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動物細胞培養(yǎng)實驗內容(編輯修改稿)

2025-05-13 22:27 本頁面
 

【文章內容簡介】 0。箱靜止2~3h,濾過除菌,分裝(250mL、250mL、500mL)無菌試驗,寫好組號,20℃保存。注意:用三天內制備的蒸餾水配制,培養(yǎng)基各成分是否完全溶解的判斷方法:將培養(yǎng)液置室溫或4℃冰箱靜止30min,觀察瓶底有無顆粒產生。(五)%NaHCO4液(100mL)(V組配)方法:用雙蒸水100mL配制,濾過除菌,分裝于廣口瓶,4℃冰箱保存,使用時,NaHCO4液要逐滴加入,并不時攪動培養(yǎng)液,以防PH過高。(六)%胰蛋白酶溶液(400mL)(VI組配)1:250的胰蛋白酶(Trypsin)粉 DHanks 400mL先用少量DHanks溶解胰蛋白酶,再將剩下的液體加入混合,置37℃水浴中1h左右(待徹底溶解,液體呈透明為止),用%NaHCO4調整pH至~,用微型濾膜抽濾,分裝置4℃冰箱中保存。(七)%EDTA(乙二胺四乙酸二鈉)溶液(200mL)(VI組配)方法:稱取EDTA4g+200mLDHanks液→%,濾過除菌,備用。四、思考題:配制后液體呈黃色意味著液體的PH發(fā)生了什么變化?用于分離細胞的消化液為什么宜用無Ca、Mg離子的DHanks液或PBS液配制L谷氨酰胺在營養(yǎng)液中有何作用?營養(yǎng)液制備后為什么要小劑量分裝?5實驗四組織塊原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)及生物學檢測一、實驗目的掌握組織塊原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)的基本方法和操作特點及生物學檢測的基本方法和操作要點。二、實驗器材與用品肝組織 平衡鹽(BSS)液(各組自己配的)100mL 細胞培養(yǎng)皿完全培養(yǎng)液 滅菌培養(yǎng)皿1個/人 眼科剪、鑷子、吸管等 %臺盼藍 血球計數板和蓋玻片三、實驗步驟(一)組織塊原代培養(yǎng)將一小塊肝組織置于滅菌培養(yǎng)皿中,用Hanks或DHanks液漂洗表面,吸凈Hanks或DHanks,用眼科剪反復剪成1~2mm3大小(約需20~30min)。吸管吸取1~2mLHanks或DHanks液吹下剪刀中的碎塊,然后,反復吹打,靜置片刻,吸除上清BSS。用吸管吸取小塊肝組織于培養(yǎng)瓶底部,均勻,間距離為宜,加少量培養(yǎng)液(維持濕潤即可)。次日,組織貼壁后,再補加營養(yǎng)液。37℃溫箱培養(yǎng),24~48后觀察。(二)組織塊傳代培養(yǎng)將長成單層的原代培養(yǎng)組織塊從二氧化碳培養(yǎng)箱中取出,在超凈工作臺中倒掉瓶內的培養(yǎng)液,加入少許消化液――%胰蛋白酶溶液。(以液面蓋住細胞為宜),靜置5~10分鐘。在倒置鏡下觀察被消化的細胞,如果細胞變園,相互之間不再連接成片,這時應立即在超凈工作臺中將消化液倒掉,加入3~5mL新鮮培養(yǎng)液,吹打,制成細胞懸液。將細
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