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正文內(nèi)容

dna的三級結(jié)構(gòu)ppt課件(編輯修改稿)

2025-05-28 18:05 本頁面
 

【文章內(nèi)容簡介】 粘性未端,平整末端 ( 2)限制性內(nèi)切酶的命名 EcoRI ( 3)限制性內(nèi)切酶舉例 (四)非專一性核酸酶類( nonspecific nuclease) 介紹二種外切酶 1.蛇毒磷酸二酯酶( venom phosphodiesterase) P P P O HP5?核苷酸 P P O HP P O H+蛇毒磷酸二酯酶對末端磷酸基有嚴(yán)格的要求 寡核苷酸 水解速度 最快 較慢,水解速度降低 10倍 最慢,幾乎不作用,水解速度再降低 100倍 P P P O HPP P P O HH OP P P PH O橘青霉磷酸二酯酶專一性: 與蛇毒磷酸二酯酶相同 2.牛脾磷酸二酯酶 對末端磷酸基的要求與蛇毒磷酸二酯酶相反 P P P PH O PPHO+ P P PH O P3180。核苷酸 (五)磷酸單酯酶 將單核苷酸或寡核苷酸末端的磷酸單酯鍵切開,得到磷酸和其它產(chǎn)物 1.特異性磷酸單酯酶 2.非特異性磷酸單酯酶 磷酸基無論在 3180?;?5180。位,都能水解,如 E. coli磷酸單酯酶 ( 1) 磷酸基連在 5180。位才能水解,如牛精液 5180。核苷酸酶 NP( 2) 磷酸基連在 3180。位才能水解,如麥芽 3180。一核苷酸酶 NP(一)一般性質(zhì):分子大小、性狀、溶解度。 分子大小: DNA Mr 106~ 1010或更大 性狀: DNA為白色纖維狀固體,而 RNA為白色粉末。 溶解度: DNA和 RNA均不溶于一般的有機(jī)溶劑,微溶于水, 但它們的鈉鹽在水中溶解度較大。 RNA Mr 104~ 106或更大 七、核酸的性質(zhì)和最常用的研究方法 (二)粘度 (三)酸堿性質(zhì) (四)紫外吸收 由于核酸中堿基的共軛雙鍵,所以對紫外有強(qiáng)烈吸收,最大吸收峰在 260nm附近,利用這一特性可進(jìn)行核酸的定量測定。 1.紫外分光光度法 首先根據(jù) A260/A280的比值判斷核酸樣品的純度 純 DNA: A260/A280= 純 RNA: A260/A280= (若樣品中含有雜蛋白或苯酚,則 A260/A280比值明顯降低) 純的核酸樣品可根據(jù) 260nm的光吸收值算出其含量 若 260nm光吸收值為 1相當(dāng)于 50μg/ml雙螺旋 DNA 或相當(dāng)于 40μg/ml單鏈 DNA或 RNA 或相當(dāng)于 20μg/ml寡核苷酸。 2.摩爾磷消光系數(shù)( molar absorptivity)法 A:樣品的光吸收值 C:每升溶液中磷的摩爾數(shù) L:光徑 ∵ ∴ L??? CA)p(8)磷的原子量( 3 0 . 9每升中磷的重量C ( g ) W?LLL WWACA)p( ??????在 ; DNA的 為~ 6600, RNA的 為 7700~ 7800。 )p(?)p(?:摩爾磷消光系數(shù),也稱摩爾磷吸光系數(shù) )p(?知道了磷的含量就可知核酸的含量 3.增色效應(yīng)與減色效應(yīng) 增色效應(yīng)( hyperchromic effect) 減色效應(yīng)( hypochromic effect) (五)沉降特性 1.核酸浮力密度的測定 浮力密度:經(jīng)密度梯度沉降平衡法測出的密度 氯化絕( CsCl)密度梯度沉降平衡 用 1~ 2個(gè)已知浮力密度的標(biāo)準(zhǔn) DNA樣品作參考 1020220 10)rr( ????????式中 ρ:未知 DNA的密度 ρ0:標(biāo)準(zhǔn) DNA的密度 ω:角速度(弧度 /秒) r: 未知 DNA與轉(zhuǎn)軸之間的距離 r0:已知 DNA與轉(zhuǎn)軸之間的距離 2. DNA中 GC含量的測定 GC對的含量與浮力密度之間呈正比關(guān)系 RolfeMeselson導(dǎo)出了如下公式: ρ=( GC%) +(g/cm3) 知道了浮力密度就可計(jì)
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