【文章內(nèi)容簡介】 9 m L 1 0 m L 1 ： 10 1 1 0 1 ： 10 2 10 2 1 0 3 10 4 10 5 無菌水 得到不同稀釋度 （ 10x）菌液 第一步：菌樣稀釋 1. 稀釋平板計數(shù)法 —固體培養(yǎng)法 10 2 10 3 10 4 10 5 第三步：培養(yǎng) 每一個細菌會生成一個菌落 稀釋度過低 ，菌落密集無法計數(shù) 可以計數(shù)， 但數(shù)量過多 ， 費時費力 數(shù)量合適，統(tǒng)計計算，作為結果 數(shù)量太少， 誤差因素太大 ，不做計數(shù) 各取 1ml， 均勻 涂布 于冷固體培養(yǎng)基平板上或與溫熱液態(tài)固體培養(yǎng)基混合 冷卻 。 第二步：接種平板 40 41 存在不足：一個菌落可能是多個細胞一起形成，有時兩個或多個細胞連在一起也形成一個菌落。 ? 一般計數(shù)平板的細菌生長菌落數(shù)以 30~300個為宜 。 細菌數(shù)量 =？ 細菌數(shù)量 =數(shù)出的菌落數(shù) /稀釋度 例如： 105稀釋度時菌落數(shù)為 125個 細菌數(shù)量 =125/105= 107個 /mL 平板計數(shù)法是采用最廣的一種活菌計數(shù)法 如國標法水中 細菌總數(shù) 的測定 。 注意： 作空白及取平行樣 （ 2～ 3組 ） 均值減小誤差 ? 第四步 ： 計數(shù) 42 稀釋度過低 ， 菌落密集無法計數(shù) 可以計數(shù)， 但數(shù)量過多 ， 費時費力 數(shù)量合適，統(tǒng)計計算，作為結果 數(shù)量太少， 誤差因素太大 ，不做計數(shù) 50 (三 )重量法 ? 已知什么條件 通過測定細菌群體重量知道其數(shù)量 ？ ? 已知 單個細菌的平均重量 ? 細菌的 濕 重量＝ 1015~1011g/個細胞 ? 真 核單細胞微生物重量為 1011~107g/個細胞 。 ? 干重約為 濕重的 10％ ~20％ 。 方法： 分離可采用離心法或過濾法， 含菌水樣在105～ 110℃ 下進行干燥恒重 （ 本質測水中懸浮物重量 MLSS） 稱取干燥后的重量，以此代表細菌生長量的多少。 1. 干重法 51 ? 水處理工程設施中的細菌生長量通常采用這種細胞干重測定法 。 這種方法實際上測得的是水中懸浮物重量 ， 它是將細菌作為所有懸浮物來進行測定 ， 如果水中非細菌類的懸浮物很多的話 ， 勢必會嚴重干擾細菌計數(shù)的結果 。 ? 非細菌的懸浮物通常大部分是一些固體無機物及少量的油類等有機物 ， 有機物與無機物在物理性質上有一個最大的區(qū)別 ， 即在很高的溫度下 (550℃ )灼燒 ， 有機物會被空氣中的氧氣徹底氧化為 CO2和H2O， 只留下非常少的殘渣 ， 而無機物化學性質穩(wěn)定 ， 高溫下不會分解 ， 這樣我們可 以利用高溫灼燒的方法來區(qū)分細菌與固體無機物 。 52 （ 1）懸浮物中絕大多數(shù)為細菌時 ? 細胞數(shù)目 =MLSS247。 個體細菌的平均干重量 離心沉淀 濾膜過濾 計算 105~110 ℃ 下進行干燥 恒重 稱重 或 MLSS懸浮物 53 （ 2）除細菌外還有大量無機懸浮物時 ? W無 ? MLVSS揮發(fā)性懸浮物 =MLSS － W無 =細菌群體干重 ? 細胞數(shù)目 = MLVSS247。 個體細菌的平均干重量 550 ℃ 下灼燒 稱重 105~110 ℃ 下進 行干燥恒重 稱重 MLSS 過多的有機物懸浮物會對測定結果干擾很大，此時不能用重量法，應改用其他方法?？傮w來說 重量法 方法 誤差較大 ，一般只作為菌數(shù)粗略估算。 如活性污泥測定 以重量 MLSS、 MLVSS （揮發(fā)性懸浮固體） 間接表示細菌數(shù)量 54 N量法 大多數(shù)生物包括細菌，細胞內(nèi)的 蛋白質氮含量 比較穩(wěn)定，一般為蛋白質干重 15％ ~17％， 平均為 16％ 。 ? 同種細菌的 DNA含量一致 ，可通過測定 DNA的含量來表示細菌的生長量 少量純細菌培養(yǎng)時細菌數(shù)量的測定。 精確性非常高， 對樣品純度以及儀器和人員的要求較高， 56 一、溫度 二、 pH值 三、氧化還原電位 四、溶解氧 五、滲透壓 六、光線 七、化學藥劑 第二節(jié) 微生物的生存因子 57 一、溫度 溫度主要通過影響細菌 細胞膜的流動性 和 生物大分子的活性 來影響細菌的生命活動。一方面，隨著 T↑ ，細胞內(nèi)酶反應速度加快，代謝和生長也相應加快；另一方面隨著 T↑↑, 生物活性物質如核酸、蛋白質發(fā)生變性，細胞功能下降，甚至死亡。 生 長 速 率 0 溫度℃ 最低溫度 最適溫度 最高溫度 適宜溫度： 生長速率最高時的溫度，適宜溫度因微生物而異；同一種菌、不同的生長過程適宜溫度也不同。 58 根據(jù)細菌適宜溫度的不同，可將細菌分為四大類 ， 嗜冷菌、嗜中溫菌、嗜熱菌及嗜超熱菌 。 細菌的生長溫度范圍 細菌 最低溫度℃ 最適溫度℃ 最高溫度 嗜冷菌 5 ～ 0 5 ～ 10 20 ～ 30 嗜中溫菌 5 ～ 10 25 ～ 40 45 ～ 50 嗜熱菌 3 0 50 ～ 60 70 ～ 80 嗜超熱菌 55 以上 70 ～ 1 0 5 1 1 0 ～ 1 1 3 ? 廢水中的細菌一般都是嗜中溫菌 ， 最適溫度多在30℃ 左右 ， 嗜冷菌和嗜熱菌占少數(shù) 。 ? 廢水生物處理中微生物的適宜溫度在 30℃ 左右 。 59 高溫滅菌、低溫抑菌 高 溫 干熱滅菌 濕熱滅菌 火焰滅菌★ 烘箱內(nèi)干燥熱空氣滅菌★ 巴斯德消毒法 間歇滅菌法 高壓蒸汽滅菌法 ★★ ： 高溫 蛋白質凝固變性，酶失活。 溫度對細菌的影響： 高溫消毒 煮沸消毒法 60 （ 1 ）干熱滅菌 (dry heat ste