dna的三級(jí)結(jié)構(gòu)ppt課件(參考版)
2025-05-04 18:05本頁面
【正文】 破細(xì)胞 * 去蛋白質(zhì) 酒精沉淀 去 RNA 柱層析，電泳 密度梯度離心 去多糖 （三） RNA的提取 1．不同種類 RNA的提取 2．大分子 RNA的提取 （ 1）酚提取 （ 2）酚 氯仿 SDS法 3． mRNA的提取 4．工業(yè)上制備 RNA （ 1）稀堿法 （ 2）濃鹽法 清 液 調(diào) p H 至 2 . 5 R N A ↓酵 母稀 堿法1 %N a OH濃 鹽法1 0 %N a Cl破 細(xì) 胞 壁釋 放 R N A中 和 后 離 心除 去 菌 體離 心（四）核酸純度鑒定 （五）核酸含量的測(cè)定 （六）核苷酸的制備 1．堿水解 2．酶水解 。 可用 1mol/LNaCl溶液提取 DNP。 （二）大分子 DNA的提取 1．材料的選擇 2．細(xì)胞破碎 3． DNA蛋白質(zhì)（ DNP）的提取 真核細(xì)胞 DNA與蛋白質(zhì)結(jié)合成核蛋白（ DNP）， RNA與蛋白質(zhì)結(jié)合成 RNP，而且 DNP和RNP常常混在一起。 （ 2）加強(qiáng)的蛋白變性劑如硫氰酸胍、異硫氰酸胍等。 抑制 DNase： 可加檸檬酸鈉、 EDTA等金屬螯合劑；或加去污劑 十二烷基硫酸鈉（ SDS）；或加蛋白變性劑。 2．防止過酸、過堿，避免劇烈攪拌。 Ea a + t R N A a a t R N A + EtRNA怎樣識(shí)別 mRNA上相應(yīng)的密碼子 （ 3） rRNA的作用 詳見網(wǎng)上參考材料 九、核酸的分離、純化和核苷酸的制備 （一）核酸的分離、提取通則 為了得到完整的大分子核酸，一般要注意 3點(diǎn) : 1．保持低溫（ 0186。 tRNA必須識(shí)別相應(yīng)的氨基酸和識(shí)別 mRNA上相應(yīng)的密碼子。 （一） DNA的生物功能 1． DNA與遺傳 （ 1） DNA是主要的遺傳物質(zhì) 間接證據(jù) 直接證據(jù) 八、核酸的生物功能 ① 細(xì)菌轉(zhuǎn)化作用 （ transformation ） 肺炎球菌（ pneumococcus） 1928年細(xì)菌學(xué)家 Griffith 細(xì)菌毒性實(shí)驗(yàn) 1944年 Avery細(xì)菌轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn) 轉(zhuǎn)化作用： 轉(zhuǎn)化作用的物質(zhì)稱轉(zhuǎn)化因子 從一種細(xì)菌中得到 DNA通過一定途徑進(jìn)入另一種細(xì)菌，從而引起后者遺傳特性的改變。 凝膠電泳兼有分子篩效應(yīng)和電荷效應(yīng) 1．瓊脂糖凝膠電泳（ agarose gel electrophoresis） 瓊脂糖凝膠電泳的遷移率主要與分子大小、膠濃度、核酸構(gòu)象、電流等有關(guān)。 （ 2）測(cè)定分子大小。 單鏈 DNA與單鏈 RNA雜交（ DNARNA） 單鏈 RNA與單鏈 RNA雜交（ RNARNA） 用硝酸纖維素膜作為支持物進(jìn)行雜交 1975年英國 E. M. Southern首創(chuàng)的 Southern blotting（ Southern印跡） 原理 方法 探針：作為檢測(cè)用的已知 DNA序列或 RNA序列的片段 1977年 Northern blotting （ Northern印跡） Western blotting（ Western 印跡） （七）凝膠電泳 核酸研究中最常用的方法 優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)單、快速、靈敏、成本低。 3．雜交（ hybridization） 核酸的雜交：是指不同來源的單鏈核酸之間可通過 堿基互補(bǔ)形成雙螺旋結(jié)構(gòu)。 )p(?)p(?：摩爾磷消光系數(shù)，也稱摩爾磷吸光系數(shù) )p(?知道了磷的含量就可知核酸的含量 3．增色效應(yīng)與減色效應(yīng) 增色效應(yīng)（ hyperchromic effect） 減色效應(yīng)（ hypochromic effect） （五）沉降特性 1．核酸浮力密度的測(cè)定 浮力密度：經(jīng)密度
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