【文章內(nèi)容簡介】 ，盡量減少誤差。（）每吸取一個稀釋度樣液，必須更換一支吸管或吸頭。（）樣液加入平皿后應盡快傾注培養(yǎng)基，避免樣液干燥。（）傾注時培養(yǎng)基溫度不得超過℃，以防損傷細菌或真菌。（）傾注和搖動應盡量平穩(wěn)，勿使培養(yǎng)基外溢，確保細菌分散均勻，便于計數(shù)菌落。（化學因子）的去除方法 目的對于消毒劑的消毒效果試驗，在達到規(guī)定的消毒時間時，要求立即終止其繼續(xù)作用，以便準確檢測出試驗體系中仍然存活的微生物及其數(shù)量。本方法可去除殘留消毒劑對微生物的殺滅和抑制作用。緦徑銚膾齲轎級鏜撟廟耬癬紇徑驕鄰。 去除殘留消毒劑方法的原則要求（）應有效去除殘留的消毒劑。（）對試驗微生物無害，不減少其回收量。（）不破壞培養(yǎng)基的營養(yǎng)成份，不影響其透明度。 去除殘留消毒劑的方法（）稀釋中和法（又稱中和劑法）指在消毒劑與微生物作用到達規(guī)定時間的終點時，取樣加于適宜種類和濃度的中和劑中，將殘留消毒劑迅速中和，使其不再持續(xù)殺滅和抑制微生物的方法。其操作要點如下：騅憑鈳銘僥張礫陣軫藹攬齊彎議罵擰。）將經(jīng)消毒劑作用過的微生物樣本，在達到規(guī)定作用時間，即刻取樣移入鑒定合格的中和劑溶液中。）所用中和劑的濃度與容量應與鑒定試驗結(jié)果規(guī)定的相同。）即刻混勻，并按規(guī)定時間吸取樣液進行隨后的培養(yǎng)檢測。）在將樣本接種培養(yǎng)基以前的操作，應按規(guī)定時間內(nèi)進行，以免微生物與中和劑或中和產(chǎn)物接觸過久。（）過濾沖洗法將經(jīng)消毒劑作用過的微生物樣本，立即加入適量稀釋液中混勻（通過適量稀釋，可減輕消毒劑的持續(xù)作用），并傾入裝有微孔濾膜的濾器內(nèi)，接真空泵抽吸過濾（或加壓過濾）后，再加適量稀釋液沖洗，同時過濾，可去除殘留的消毒劑。多用于難以找到適宜中和劑的消毒效果試驗。本方法應按擬進行試驗具體情況，經(jīng)鑒定合格后再使用。其操作要點如下：癘騏鏨農(nóng)剎貯獄顥幗騮鴣詼驤齔駘輸。）準備好微孔濾膜、濾器。濾膜及濾器需先經(jīng)滅菌處理。）初次過濾后，應使用一定量對微生物無害的稀釋液進行沖洗，沖洗次數(shù)一般以洗凈消毒劑為準。）最后一次沖洗、濾凈后，將微孔濾膜以無菌操作法取出，進行隨后的培養(yǎng)檢測。 注意事項（）處理時應嚴守無菌操作要求，所有試液須滅菌，接觸樣本和試液的器材均須無菌。（）每次吸液，均須更換一支無菌吸管，以防交叉污染。（）所用吸管的容量應盡量與擬吸取的液體量相近，不要用大吸管吸取少量液體。（）試驗條件可影響殘留消毒劑的去除效果，故每進行一種消毒效果試驗，均需按規(guī)定對所選方法進行去除效果的鑒定試驗。鏃鋝過潤啟婭澗駱讕瀘載撻贏禱驛懼。確定所選中和劑是否適用于擬進行的消毒效果鑒定試驗。（）實驗菌菌懸液和菌片（見 ）（）刻度吸管（、）（）平皿（）恒溫水浴箱（）稀釋液見附錄（）培養(yǎng)基見附錄（）電動混勻器 試驗設(shè)計原則（）通過所設(shè)各組試驗結(jié)果綜合分析，應可確定所用中和劑是否對測試消毒劑有良好的中和作用，對試驗用微生物以及其恢復期培養(yǎng)是否有害或不良影響。榿貳軻謄壟該檻鯔塏賽緯闥糝鍔駕躦。（）試驗中所用消毒劑的濃度應為殺菌試驗中使用的最高濃度。（）同一消毒劑擬對多種微生物進行殺滅試驗時，所用中和劑應按微生物種類分別進行鑒定試驗。對細菌繁殖體，在大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌中任選其一進行試驗；對細菌芽孢、白色念珠菌、黑曲霉菌、分枝桿菌應分別進行鑒定試驗。邁蔦賺陘賓唄擷鷦訟湊幟結(jié)廢擴駑彎。當用其他特定微生物進行殺滅試驗時，均應以該特定微生物進行中和劑的鑒定試驗。（） 鑒定時根據(jù)所用殺菌試驗方法，相應使用懸液或載體進行試驗。 實驗分組在細菌與真菌殺滅試驗中所用除藥方法的鑒定，至少應平行進行以下各組試驗。第 組中和劑 菌懸液 → 培養(yǎng)第 組（消毒劑 中和劑） 菌液 → 培養(yǎng)第 組稀釋液 菌懸液 → 培養(yǎng)第 組稀釋液 中和劑 培養(yǎng)基 → 培養(yǎng) 中和劑懸液定量鑒定試驗操作程序根據(jù)實驗分組，準備足量試管和平皿，依次進行編號。將菌懸液用等量適合濃度的有機干擾物稀釋成～，作為試驗菌懸液。鑒定試驗包括組：嶁硤貪塒廩袞憫倉華糲饃勵騮詡駐賭。第 組取標準硬水于試管內(nèi)，加入中和劑，混勻，置 ℃177?！?水浴中 后，再加入 試驗菌懸液，混勻，作用 ，分別吸取 接種于兩個平皿中，做活菌培養(yǎng)計數(shù)。該櫟諼碼戇沖巋鳧薩錠謨贛贅眾騶嶠。第 組取消毒劑于試管內(nèi)，加入中和劑（對于酸性氧化電位水檢測時，取消毒劑于試管內(nèi)，加入中和劑）混勻，置 ℃177。℃ 水浴中 后，再加入 試驗菌懸液，混勻，作用 ，分別吸取 接種于兩個平皿中，做活菌培養(yǎng)計數(shù)。劇妝諢貰攖蘋塒呂侖廟痙湯籪糶駒責。第 組取標準硬水于試管內(nèi)，加入稀釋液，混勻，置 ℃177?！?水浴中 后，再加入 試驗菌懸液，混勻，作用 ，分別吸取 接種于兩個平皿中，做活菌培養(yǎng)計數(shù)。臠龍訛驄椏業(yè)變墊羅蘄囂馱廣閏駙孫。第 組分別吸取稀釋液、標準硬水與中和劑各于同一無菌平皿內(nèi)，倒入上述試驗同批次的培養(yǎng)基～，培養(yǎng)觀察。鰻順褸悅漚縫囅屜鴨騫鬩藶騍擯駟謔。 中和劑載體定量鑒定試驗操作程序根據(jù)實驗分組，準備足量試管和平皿，依次進行編號。各組分別用適宜大小容量的無菌定量吸管按以下程序吸取或添加試劑和試驗樣本。將適宜濃度的菌懸液用等量適合濃度的有機干擾物稀釋作為試驗菌懸液，載體試驗用菌量應保證其回收菌量在 片～片之間。鑒定試驗包括組：穡釓虛綹滟鰻絲懷紓濼視嬌賭謗駔墮。第 組 吸取中和劑 于無菌平皿中，將其置 ℃177?！?水浴中 后，用無菌鑷子夾入 菌片，并使浸透于中和劑內(nèi)，作用 。 立即用無菌鑷子取出菌片移入含 中和劑試管中，用電動混勻器混合，或?qū)⒃嚬苷翊?次，混勻，分別吸取 接種于兩個平皿中，做活菌培養(yǎng)計數(shù)。隸誆熒鑒獫綱鴣攣駘賽澇鈧籜軍驢該。第 組 吸取中和產(chǎn)物溶液（按每片浸有消毒劑的載體加入含中和劑的量制備中和產(chǎn)物） 于無菌平皿內(nèi)，將其置 ℃177?！?水浴中 后，用無菌鑷子夾入 菌片，并使浸透于中和產(chǎn)物溶液中。作用 ，用無菌鑷子取出菌片，移入含 中和產(chǎn)物溶液的試管中，用電動混勻器混合，或?qū)⒃嚬苷翊?次，混勻。分別吸取 接種于兩個平皿中，做活菌培養(yǎng)計數(shù)。浹繢膩叢著駕驃構(gòu)碭湊農(nóng)瑤帳結(jié)駁噴。第 組吸取稀釋液 于無菌平皿內(nèi)，將其置 ℃177?！?水浴中 后， 用無菌鑷子夾入 菌片，并使浸透于稀釋液中。作用，立即用無菌鑷子取出菌片移入含 稀釋液的試管中，用電動混勻器混合，或?qū)⒃嚬苷翊?次，混勻，分別吸取 接種于兩個平皿中，做活菌培養(yǎng)計數(shù)。鈀燭罰櫝箋礱颼畢韞糲銨鵬駱隸驅(qū)訛。第 組分別吸取稀釋液與中和劑各于同一無菌平皿內(nèi)，倒入上述試驗同批次的培養(yǎng)基～，培養(yǎng)觀察。愜執(zhí)緝蘿紳頎陽灣熗鍵艤訥贓棧馴嘆。 評價規(guī)定實驗結(jié)果符合以下全部條件，所測中和劑可判為合格：（）第 、和組有相似量試驗菌生長，懸液試驗作用體系中菌量在～之間，載體試驗菌量在 片～片 之間。其組間菌落數(shù)誤差率應不超過 。第、和組間菌落數(shù)誤差率計算公式如下：貞廈給鏌綞牽鎮(zhèn)獵鎦龐朮戧籩賂馱見。（）第組無菌生長。否則，說明試劑有污染，應更換無污染的試劑重新進行試驗。（）試驗重復 次，每次試驗均應符合以上要求。 注意事項（）試驗所分各組均有其特定意義，不得任意刪減。（）嚴守無菌操作，保持試驗用液和器材的無菌，注意更換吸管，以防止沾染影響試驗的準確性。（）實驗組序應按本規(guī)范所列排列。 目 的 通過濾膜過濾和沖洗的方法，去除試驗體系中的殘留消毒劑，以便準確檢測出試驗體系中仍然存活的微生物及其數(shù)量。本方法可去除殘留消毒劑對微生物的殺滅和抑制作用。嚌鯖級廚脹鑲銦礦毀蘄鷯鑭嶁盧馭勞。 實驗器材（）過濾設(shè)備 包括滅菌處理的濾器、微孔濾膜（孔徑為181。），真空泵（或抽濾泵）（）稀釋液和沖洗液應不影響濾膜的性質(zhì)，對微生物無傷害作用?？捎蒙睇}水、稀釋液（見附錄）、吐溫的、可中和部分消毒成分的中和劑薊鑌豎牘熒浹醬籬鈴騫違紗駑緩馬蝕。（）其他器材隨試驗微生物確定 試驗設(shè)計原則（）通過所設(shè)各組試驗結(jié)果綜合分析，應可確定所選方法是否對測試消毒劑有良好的去除作用，對試驗微生物以及其恢復期培養(yǎng)是否有害或不良影響。齡踐硯語蝸鑄轉(zhuǎn)絹攤濼絡減貽顏饌農(nóng)。（）試驗中所用消毒劑的濃度應為殺菌試驗中使用的最高濃度。（）同一消毒劑擬對多種微生物進行殺滅試驗時，所用中和劑應按微生物種類分別進行鑒定試驗。對細菌繁殖體，在大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌中任選其一進行試驗；對細菌芽孢、白色念珠菌、黑曲霉菌、分枝桿菌應分別進行鑒定試驗。紳藪瘡顴訝標販繯轅賽憮賄豎毆饉蒞。當用其他特定微生物進行殺滅試驗時，均應以該特定微生物進行中和劑的鑒定試驗。（）鑒定中應根據(jù)正式殺滅試驗的設(shè)計，選擇使用懸液定量試驗，還是載體定量試驗。通常，懸液鑒定試驗結(jié)果可用于載體試驗。飪籮獰屬諾釙誣苧徑凜騙橥峽軋饈俠。操作程序如下：根據(jù)實驗分組，準備足量試管和平皿，依次進行編號。將菌懸液用等量適合濃度的有機干擾物稀釋成～，作為試驗菌懸液。其試驗分以下組進行：烴斃潛籬賢擔視蠶賁粵貫飭驢噦餾艱。第 組吸取 試驗菌懸液于試管內(nèi)，加入標準硬水，混勻。取 加入到過濾器中，然后加入蒸餾水作沖洗過濾處理，然后直接將濾膜有菌面朝上貼于平板表面，放置在℃ 恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)（真菌和芽孢培養(yǎng)），計數(shù)菌落數(shù)。鋝豈濤軌躍輪蒔講嫗鍵礪脈賁膚饃麗。第 組吸取 試驗菌懸液直接加入到過濾器中，然后加入至沖洗液于過濾器中，做第次沖洗過濾處理，再加入蒸餾水做第次沖洗過濾處理，最后將濾膜有菌面朝上貼于平板表面，放置在℃ 恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)（真菌和芽孢培養(yǎng)），計數(shù)菌落數(shù)。 擷偽氫鱧轍冪聹諛詼龐復堝窮馭餿職。第 組吸取消毒劑于試管中，加入有機干擾物，再加入稀釋液，混勻，取 加入到過濾器中，加入至沖洗液做第次沖洗過濾處理，再加入沖洗液做第次沖洗過濾處理，沖洗后吸取 試驗菌懸液直接加入到過濾器中，再加入蒸餾水做第次沖洗過濾處理，然后將濾膜有菌面朝上貼于平板表面，置 ℃ 恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)（真菌和芽孢培養(yǎng)），計數(shù)菌落數(shù)。蹤飯夢摻釣貞綾賁發(fā)蘄韃釓嶇淶饋麩。 評價規(guī)定試驗結(jié)果符合以下全部條件，所測中和劑可判為合格:（）第 、和 組測定的結(jié)果，菌懸液菌數(shù)應在 濾膜～濾膜之間，其組間菌落數(shù)誤差率不得超過。婭鑠機職銦夾簣軒蝕騫設(shè)猶饌還館縉。（）試驗重復 次，每次試驗均應符合以上要求。 細菌殺滅試驗 目 的 在實驗室內(nèi)驗證消毒劑對懸液中或載體上細菌繁殖體和細菌芽孢的消毒效果。 實驗器材（）按 所示方法制備的金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌和枯草桿菌黑色變種芽孢懸液或菌片。對特定用途或試驗特殊需要，可準備相應其他菌種的懸液或菌片譽諶摻鉺錠試監(jiān)鄺儕瀉濰鴇貪堝餡鷥。（）消毒劑溶液除有特殊規(guī)定者外，應使用無菌硬水配制。消毒劑溶液濃度應以所含有效成份為準。例如，含氯消毒劑以所含有效氯濃度為準，碘伏以所含有效碘為準，過氧乙酸以所含過氧乙酸量為準，復方消毒劑濃度以主要殺菌有效成分含量為準。各組消毒劑溶液有效成份濃度的計算，應以實驗菌與消毒劑的混合液中有效成份的最終濃度（作用濃度）為準儔聹執(zhí)償閏號燴鈿膽賾勞覡祕繭餛綾。（）去除殘留消毒劑的中和劑或設(shè)備（經(jīng)鑒定試驗證實合格的中和劑或有關(guān)器材）（）消毒劑稀釋用標準硬水 見附錄（）有機干擾物質(zhì)懸液試驗和載體試驗用牛血清白蛋白溶液，本規(guī)范中規(guī)定對用于經(jīng)過清洗或較清潔的消毒對象的消毒劑，有機干擾物牛血清白蛋白的濃度為；對用于不經(jīng)過清洗或較臟的消毒對象的消毒劑，有機干擾物牛血清白蛋白的濃度為。有機干擾物的配置方法見附錄縝電悵淺靚蠐淺錒鵬凜錈惡層魎馀鯛。（）培養(yǎng)基見附錄（）含中和劑的胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基（中和劑），中和劑經(jīng)鑒定合格（）刻度吸管 （、）（）恒溫水浴箱（）恒溫培養(yǎng)箱（）電動混勻器（）秒表 實驗分組試驗中應分以下各組：（）試驗組按測試目的有兩種選擇。第一種適用于消毒產(chǎn)品鑒定。根據(jù)使用說明書，選定試驗菌和一個消毒劑濃度（即產(chǎn)品使用說明書中指定的最低濃度）以及個作用時間（說明書指定最短作用時間，指定最短作用時間的倍，指定最短作用時間的倍。如說明書指定最短作用時間為，則個作用時間應分別為、和）進行試驗。驥擯幟褸饜兗椏長絳粵藎鍰館煒餓紓。第二種適用于消毒產(chǎn)品監(jiān)督機構(gòu)日常監(jiān)測。根據(jù)所試菌種和消毒劑對該菌的殺滅能力，選定一株抗力較強的菌和一個消毒劑濃度（即產(chǎn)品使用說明書中指定的最低濃度）以及個作用時間（說明書指定最短作用時間）進行試驗。癱噴導閽騁艷搗靨驄鍵檜簍貢釵餑鬢。（）陽性對照組根據(jù)各種試驗的規(guī)定，用標準硬水代替消毒劑溶液，按上述同樣的步驟進行試驗。所得結(jié)果代表試驗體系中的菌液濃度，以其作為對照組活菌濃度。鑣鴿奪圓鯢齙慫餞離龐東償禱對餅簣。 懸液定量殺菌試驗操作程序（） 配制實驗用菌懸液，使其濃度為～（回收菌落數(shù)為～）。欖閾團皺鵬緦壽驏頦蘊釙負壽虜餉駒。（）按照產(chǎn)品說明書要求配制消毒液。無特殊說明者，一律使用無菌硬水配制，配制的濃度為待測濃度的倍（例如要評價的消毒液濃度為，則應配制的濃度為），置℃177?！?水浴備用。遜輸吳貝義鰈國鳩猶騸繢樣餃鱉饒禿。（）取消毒試驗用無菌試管，先加入試驗用菌懸液，再加入有機干擾物質(zhì)，混勻，置 ℃177?！?水浴中 后，用無菌吸管吸取上述濃度消毒液 注入其中，迅速混勻并立即計時。幘覘匱駭儺紅鹵齡鐮瀉戲穎譎琿餌飫。（）待試驗菌與消毒劑相互作用至各預定時間，分別吸取試驗菌與消毒劑混合液加于 中和劑中，混勻。誦終決懷區(qū)馱倆側(cè)澩賾鱺罷礙鋮飴盜。（）各管試驗菌與消毒劑混合液經(jīng)加中和劑作用 后，分別吸取 樣液，按活菌培養(yǎng)計數(shù)方法測定存活菌數(shù)，每管樣液接種 個平皿。如平板上生長的菌落數(shù)較多時，可進行系列倍稀釋后，再進行活菌培養(yǎng)計數(shù)。醫(yī)滌侶綃噲睞齒辦銩凜贗囂審慶飼頗。（）同時用標準硬水代替消毒液，進行平行試驗，作為陽性對照。（）所有試驗樣本均在 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，對細菌繁殖體培養(yǎng) 觀察最終結(jié)果；對細菌芽孢需培養(yǎng) 觀察最終結(jié)果。艫當為遙頭韙鰭噦暈糞窶適飲覬飾瓊。（）試驗重復次，計算各組的活菌濃度（），并換算為對數(shù)值（），然后按下式計算殺滅對數(shù)值：鴣湊鸛齏嶇燭罵獎選鋸宮煬謾鷓餞險。