【文章內(nèi)容簡介】 它喜溫暖濕潤氣候，亦耐干旱。土層30厘米以上，疏松肥沃土壤生長最好，但也耐瘠薄，喜光不耐蔭蔽，常與低草混生。 貫葉連翹成分非常復(fù)雜，除含有萘駢雙蒽酮(Naphthodianthrones) 等主要藥用成分外還含有黃酮(Flavonoids)類化合物，藤黃酚衍生物(Phloroglucinols),有機酸類、甾類、糖類、樹脂、葉綠素及微量元素等成分。 貫葉連翹全草中鞣質(zhì)含量可達10%左右，酸解能產(chǎn)生花白素，全草用稀氫氧化鈉溶液水解，可抽提出具有抑菌能力的衣馬寧。植株中兒茶素和表兒茶素的二、三、四聚體等原花色甙元的含量有時多達植株干重的12%。此外，還含有以α和β蒎烯為主的單萜、倍半萜、碳氫化合物等成分組成的揮發(fā)油類化合物。在揮發(fā)油成分中，%, %。在目前貫葉連翹中較受關(guān)注的化學(xué)成分主要有三類:(1)萘駢雙蒽酮(Naphthodiantluones),(2)黃酮(Flavonoids),(3) 藤黃酚衍生物(Phloroglucinols)。 萘駢雙蒽酮類化合物是貫葉連翹中主要的藥用成分，也是目前研究的最多和較透徹的一類化合物，此類化合物在貫葉連翹及其同種屬植物中普遍存在，但較難在其它高等植物中找到，因此可以看成是貫葉連翹及其同屬植物的特性成分。這類成分主要有(結(jié)構(gòu)見圖4):金絲桃素(Hypericin )、假金絲桃素(Pseudohypericin )、異金絲桃素(Isohypericin )、原余絲桃素(Protohypericin ),原假金絲桃素(Protopseudohypericin)等。另外，大黃素蒽酮(Emodinanthrone)也規(guī)入此類。在植株中此類成分以金絲桃素和假余絲桃素為主，它們也是貫葉連翹中最主要的藥用成分，而假金絲桃素在植株中的含量又往往高于金絲桃素，其含量約是金絲桃素的三倍，但其藥效不如金絲桃素。原金絲桃素和原假金絲桃素僅存在于新鮮植物中，光照后即分別轉(zhuǎn)化為金絲桃素和假金絲桃素。 從金絲桃素與假金絲桃素的分子結(jié)構(gòu)上，我們可以看出此類化合物的分子具有活躍的大平面電子共驪體系，因此該類化合物分子對熱不穩(wěn)定，見光易氧化，這也是金絲桃素與假金絲桃素抗病毒、抗菌以及接觸皮膚、粘膜或大劑量攝入體內(nèi)，易引起人和動物起光敏反應(yīng)的主要原因。目前，金絲桃素與假金絲桃素被廣泛應(yīng)用于治療精神抑郁癥，國際上評價貫葉連翹提取物的質(zhì)量，就是看其提取物中金絲桃素的含量多少。 貫葉連翹中的黃酮類成分很豐富，含量也相當(dāng)高，據(jù)說在臨床應(yīng)用上也有一定的意義，目前已鑒定的有：槲皮素(Quercetin)、木樨草素(Luteolin), 山萘黃素(Kaempferol)、楊梅樹皮素(Myricetin),金絲桃甙(Hyperin/Hyperoside),槲皮甙(Quercitrin)、異槲皮甙(Isoquercitrin)、蘆丁(Rutin) ,穗花杉雙黃酮(Amentollavone/1339。,118biapigenin), Ⅰ3,Ⅱ8一雙芹菜素(biapigenin)、白矢車菊試元(Leucocyanidin)等等，部分分子結(jié)構(gòu)見圖5。 此類成分主要有貫葉金絲桃素(Hyperforin)和高貫葉金絲桃素 (Adhyperforin)。貫葉金絲桃素能作用于去甲腎上腺素、多巴胺和5HT，是貫葉連翹中治療抑郁癥、治愈傷口的主要成分之一，同時其還表現(xiàn)出了很強的抗菌活性和強的腸胃作用。它對光熱不穩(wěn)定，含量也不穩(wěn)定。主要存在與植株的花中，在早期采集的貫葉連翹花中，金絲桃素含量較高，晚期采集的花中貫葉金絲桃素的含量較高，如其采收、加工不當(dāng)則易招致?lián)p失。 貫葉連翹 中還含有大量種類繁多的有機酸類化合物，主要包括咖啡酸、氯原酸、P一香豆酸、阿魏酸、異阿魏酸、龍膽酸、異月桂酸、肉豆寇酸、煙酸、棕擱酸、硬脂酸、類胡蘿卜素、膽堿、多種氨基酸，另外還含有東19素、果膠等。 金絲桃素和假金絲桃素等蔡驕雙蔥酮類化合物主要集中在貫葉連翹的花中，并且以即將開放和剛剛開放的花中含量最高，一旦授粉，含量即迅速下降。Tsitsina,l，等系統(tǒng)的分析了貫葉連翹植株不同部位的主要化學(xué)成分，%以上，%。葉和側(cè)莖中含量相近，%左右。主莖中含量最低，不堪使用?；ㄍ瑫r也是黃酮類和藤黃酚衍生物的富集部位。花和即將開放的花蕾中總黃酮含量可高達11%，而葉和莖一般為7%左右?；ㄖ械狞S酮以金絲桃試和槲皮素為主，葉中的黃酮以金絲桃甙和蘆丁為主。藤黃酚衍生物幾乎只存在于花、花蕾和朔果中，并且以朔果中含量最高，莖、葉檢測不到?；ê臀闯墒斓乃饭胸炄~金絲桃素的含量分別為3%%左右，%%左右。莖桿中揮發(fā)油含量很低，成熟茹果中稍高。就整株而言，花前揮發(fā)油總量高于花期，%，%。在古代歐洲及中國，貫葉連翹就己用于治療膀胱結(jié)石、三日熱、四日熱、坐骨神經(jīng)痛和燒傷，但直到公元800年時，貫葉連翹才被用于治療抑郁癥。近年來在歐美等國家貫葉連翹己成為治療抑郁癥和焦慮癥的主要藥物之一，并就此進行了廣泛的研究。國外的臨床實驗表明，貫葉連翹制劑對抑郁癥的治療效果優(yōu)于丙米嗪、阿密替林等合成藥，并且副作用較少，同時發(fā)現(xiàn)貫葉連翹抗抑郁作用的主要成分為金絲桃素和偽金絲桃素。臨床實驗證實，金絲桃素純品的抗抑郁功能不如貫葉連翹提取物中未經(jīng)分離的金絲桃素，臨床應(yīng)用貫葉連翹提取物與卡瓦胡椒或西伯利亞人參合用成功地治愈了焦慮癥和嚴重的緊張感。Adolf Nahrstedt在研究金絲桃素的活性時，發(fā)現(xiàn)純的金絲桃素與原花青素合用在動物模型中顯示出了更高的活性。實驗證實金絲桃素能影響腦內(nèi)5HT,去甲腎上腺素和多巴胺，并具有單胺氧化酶抑制作用。動物實驗發(fā)現(xiàn)金絲桃索的抗抑郁活性是通過腦的后突觸接受體吸入有抑制性的五輕色胺來實現(xiàn)的。貫葉連翹在抗病毒方面的應(yīng)用成為近年來研究的又一熱點。Meruelo, a ，金絲桃素和偽金絲桃素具有很強的廣譜抗病毒活性，包括抗人體免疫缺乏癥病毒(HIV)活性。 Isami Takahashi et ，金絲桃素和偽金絲桃素的抗HIV活性是通過抑制蛋白激活酶C(PKC)來實現(xiàn)的，PKC是HIV感染健康細胞的媒介。同時發(fā)現(xiàn)金絲桃素與偽金絲桃素具有抗乳腺病變細胞病毒擴散的活性。Daniel Meruelo et al，研究發(fā)現(xiàn)，金絲桃素對HIV有獨特作用方式，它可使病毒粒子失活，作用機理可能是由病毒體殼RNA的交聯(lián)所致[321。國內(nèi)有報道，用化學(xué)合成法制備的金絲桃素和乙基金絲桃素在體外均能抑制HIV逆轉(zhuǎn)錄酶，后者的活性強于前者[331國外有報道，采用靜脈注射和口服貫葉連翹制劑相結(jié)合的方式來治療艾滋病(AIDS)患者，取得了較好的效果。此外，國外對貫葉連翹的抗病毒研究認為，金絲桃素與偽金絲桃素是親酷性分子，它們能與病毒細胞膜的雙層磷脂相結(jié)合，在光照射下，能產(chǎn)生游離氧原子和自由基殺死病毒。Thomas et [351。然而，近來另一些研究表明，金絲桃素抗病毒活性并不總是靠氧來實現(xiàn)，雖然在一些實驗中氧起了作用。Carpenter et ，是光致抗病毒活性的另一原因。ouldwellW . l報道金絲桃素能有效地抑制神經(jīng)膠質(zhì)瘤的生長。Demish Let ，并且作用持久。有人還認為，少量食入貫葉連翹制劑有益于人體健康。陳志武等報道，金絲桃甙不但可以降低動脈血壓，而且對冠狀動脈有擴散作用，還能增加冠脈流量，金絲桃素可抑制高鉀誘發(fā)的Ca內(nèi)流。馬傳庚等研究了金絲桃甙的止痛作用，動物實驗證實，金絲桃甙有顯著的中樞鎮(zhèn)痛作用，其作用效果約等于嗎啡的1/20，并測得金絲桃甙產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用時，動物腦內(nèi)Ca含量顯著地減少14010臨床還發(fā)現(xiàn)金絲桃甙具有降膽固醇、抗炎和鎮(zhèn)咳作用。由此看來，貫葉連翹在抗心血管疾病、止痛藥等方面成為研究的另一熱點。貫葉連翹及其制劑在正常的劑量下，毒副作用很小。主要副作用表現(xiàn)為胃腸不適、過敏和乏力，其發(fā)生率均在1%以下，罕見光敏反應(yīng)。高劑量時除了可引起局部皮膚紅斑即光敏反應(yīng)之外，余亦無它。皮膚白哲者光敏反應(yīng)發(fā)生率相對較高。同時接受超聲波治療或紫外線照射(包括強光)，可使光敏加重，個別病人會形成皮膚水泡。大劑量靜脈注射治療艾滋病時，少數(shù)患者可出現(xiàn)手和面部疼痛，停藥數(shù)天后消失。毒理學(xué)研究亦表明貫葉連翹及其制劑是安全的。貫葉連翹提取物的毒理工作已在小鼠、大鼠和犬等動物身上進行了長達26星期試驗，最大試驗劑量為500mg/kg最初不耐受劑量為每月900mg/kgo LD50大于最大劑量，所有試驗未顯示有基因毒和誘變作用。雖然在體外細胞培養(yǎng)中偶爾出現(xiàn)過致誘變現(xiàn)象，但這種致誘變性最終被規(guī)因于槲皮素。槲皮素在體內(nèi)是安全的，國際癌癥研究中心對此已作出過評價。在13個男性正常人每月服用900mg和3600mg貫葉連翹提取物試驗中，每月900mg是大多數(shù)臨床試驗采用的安全有效劑量。貫葉連翹中含有多種有效藥用成分，由于金絲桃素是主要的藥效成分，因此目前對貫葉連翹的提取、分析以及藥理研究主要針對金絲桃素，如何提取、純化和分析是近年來研究的重點。由于金絲桃素分子量較大，且具有一定極性，它易溶于極性及中等極性的有機溶劑，在水中溶解度較差，能溶于堿性水溶液，因此對貫葉連翹的提取主要是極性或中等極性的有機溶劑。李俊等研究了氫氧化鈉水溶液的提取工藝，采用正交設(shè)計，研究了氫氧化鈉的濃度、提取溫度、提取時間等條件，發(fā)現(xiàn)1%的氫氧化鈉在95100℃時提取2小時效果最佳。Bernard,Claudeet ，他采用60%內(nèi)酮溶解提取物，用石油醚萃取除去類葉紅素，所得提取物再用水溶解振蕩除去糖類物質(zhì)進行純化，產(chǎn)品中金絲桃素類物質(zhì)含量較高。Ge orgiev, al .研究了葵花油的提取工藝，他們將晾干的原料用水濕潤，使其濕度達到7072%,于70℃避光提取1218個小時，%，%。 G enius,OtoB .研究了丙酮浸漬的提取工藝，將貫葉連翹葉用丙酮在室溫下浸泡23天，所得提取物用交聯(lián)葡聚糖柱純化可得金絲桃素的純品。在實驗室規(guī)模上，貫葉連翹的提取多采用索氏提取法，所用溶劑多為甲醇、丙酮等極性或中等極性溶劑。Piperopoulos等用甲醇丙酮(1: 1)溶液從貫葉連翹花中經(jīng)索氏提取至溶液無色為止，用HPLC分離、分析金絲桃素類有效成分，測得金絲桃素在干花中含量為2. 1mg/g，金絲桃素類化合物在干花中總含量為6. 3mg/g。Theodor等研究了貫葉連翹中金絲桃素與假金絲桃素的含量，用甲醇和丙酮經(jīng)超聲波提取其中的金絲桃素，用HPLC分析發(fā)現(xiàn)植株中假金絲桃素含量是金絲桃素含量的3倍多。DANIELMERUELO等將粉碎的貫葉連翹放入索氏提取器，首先用二氯甲烷提取，拋棄提取物，然后用丙酮提取，所得提取物用硅膠柱純化，純化后的產(chǎn)品再用薄層色譜法制得較為純凈的金絲桃素和假金絲桃素[49[o KarlH等系統(tǒng)的研究了貫葉連翹中金絲桃素在地上植株和地下根部以及花、葉中不同部位含量，發(fā)現(xiàn)地上植株明顯高于根部，花中金絲桃素含量為葉中的四倍。所用提取方法是先用甲醇超聲波浸取，再用丙酮超聲波提取is0[o Erdelmeier Clemens等提取工藝與其他方法不同，他們采用硫醇混合物使提取物中的金絲桃素等光敏性物質(zhì)能穩(wěn)定存在至少12個月。他們用新鮮的植株擠出的汁液加入少量的維生素C，在55℃條件下加入庚烷萃取1h，經(jīng)分析測定其有效成分含量比一般提取干植株的含量要高許多。 Roumeliotis,Panayiotis et al研究了2080%, 60℃條件下的提取工藝，所得提取物再用C18柱進行純化。 Southwell,Ian A. et al等用索氏提取法系統(tǒng)研究了寬葉貫葉連翹與窄葉貫葉連翹中金絲桃素的含量，實驗發(fā)現(xiàn)窄葉貫葉連翹中金絲桃素含量約是寬葉貫葉連翹含量的3倍。并系統(tǒng)的研究了寬葉貫葉連翹植株不同部位的金絲桃素含量，發(fā)現(xiàn)，植株的側(cè)枝中金絲桃素含量為主干的3倍，花中含量是葉含量的6倍，植株頂端葉中金絲桃素含量高于底部葉子。目前在工業(yè)生產(chǎn)上金絲桃素類物質(zhì)的提取主要采用乙醇、甲醇等有機溶劑，由于市場對其需求量逐年增加，對其提取、純化工藝的研究仍是今后研究的熱點之一。根據(jù) 金 絲 桃素及其類似化合物的化學(xué)性質(zhì)，我們分別研究了用超臨界流體提取貫葉連翹中的金絲桃素類化合物的工藝，以及化學(xué)溶劑法的提取工藝。由于貫 葉 連 翹 植株內(nèi)含有成千上萬種化學(xué)成分，且每種成分含量甚微，因而開發(fā)和改進分離、分析技術(shù)對植株內(nèi)有效成分的結(jié)構(gòu)鑒定、生物活性評價、半合成、為臨床提供樣品以及對生產(chǎn)過程中質(zhì)量控制等具有重要意義。目前國內(nèi)外對貫葉連翹中主要有效成分金絲桃素類物質(zhì)的分析主要采用高效液相色法 (HPLC)，另外還有薄層色譜(TLC), UV分光光度法等方法。在用 H PL C 進行分析時，流動相一般為酸性磷酸鹽緩沖溶液，也有報道采用中性洗脫劑。為了得到良好的分析結(jié)果一般采取梯度淋洗，Georgios Piperopoulose tal，在分析貫葉連翹提取物時，應(yīng)用甲醇:乙睛(5:4) 三乙胺鹽水溶液作洗脫劑，采用梯度淋洗很好的分離了原偽金絲桃素、偽金絲桃素、原金絲桃素、金絲桃素，所用檢測器為UVVis，檢測波長為590nm。 TheodorKartnigel al應(yīng)用UV檢測器在254nm采用不同洗脫劑進行梯度淋洗成功的分離了貫葉連翹提取物中9種成分。他們先后使用的洗脫劑分別為乙睛:水:磷酸(16:83:1)、乙睛:水:磷酸(32:67:1)、乙睛:甲醇:水:磷酸(55:20:24:1)，先后分離了蕓香苷、異櫟精、金絲桃甙、櫟皮苷、櫟精、Ⅰ3,Ⅱ8一雙芹菜素、穗花杉雙黃酮、偽金絲桃素和金絲桃素。 Daniel Merulo ，應(yīng)用二氯甲烷:丙酮:甲醇(::)作為展開劑，在紫外光下能觀測到金絲桃素和偽金絲桃素所發(fā)出的熒光。 Kartnig,Th ，應(yīng)用發(fā)射熒光檢測器在550ng范圍內(nèi)對金絲桃素和在20200ng范圍內(nèi)對偽金絲桃素能進行準(zhǔn)確的定量分析，在給定條件下實驗的Rs%，該分析方法定量準(zhǔn)確重復(fù)性好。Schuet,Heide et ，實驗發(fā)現(xiàn)在定量分析上分光光度法不如HPLC法，而且HPLC法適用于進行例行分析。Debska,W. et ，他們采用二甲亞砜 (DMSO)和二甲基甲酞胺(DMF)的5%乙醇溶液溶解提取物，在591nm處測定，該法的Rs=%，實驗發(fā)現(xiàn)DMSO的溶解度要優(yōu)于DMFI。此外Giuseppe Micali