實(shí)驗(yàn)三果酒酵母的分離(編輯修改稿)
2025-05-22 12:58 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 三個(gè)平板，28℃恒溫培養(yǎng)。腐果表面長有白色菌落，鏡檢為酵母菌后，用接種環(huán)將其劃線至PDA培養(yǎng)基上，28℃恒溫培養(yǎng)。:0017:00第一次純化：挑取單個(gè)菌落鏡檢為酵母菌后，用接種環(huán)將其劃線至PDA培養(yǎng)基上，28℃恒溫培養(yǎng)將PDA培養(yǎng)基滅菌，倒平板待用:0012:00第二次純化配制PDA培養(yǎng)基，PYG培養(yǎng)基（菌種保藏培養(yǎng)基）:0018:00培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、試管滅菌PDA培養(yǎng)基倒平板，PYG培養(yǎng)基倒斜面待用:0012:00觀察酵母菌生長狀況，鏡檢看是否已純化第三次純化:0010:30觀察平板上是否長菌，未長出:0014:30觀察平板上是否長菌，未長出，老師建議明天再來看，可能是培養(yǎng)基有問題:0015:00第四次純化鏡檢無雜菌的接種倒斜面上，保藏菌種2株:0016:00鏡檢無雜菌的接種倒斜面上，保藏菌種3株開始進(jìn)行復(fù)篩前準(zhǔn)備:0012:00發(fā)酵力試驗(yàn)：采用CO2失重法制作酵母種子液：將配制好的YEPD培養(yǎng)基分裝于5個(gè)100ml三角瓶內(nèi)每瓶50ml高溫滅菌冷卻，然后將斜面上的5株菌分別接種到三角瓶中，120r/min，28℃搖床培養(yǎng)2天:0019:00108個(gè)/ml配制PAD培養(yǎng)基（發(fā)酵培養(yǎng)基），分裝于5個(gè)100ml三角瓶內(nèi)每瓶80ml高溫滅菌冷卻，然后，將酵母種子液（2ml）對(duì)應(yīng)接種到發(fā)酵培養(yǎng)基，稱重，28℃恒溫培養(yǎng)。酵母菌的耐受性試驗(yàn)：采用杜氏管發(fā)酵法測定所篩選的酵母菌對(duì)乙醇（5%、6%、7%、8% 、9%）二氧化硫（60、60、90、120 mg/L）的耐性。將酵母菌分別接入含不同濃度的乙醇和不同濃度SO2的PDA培養(yǎng)基中，在相同條件下培養(yǎng)，觀察杜氏管中氣泡產(chǎn)生情況:0014:30稱取發(fā)酵培養(yǎng)基的重量，記錄數(shù)據(jù)觀察酵母菌的耐受性試驗(yàn)現(xiàn)象15. 3月29日14:0014:30稱取發(fā)酵培養(yǎng)基的重量，記錄數(shù)據(jù)觀察酵母菌的耐受性試驗(yàn)現(xiàn)象16．3月30日14:0014:30稱取發(fā)酵培養(yǎng)基的重量，記錄數(shù)據(jù)觀察酵母菌的耐受性試驗(yàn)現(xiàn)象17. 3月31日14:0017:30稱取發(fā)酵培養(yǎng)基的重量，記錄數(shù)據(jù)觀察酵母菌的耐受性試驗(yàn)現(xiàn)象重復(fù)做一次酵母菌的耐受性試驗(yàn):0014:30稱取發(fā)酵培養(yǎng)基的重量，記錄數(shù)據(jù)觀察酵母菌的耐受性試驗(yàn)現(xiàn)象:0014:30稱取發(fā)酵培養(yǎng)基的重量，記錄數(shù)據(jù)觀察酵母菌的耐受性試驗(yàn)現(xiàn)象20. 4月3日14:0014:30稱取發(fā)酵培養(yǎng)基的重量，記錄數(shù)據(jù)觀察酵母菌的耐受性試驗(yàn)現(xiàn)象:0014:30稱取發(fā)酵培養(yǎng)基的重量，記錄數(shù)據(jù)觀察酵母菌的耐受性試驗(yàn)現(xiàn)象。實(shí)驗(yàn)四 果酒酵母發(fā)酵原始數(shù)據(jù)記錄1. 2. 果漿中總糖含量F（g）G（g/ml）V（ml）V1（ml）V2（ml）V3（ml）X(g/L)第一次23120110第二次231501250第三次1501第四次1301130第五次150150第六次150125式中：X——總糖或還原糖的含量，g／L；F——費(fèi)林溶液Ⅰ、Ⅱ各 5 mL相當(dāng)于葡萄糖的克數(shù)，g；V1——吸取的樣品體積，mL；V2——樣品稀釋后或水解定容的體積，mL；V3——消耗試樣的體積，mL；G——葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的準(zhǔn)確濃度，g／mL；V——消耗葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mL。所得結(jié)果應(yīng)表示至一位小數(shù)。第一次測得果漿中糖的含量為10g/L，向果漿中加糖316g，最后到25g/L測定酒度3. 果漿中酸的含量 式中：X ——樣品中滴定酸的含量，g/L；c ——?dú)溲趸c標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，mol/L；V1 ——樣品滴定時(shí)，消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mL；V0 ——空白滴定時(shí)，消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mL； V2 ——吸取樣品的體積，mL；S蘋果酸＝V1（ml）V0（ml）V2（ml）X（g/L）第一次2第二次1第三次1第四次2第五次1第六次1第七次1，蒸餾得100ml液體，29oC下，根據(jù)酒精度溫度校正表得，20oC下，果汁的酒精度8o實(shí)驗(yàn)方案選取12種釀酒酵母進(jìn)行小型釀酒實(shí)驗(yàn)，在品嘗合格并符合規(guī)定的感官及理化指標(biāo)后，選用常用菌種保藏方法對(duì)有價(jià)值的菌種進(jìn)行保藏。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蛢?nèi)容1．掌握果酒釀造的原理并對(duì)篩選果酒酵母菌種進(jìn)行發(fā)酵性能測定（起酵時(shí)間、產(chǎn)酒精度、耐受性能）。2．用實(shí)驗(yàn)十三所篩選果酒酵母進(jìn)行小型釀酒實(shí)驗(yàn)，掌握果酒釀造一般工藝流程，并對(duì)自釀果酒進(jìn)行感官品評(píng)和理化分析檢測（糖度、酸度、酒精度）。二、實(shí)驗(yàn)原理 果酒發(fā)酵：果漿或果汁中的葡萄糖和果糖在酵母菌的作用下，最后生成酒精和二氧化碳。可用以下反應(yīng)式來說明： 果酒發(fā)酵是一個(gè)極其復(fù)雜的生物化學(xué)現(xiàn)象。在每一步反應(yīng)過程中都有酶的參與，除了最后生成酒精、二氧化碳和少量的甘油、高級(jí)醇類、醛類物質(zhì)之外，還會(huì)生成二磷酸己糖、磷酸甘油醛、丙酮酸、乙醛等許多中間產(chǎn)物?！ 」频陌l(fā)酵分主發(fā)酵和后發(fā)酵兩個(gè)階段，主發(fā)酵是將發(fā)酵液的糖分變成酒精，后發(fā)酵是繼續(xù)分解殘?zhí)菫榫凭?，加速酒的轉(zhuǎn)化，使酒更加穩(wěn)定。用人工培養(yǎng)的酵母發(fā)酵的稱為人工發(fā)酵，利用天然酵母發(fā)酵的稱為自然發(fā)酵。按照工藝的不同又可分為渣汁混合發(fā)酵和渣汁分離發(fā)酵兩種形式。三、實(shí)驗(yàn)儀器與材料樣品：新鮮水果及壓榨汁。試劑：亞硫酸鈉、乙醇、無菌水、化學(xué)純液體石蠟、五氧化二磷、脫脂奶粉、10%HCl、干冰、95%乙醇、食鹽、無水氯化鈣、河沙、瘦黃土(有機(jī)物含量少的黃土)或者紅土；器皿：三角燒瓶(250 mL)、無菌試管、無菌吸管(1 mL及5 mL)、無菌滴管、接種環(huán)、40目及100目篩子、干燥器、安瓿管、冰箱、冷凍真空干燥裝置、酒精噴燈、濾紙條（ cm）冰箱，低溫冰箱（30 ℃），液氮冷凍保藏器，玻璃涂棒，血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，顯微鏡，紫外線等（15W），磁力攪拌器，臺(tái)式離心機(jī)，震蕩混合器等。
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