菌，屬于 原核生物 ；具有由 肽聚糖 組成的 細胞 壁，只含有 核糖體 簡單的細胞器，沒有細胞核有 擬核 ；細胞質(zhì)中的質(zhì)粒常用作基因工程中的 運載體 。 代謝 大腸桿菌的代謝類型是異養(yǎng)兼性厭氧型。 大腸桿菌 培養(yǎng)：在 LB液體培養(yǎng)基上擴大培養(yǎng) 分離： 滅菌 ↓ 倒平板 ↓ 培養(yǎng) ↓ 劃線分離 LB液體和固體培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿高壓蒸汽滅菌 將固體培養(yǎng)基倒入 4個滅菌后的培養(yǎng)皿中，制備平面培養(yǎng)基 在裝有液體培養(yǎng)基的三角瓶中接種大腸桿菌，培養(yǎng) 12h 平板劃線法 培養(yǎng)皿倒置， 37℃ 恒溫培養(yǎng) 12~24小時 大腸桿菌的培養(yǎng)和分離 菌種保存 培養(yǎng)基的配制 滅菌 超凈工件臺 倒平板 接種液體 培養(yǎng) 劃線分離 培養(yǎng) 大腸桿菌檢測方法和步驟 方法： 用平板涂布法將樣品稀釋后（每個水樣做 3個濃度）涂布到伊紅美藍培養(yǎng)基后，待長出菌落，觀察符合特征的群落，計算菌落數(shù)目，從而求出總數(shù)目。 培養(yǎng)基成分及其配置 成分：蛋白胨 10g、乳糖 10g 、磷酸氫二鉀 2g 、瓊脂 20~30g、蒸餾水 1000ml 、 2%伊紅水溶液 20ml、 %美藍水溶液 13ml 配置方法：先將瓊脂加至 900ml蒸餾水，加熱溶解，然后加入磷酸氫二鉀及蛋白胨，混勻使之溶解，再以蒸餾水補足至1000ml，調(diào)整 PH為 ~。趁熱用脫脂棉或絨布過濾，再加入乳糖，混勻后定量分裝于燒瓶內(nèi)，置高壓蒸汽滅菌器內(nèi)以115℃ 滅菌 20min，冷卻備用。臨用時加入乳糖并加熱溶化瓊脂，冷至 50～ 55℃ ，加入伊紅和美藍溶液，搖勻，傾注平板。 實驗步驟 — 涂布平板法 1 以無菌操作將檢樣 25mL(或 g)放于有 225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(nèi) (瓶內(nèi)予置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠 )或滅菌乳缽內(nèi) ,經(jīng)充分振搖或研磨做成 1:10的均勻稀釋液。以 8 00010 000 r/min的速度處理 1min,做成 1:10的均勻稀釋液。 2 用 1mL滅菌吸管吸取 1:10稀釋液 1mL,注入含有 9mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內(nèi) ,振搖試管混勻 ,做成 1:100的稀釋液。 3 另取 1mL滅菌吸管 ,按上條操作依次做 10倍遞增稀釋液 ,每遞增稀釋一次 ,換用 1支 1mL滅菌吸管。 ，待凝固后編號，然后用無菌吸管吸取 上。再用無菌刮鏟將菌液在平板上涂抹均勻，每個稀釋度用一個滅菌刮鏟，更換稀釋度時需將刮鏟灼燒滅菌。在由低濃度向高濃度涂抹時，也可以不更換刮鏟。將涂抹好的平板平放于桌上20— 30min，使菌液滲透入培養(yǎng)基內(nèi)，然后將平板倒轉(zhuǎn)，
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