毛細管電泳課件(2)(編輯修改稿)
2025-05-28 02:52 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 近電中性，電滲流接近零。分析時，可采用緩沖溶液來穩(wěn)定并調(diào)控 pH。 ② 陰離子的影響 在其它條件相同，緩沖液濃度相同而陰離子不同時，毛細管中的電流有較大差別，產(chǎn)生的電滲流不同。 （ 4）溫度的影響 ? 毛細管內(nèi)溫度升高，使溶液的黏度下降，電滲流增大。 ? 溫度變化來自于“焦耳熱”； ? 焦耳熱 ：毛細管溶液中有電流通過時，產(chǎn)生的熱量； ? CE中的焦耳熱與背景電解質(zhì)的摩爾電導(dǎo)、濃度及電場強度成正比。 ? 溫度每變化 1度，將引起背景電解質(zhì)溶液黏度變化2%～ 3%； （ 5）添加劑的影響 ?加入濃度較大的中性鹽，如 K2SO4，溶液離子強度增大，使溶液的黏度增大，電滲流減小。 ?加入表面活性劑，可改變電滲流的大小和方向； ?加入不同陽離子表面活性劑來控制電滲流。 ?加入陰離子表面活性劑，如十二烷基硫酸鈉（ SDS），可以使壁表面負電荷增加， zeta電勢增大，電滲流增大； ?加入有機溶劑如甲醇、乙腈，使電滲流增大。 三、 CE中的參數(shù)與關(guān)系式 Vapto tllEaplaplt?????? ???d e td e td e t（保留時間） CE兼具有電化學(xué)的特性和色譜分析的特性。有關(guān)色譜理論也適用。 Vap是表觀遷移速度； μ ap是表觀淌度； ldet 是毛細管有效長度； ltot 是毛細管總長度 （塔板數(shù)） 在 CE中，僅存在縱向擴散， σ 2=2Dt 擴散系數(shù)小的溶質(zhì)比擴散系數(shù)大的分離效率高，這是分離生物大分子的依據(jù)。 22/1d etd et 。22 ???????????WtnDElDLVln Rapap ?? 1212 )(2WWttR???四、影響分離效率的因素 —區(qū)帶展寬 1. 縱向擴散的影響 在 CE中，縱向擴散引起的峰展寬： σ 2=2Dt 由擴散系數(shù)和遷移時間決定。大分子的擴散系數(shù)小，可 獲得更高的分離效率。 2. 進樣的影響 當(dāng)進樣塞長度太大時，引起的峰展寬大于縱向擴散。分離效率明顯下降；理想情況下，進樣塞長度 ： Winj= (24D t )1/2 實際操作時進樣塞長度小于或等于毛細管總長度的1%～ 2%。 電泳過程產(chǎn)生的焦耳熱可由下式計算： ?m： 電解質(zhì)溶液的摩爾電導(dǎo)； I：工作電流： cm：電解質(zhì)濃度； 散熱過程中，在毛細管內(nèi)形成溫度梯度（中心溫度高），破壞了塞流，導(dǎo)致區(qū)帶展寬。 改善方法： （ 1）減小毛細管內(nèi)徑； （ 2）控制散熱； 22π EcΛLrIVQbm??? 蛋白質(zhì)、多肽帶電荷數(shù)多，吸附問題特別嚴(yán)重，是目前分離分析該類物質(zhì)的一大 難題 。 細內(nèi)徑毛細管柱，一方面有利于散熱，另一方面比表面積大，又增加了溶質(zhì)吸附的機會。 減小吸附的方法和途徑 ： 加入兩性離子代替強電解質(zhì)，兩性離子一端帶正電，另一端帶負電，帶正電一端與管壁負電中心作用，濃度約為溶質(zhì)的 1001000倍時，抑制對蛋白質(zhì)吸附，又不增加溶液電導(dǎo)，對電滲流影響不大。 第三節(jié) 毛細管電泳儀 一、儀器主要部件 （ 1） 0～ 30 kV 穩(wěn)定、連續(xù)可調(diào)的直流電源； （ 2）具有恒壓、恒流、恒功率輸出； （ 3）電場強度程序控制系統(tǒng)； （ 4）電壓穩(wěn)定性： %； （ 5）電源極性易轉(zhuǎn)換 ； 2. 毛細管 毛細管是 CE分離的心臟 。理想的毛細管必須是電絕緣 、紫外 /可見光透明且富有彈性的 ，目前可以使用的有玻璃 、 熔融石英或聚四氟乙烯塑料等 。 毛細管內(nèi)徑
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