【文章內(nèi)容簡介】 15 20 25 時間距離 8 11 18 25 cM距離 160 220 360 500 thr leu azi ton lac gal 三、接合重組 (六 )中斷雜交與作圖 基因精確定位 中斷雜交難確定緊密連鎖基因距離 中斷雜交中已知 lac比 ade先進入 F lac+ade+與內(nèi)基因間有 a,b兩種方式插入受體。在基本培養(yǎng)基上有 40個斑 ,顯然是兩基因沒有交換的親型 lac+ade+；在無 ade的完全培養(yǎng)基上有 10個斑 ,必然是兩基因間交換產(chǎn)生的重組型 lacade+。則重組率 =lacade+數(shù)占總數(shù)的百分率。 Rf(lacade) =(lacade+)/(lac+ade++lacade+) =(10)/(40+10)=20% =(lacade+)/ade+ 所以 ,1min時間距離 ≈20cM； lac+ade+ lac ade lac+ade首次轉入型 lac ade+重組型 基本培養(yǎng) 40斑 無 ade完全 10斑 大腸桿菌染色體呈環(huán)狀 三、接合重組 (六 )中斷雜交與作圖 Hfr菌株不同轉移基因的起點及方向也不同。 Hfr H是 thi→ gal→lac→pro→ton→azi→thr 逆時針方向轉移； Hfr1是 azi→ton →pro→ lac→gal→thr 順時針方向轉移，兩菌株轉移結果證明。 thi為起點逆時針方向 azi為起點順時針方向 pro為起點順時針方向 （一）性導因子 （ F`factor） 當 F因子不規(guī)則環(huán)去，攜帶有細菌染色體片斷時產(chǎn)生含有細菌基因的 F因子，稱 F`factor。 F因子不同，插入細菌染色體位置不同，帶走細菌基因也不同。則形成的 F`因子也就不同。 F+與 Hfr 能相互轉變 F因子與寄主基因組交換、整合形成 Hfr，與菌株染色體成環(huán)剪切和環(huán)出 會形成 F+為可逆過程 四、性導重組 （ sex duction rebination ） 改變受體性別 三者差異：因 F `與 F+均能使 F變成 F+(環(huán)狀 DNA獨立 )，但 Hfr不能 (插入細菌基因組內(nèi) ) 基因高頻轉移 三者差異： F`與 Hfr均攜帶細菌基因， 基因隨 F因子高頻轉移；F+未攜帶細菌基因， F因子轉移快但基因轉移率低 受體形成部分二倍體 三者差異： F`與 Hfr因攜帶的細菌基因，能與細菌基因組配對形成部分二倍體， F+卻不能。 （二） F’作用特點及與 F+、 Hfr差異比較 四、性導重組 （ sex duction rebination ） （三）性導 (sex duction)概念與過程 四、性導重組 （ sex duction rebination ） F`因子將甲物種基因轉入乙物種并表達的過程。 概念 過程 F`攜帶甲基因 → 侵入 乙 → 部分二倍體 → 內(nèi)外基因間重組 → 攜帶基因表達。 F+攜帶甲基因 F’ 浸染乙物種 F’ 甲基因在乙表達 將甲基因插入乙 部分二倍體 （三）性導（ sex duction） 四、性導重組 （ sex duction rebination ） ① 作基因載體： F`因子 能 自主復制、穩(wěn)定遺傳。 ② 顯隱性研究： F`因子進入 受體后，部分二倍體中隱性基因不表達，離開受體隱性基因能表達 。 ③ 互補性測驗： F`因子進入受體后，內(nèi)外基因功能不互補是同一順反子，互補是不同的順反子。 ④ 基因作圖：內(nèi)外基因間重組進行基因定位。 性導作圖原理 連鎖基因間距離愈近，并發(fā)轉導 (cosex duction)頻率愈高，反之則反。據(jù)并發(fā)轉導頻率進行基因定位，性導作圖方法和步驟在轉導作圖中講。 性導的意義 五、轉導重組與作圖（ transduction rebinating and mapping） (一 )轉導重組的發(fā)現(xiàn)及鑒定 ： Lederberg， 1951，鼠傷寒沙門氏菌 ： ⑴ U形管分開兩菌株仍有 wt。說明不是接合、性導重組； ⑵加二硝基苯或 DNA酶后仍有 wt。說明不是轉化重組； ⑶ P22抗性品系的 LT2菌株替代 LT2無 wt。說明親本 LT2中有 P22 ⑷ 親本 LT2中加 P22血清也無 wt。證明通過濾孔的是 P22質粒。 P22是沙門氏菌溫和型噬菌體，又稱過濾因子。它能裂解 LT2菌株，包裝 LT2基因進入 LT22。 以噬菌體為媒介轉遞基因并表達稱轉導重組 (transduction rebination) LT22(phetrptyrhis) LT2(phe+trp+tyr+his+) 混合 4h后 基本培養(yǎng)基培養(yǎng) 野生型菌斑率高達 105 ，為什么？ ① DavisU形管分開雙親無野生型，不分開有野生型，說明是接合或性導重組。 ② DavisU形管分開雙親后有野生型，可能是轉導或轉化重組。添加二硝基苯、氯霉素或 DNA酶后無野生型產(chǎn)生說明是轉化重組，反之為轉導重組。 ③ DavisU形管分開雙親后有野生型，添加過濾因子自身血清前有野生型、添加后無野生型為轉導重組。 五、轉導重組與作圖 (二 )轉導、性導、轉化與接觸重組的區(qū)別 (三 )普遍性轉導 (general transduction) 五、轉導重組與作圖 普遍性轉導 ： phage傳遞供體 基因組任一 基因，并在受體表達 轉導過程 侵染 供體 → 降解染色體 → 誤裝形成轉導子→ 釋放再侵染 → 部分二倍體 → 轉導子命運：①外基因降解稱丟失；②外基因不復制稱流產(chǎn)；③外基因被整合，供體性狀表達。 ① 普遍性：供體基因組內(nèi)任一基因均有可能被轉導，隨機性 ②低頻性：多為 3 105 ，該頻率來由： 沙門氏菌染色體約 23千個基因，噬菌體頭部能裝 2030個基因，占 1%；沙門氏菌中有轉導能力的約 %。 所以，基因普遍性轉導頻率 = 3 105 。 (三 )普遍性轉導