基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)ppt課件(編輯修改稿)
2025-05-25 23:22 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 n (10% 血清 ) 給藥 實(shí)驗(yàn)步驟 ? 1. 細(xì)胞點(diǎn)板，具體數(shù)量因細(xì)胞不同而不同，并根據(jù)給藥時(shí)間和條件來(lái)定。 ? 2. 第二天用槍頭比著直尺，盡量垂直于背后的橫線劃痕， 槍頭要垂直，不要傾斜 。 ? 3. 用 PBS洗細(xì)胞 3次 ，去除劃落的細(xì)胞，加入培養(yǎng)基。 ? 4. 放入 37℃ 5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。按 0、 1 24小時(shí)取樣，拍照。 實(shí)驗(yàn)要點(diǎn) ? 劃痕質(zhì)量 寬度 筆直程度 劃痕后一定要清洗干凈 結(jié)果處理 Part 1 Part 2 4. Western blot ? 原理： 經(jīng)過 電泳 分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體 抗原抗體反應(yīng) 先分離后分析 蛋白含量或者表達(dá)、存在形式的變化 ? 蛋白樣品的制備 ? SDS聚丙烯酰胺 凝膠電泳 ?轉(zhuǎn)膜 ?封閉 ?一抗雜交 ?二抗雜交 ?底物顯色 實(shí)驗(yàn)步驟 實(shí)驗(yàn)要點(diǎn) ? 1. 上樣量 蛋白 KD數(shù) ? 2. 制膠：上層膠和下層膠的比例 上層膠不能有碎膠 泳道筆直 ? ,尤其是長(zhǎng)時(shí)間放置的樣品 ,以減少蛋白質(zhì)帶的拖尾現(xiàn)象 ? ：成功的關(guān)鍵 保證時(shí)間 不同厚度的膠最好不要一起轉(zhuǎn) ? 5. 合適一抗?jié)舛?
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