【文章內(nèi)容簡介】 9 m L 1 0 m L 1 ： 10 1 1 0 1 ： 10 2 10 2 1 0 3 10 4 10 5 無菌水 得到不同稀釋度 （ 10x）菌液 第一步：菌樣稀釋 1. 稀釋平板計(jì)數(shù)法 —固體培養(yǎng)法 10 2 10 3 10 4 10 5 第三步：培養(yǎng) 每一個(gè)細(xì)菌會生成一個(gè)菌落 稀釋度過低 ，菌落密集無法計(jì)數(shù) 可以計(jì)數(shù)， 但數(shù)量過多 ， 費(fèi)時(shí)費(fèi)力 數(shù)量合適，統(tǒng)計(jì)計(jì)算，作為結(jié)果 數(shù)量太少， 誤差因素太大 ，不做計(jì)數(shù) 各取 1ml， 均勻 涂布 于冷固體培養(yǎng)基平板上或與溫?zé)嵋簯B(tài)固體培養(yǎng)基混合 冷卻 。 第二步：接種平板 40 41 存在不足：一個(gè)菌落可能是多個(gè)細(xì)胞一起形成，有時(shí)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起也形成一個(gè)菌落。 ? 一般計(jì)數(shù)平板的細(xì)菌生長菌落數(shù)以 30~300個(gè)為宜 。 細(xì)菌數(shù)量 =？ 細(xì)菌數(shù)量 =數(shù)出的菌落數(shù) /稀釋度 例如： 105稀釋度時(shí)菌落數(shù)為 125個(gè) 細(xì)菌數(shù)量 =125/105= 107個(gè) /mL 平板計(jì)數(shù)法是采用最廣的一種活菌計(jì)數(shù)法 如國標(biāo)法水中 細(xì)菌總數(shù) 的測定 。 注意： 作空白及取平行樣 （ 2～ 3組 ） 均值減小誤差 ? 第四步 ： 計(jì)數(shù) 42 稀釋度過低 ， 菌落密集無法計(jì)數(shù) 可以計(jì)數(shù)， 但數(shù)量過多 ， 費(fèi)時(shí)費(fèi)力 數(shù)量合適，統(tǒng)計(jì)計(jì)算，作為結(jié)果 數(shù)量太少， 誤差因素太大 ，不做計(jì)數(shù) 50 (三 )重量法 ? 已知什么條件 通過測定細(xì)菌群體重量知道其數(shù)量 ？ ? 已知 單個(gè)細(xì)菌的平均重量 ? 細(xì)菌的 濕 重量＝ 1015~1011g/個(gè)細(xì)胞 ? 真 核單細(xì)胞微生物重量為 1011~107g/個(gè)細(xì)胞 。 ? 干重約為 濕重的 10％ ~20％ 。 方法： 分離可采用離心法或過濾法， 含菌水樣在105～ 110℃ 下進(jìn)行干燥恒重 （ 本質(zhì)測水中懸浮物重量 MLSS） 稱取干燥后的重量，以此代表細(xì)菌生長量的多少。 1. 干重法 51 ? 水處理工程設(shè)施中的細(xì)菌生長量通常采用這種細(xì)胞干重測定法 。 這種方法實(shí)際上測得的是水中懸浮物重量 ， 它是將細(xì)菌作為所有懸浮物來進(jìn)行測定 ， 如果水中非細(xì)菌類的懸浮物很多的話 ， 勢必會嚴(yán)重干擾細(xì)菌計(jì)數(shù)的結(jié)果 。 ? 非細(xì)菌的懸浮物通常大部分是一些固體無機(jī)物及少量的油類等有機(jī)物 ， 有機(jī)物與無機(jī)物在物理性質(zhì)上有一個(gè)最大的區(qū)別 ， 即在很高的溫度下 (550℃ )灼燒 ， 有機(jī)物會被空氣中的氧氣徹底氧化為 CO2和H2O， 只留下非常少的殘?jiān)?， 而無機(jī)物化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定 ， 高溫下不會分解 ， 這樣我們可 以利用高溫灼燒的方法來區(qū)分細(xì)菌與固體無機(jī)物 。 52 （ 1）懸浮物中絕大多數(shù)為細(xì)菌時(shí) ? 細(xì)胞數(shù)目 =MLSS247。 個(gè)體細(xì)菌的平均干重量 離心沉淀 濾膜過濾 計(jì)算 105~110 ℃ 下進(jìn)行干燥 恒重 稱重 或 MLSS懸浮物 53 （ 2）除細(xì)菌外還有大量無機(jī)懸浮物時(shí) ? W無 ? MLVSS揮發(fā)性懸浮物 =MLSS － W無 =細(xì)菌群體干重 ? 細(xì)胞數(shù)目 = MLVSS247。 個(gè)體細(xì)菌的平均干重量 550 ℃ 下灼燒 稱重 105~110 ℃ 下進(jìn) 行干燥恒重 稱重 MLSS 過多的有機(jī)物懸浮物會對測定結(jié)果干擾很大，此時(shí)不能用重量法，應(yīng)改用其他方法。總體來說 重量法 方法 誤差較大 ，一般只作為菌數(shù)粗略估算。 如活性污泥測定 以重量 MLSS、 MLVSS （揮發(fā)性懸浮固體） 間接表示細(xì)菌數(shù)量 54 N量法 大多數(shù)生物包括細(xì)菌，細(xì)胞內(nèi)的 蛋白質(zhì)氮含量 比較穩(wěn)定，一般為蛋白質(zhì)干重 15％ ~17％， 平均為 16％ 。 ? 同種細(xì)菌的 DNA含量一致 ，可通過測定 DNA的含量來表示細(xì)菌的生長量 少量純細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)細(xì)菌數(shù)量的測定。 精確性非常高， 對樣品純度以及儀器和人員的要求較高， 56 一、溫度 二、 pH值 三、氧化還原電位 四、溶解氧 五、滲透壓 六、光線 七、化學(xué)藥劑 第二節(jié) 微生物的生存因子 57 一、溫度 溫度主要通過影響細(xì)菌 細(xì)胞膜的流動性 和 生物大分子的活性 來影響細(xì)菌的生命活動。一方面，隨著 T↑ ，細(xì)胞內(nèi)酶反應(yīng)速度加快，代謝和生長也相應(yīng)加快；另一方面隨著 T↑↑, 生物活性物質(zhì)如核酸、蛋白質(zhì)發(fā)生變性，細(xì)胞功能下降，甚至死亡。 生 長 速 率 0 溫度℃ 最低溫度 最適溫度 最高溫度 適宜溫度： 生長速率最高時(shí)的溫度，適宜溫度因微生物而異；同一種菌、不同的生長過程適宜溫度也不同。 58 根據(jù)細(xì)菌適宜溫度的不同，可將細(xì)菌分為四大類 ， 嗜冷菌、嗜中溫菌、嗜熱菌及嗜超熱菌 。 細(xì)菌的生長溫度范圍 細(xì)菌 最低溫度℃ 最適溫度℃ 最高溫度 嗜冷菌 5 ～ 0 5 ～ 10 20 ～ 30 嗜中溫菌 5 ～ 10 25 ～ 40 45 ～ 50 嗜熱菌 3 0 50 ～ 60 70 ～ 80 嗜超熱菌 55 以上 70 ～ 1 0 5 1 1 0 ～ 1 1 3 ? 廢水中的細(xì)菌一般都是嗜中溫菌 ， 最適溫度多在30℃ 左右 ， 嗜冷菌和嗜熱菌占少數(shù) 。 ? 廢水生物處理中微生物的適宜溫度在 30℃ 左右 。 59 高溫滅菌、低溫抑菌 高 溫 干熱滅菌 濕熱滅菌 火焰滅菌★ 烘箱內(nèi)干燥熱空氣滅菌★ 巴斯德消毒法 間歇滅菌法 高壓蒸汽滅菌法 ★★ ： 高溫 蛋白質(zhì)凝固變性，酶失活。 溫度對細(xì)菌的影響： 高溫消毒 煮沸消毒法 60 （ 1 ）干熱滅菌 (dry heat ste