dna的三級(jí)結(jié)構(gòu)ppt課件(編輯修改稿)
2025-05-28 18:05 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 粘性未端，平整末端 （ 2）限制性內(nèi)切酶的命名 EcoRI （ 3）限制性內(nèi)切酶舉例 （四）非專一性核酸酶類（ nonspecific nuclease） 介紹二種外切酶 1．蛇毒磷酸二酯酶（ venom phosphodiesterase） P P P O HP5?核苷酸 P P O HP P O H+蛇毒磷酸二酯酶對(duì)末端磷酸基有嚴(yán)格的要求 寡核苷酸 水解速度 最快 較慢，水解速度降低 10倍 最慢，幾乎不作用，水解速度再降低 100倍 P P P O HPP P P O HH OP P P PH O橘青霉磷酸二酯酶專一性： 與蛇毒磷酸二酯酶相同 2．牛脾磷酸二酯酶 對(duì)末端磷酸基的要求與蛇毒磷酸二酯酶相反 P P P PH O PPHO+ P P PH O P3180。核苷酸 （五）磷酸單酯酶 將單核苷酸或寡核苷酸末端的磷酸單酯鍵切開(kāi)，得到磷酸和其它產(chǎn)物 1．特異性磷酸單酯酶 2．非特異性磷酸單酯酶 磷酸基無(wú)論在 3180?；?5180。位，都能水解，如 E. coli磷酸單酯酶 （ 1） 磷酸基連在 5180。位才能水解，如牛精液 5180。核苷酸酶 NP（ 2） 磷酸基連在 3180。位才能水解，如麥芽 3180。一核苷酸酶 NP（一）一般性質(zhì)：分子大小、性狀、溶解度。 分子大?。?DNA Mr 106～ 1010或更大 性狀： DNA為白色纖維狀固體，而 RNA為白色粉末。 溶解度： DNA和 RNA均不溶于一般的有機(jī)溶劑，微溶于水， 但它們的鈉鹽在水中溶解度較大。 RNA Mr 104～ 106或更大 七、核酸的性質(zhì)和最常用的研究方法 （二）粘度 （三）酸堿性質(zhì) （四）紫外吸收 由于核酸中堿基的共軛雙鍵，所以對(duì)紫外有強(qiáng)烈吸收，最大吸收峰在 260nm附近，利用這一特性可進(jìn)行核酸的定量測(cè)定。 1．紫外分光光度法 首先根據(jù) A260/A280的比值判斷核酸樣品的純度 純 DNA： A260/A280= 純 RNA： A260/A280= （若樣品中含有雜蛋白或苯酚，則 A260/A280比值明顯降低） 純的核酸樣品可根據(jù) 260nm的光吸收值算出其含量 若 260nm光吸收值為 1相當(dāng)于 50μg/ml雙螺旋 DNA 或相當(dāng)于 40μg/ml單鏈 DNA或 RNA 或相當(dāng)于 20μg/ml寡核苷酸。 2．摩爾磷消光系數(shù)（ molar absorptivity）法 A：樣品的光吸收值 C：每升溶液中磷的摩爾數(shù) L：光徑 ∵ ∴ L??? CA)p(8)磷的原子量( 3 0 . 9每升中磷的重量C ( g ) W?LLL WWACA)p( ??????在 ； DNA的 為～ 6600, RNA的 為 7700～ 7800。 )p(?)p(?：摩爾磷消光系數(shù)，也稱摩爾磷吸光系數(shù) )p(?知道了磷的含量就可知核酸的含量 3．增色效應(yīng)與減色效應(yīng) 增色效應(yīng)（ hyperchromic effect） 減色效應(yīng)（ hypochromic effect） （五）沉降特性 1．核酸浮力密度的測(cè)定 浮力密度：經(jīng)密度梯度沉降平衡法測(cè)出的密度 氯化絕（ CsCl）密度梯度沉降平衡 用 1～ 2個(gè)已知浮力密度的標(biāo)準(zhǔn) DNA樣品作參考 1020220 10)rr( ????????式中 ρ：未知 DNA的密度 ρ0：標(biāo)準(zhǔn) DNA的密度 ω：角速度（弧度 /秒） r： 未知 DNA與轉(zhuǎn)軸之間的距離 r0：已知 DNA與轉(zhuǎn)軸之間的距離 2． DNA中 GC含量的測(cè)定 GC對(duì)的含量與浮力密度之間呈正比關(guān)系 RolfeMeselson導(dǎo)出了如下公式： ρ=（ GC%） +(g/cm3) 知道了浮力密度就可計(jì)
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