基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)ppt課件(已修改)
2025-05-10 23:22 本頁(yè)面
【正文】 基本實(shí)驗(yàn)技術(shù) 陳妍 20221217 內(nèi)容提要 ? 一、基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)和方法 ? 細(xì)胞培養(yǎng) MTT 劃痕修復(fù) ? western blot siRNA ? 二、如何把實(shí)驗(yàn)做好（心得體會(huì)） 一、基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)和方法 ? （一）細(xì)胞培養(yǎng) ? 1 培養(yǎng)細(xì)胞的特性 ? 培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)方式 貼附生長(zhǎng)： 貼附于支持物表面 懸浮生長(zhǎng)：于懸浮狀態(tài)下即可生長(zhǎng) 游離期 貼壁期 潛伏期 對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期 停止期（平臺(tái)期） 培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)的條件 ? 1 細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)需要（血清質(zhì)量好壞是實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵） ? 2 細(xì)胞的生存環(huán)境 ? 溫度 : 37 ℃ O2 20% CO2: 5% CO2 +H2O ← →H 2CO3 ← →H + + HCO3 pH: 滲透壓 ? 3 無(wú)污染 ? 4 無(wú)毒 2. 四唑鹽（ MTT）比色法 ? 原理： （ 1）活細(xì)胞 線粒體 脫氫酶 （ 2）可溶性的四 唑 鹽還原成不溶于水的藍(lán)紫色產(chǎn)物（ formazan)，沉淀在細(xì)胞中，而死細(xì)胞沒(méi)有這種功能。 預(yù)實(shí)驗(yàn) ? OD:— 有效值 （線性范圍） 吸光度與所含的 formazan量成正比 細(xì)胞點(diǎn)板量的確定（保證所測(cè)的 con值在 之間）
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