動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容(編輯修改稿)
2025-05-13 22:27 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 0。箱靜止2~3h，濾過(guò)除菌，分裝（250mL、250mL、500mL）無(wú)菌試驗(yàn)，寫(xiě)好組號(hào)，20℃保存。注意：用三天內(nèi)制備的蒸餾水配制，培養(yǎng)基各成分是否完全溶解的判斷方法：將培養(yǎng)液置室溫或4℃冰箱靜止30min，觀察瓶底有無(wú)顆粒產(chǎn)生。（五）%NaHCO4液（100mL）(V組配)方法：用雙蒸水100mL配制，濾過(guò)除菌，分裝于廣口瓶，4℃冰箱保存，使用時(shí)，NaHCO4液要逐滴加入，并不時(shí)攪動(dòng)培養(yǎng)液，以防PH過(guò)高。（六）%胰蛋白酶溶液（400mL）(VI組配)1：250的胰蛋白酶(Trypsin)粉 DHanks 400mL先用少量DHanks溶解胰蛋白酶，再將剩下的液體加入混合，置37℃水浴中1h左右(待徹底溶解，液體呈透明為止)，用％NaHCO4調(diào)整pH至～，用微型濾膜抽濾，分裝置4℃冰箱中保存。（七）%EDTA（乙二胺四乙酸二鈉）溶液（200mL）(VI組配)方法：稱取EDTA4g+200mLDHanks液→%，濾過(guò)除菌，備用。四、思考題：配制后液體呈黃色意味著液體的PH發(fā)生了什么變化？用于分離細(xì)胞的消化液為什么宜用無(wú)Ca、Mg離子的DHanks液或PBS液配制L谷氨酰胺在營(yíng)養(yǎng)液中有何作用？營(yíng)養(yǎng)液制備后為什么要小劑量分裝？5實(shí)驗(yàn)四組織塊原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)及生物學(xué)檢測(cè)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆战M織塊原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)的基本方法和操作特點(diǎn)及生物學(xué)檢測(cè)的基本方法和操作要點(diǎn)。二、實(shí)驗(yàn)器材與用品肝組織 平衡鹽（BSS）液（各組自己配的）100mL 細(xì)胞培養(yǎng)皿完全培養(yǎng)液 滅菌培養(yǎng)皿1個(gè)/人 眼科剪、鑷子、吸管等 %臺(tái)盼藍(lán) 血球計(jì)數(shù)板和蓋玻片三、實(shí)驗(yàn)步驟（一）組織塊原代培養(yǎng)將一小塊肝組織置于滅菌培養(yǎng)皿中，用Hanks或DHanks液漂洗表面，吸凈Hanks或DHanks，用眼科剪反復(fù)剪成1~2mm3大?。s需20~30min）。吸管吸取1~2mLHanks或DHanks液吹下剪刀中的碎塊，然后，反復(fù)吹打，靜置片刻，吸除上清BSS。用吸管吸取小塊肝組織于培養(yǎng)瓶底部，均勻，間距離為宜，加少量培養(yǎng)液（維持濕潤(rùn)即可）。次日，組織貼壁后，再補(bǔ)加營(yíng)養(yǎng)液。37℃溫箱培養(yǎng)，24~48后觀察。（二）組織塊傳代培養(yǎng)將長(zhǎng)成單層的原代培養(yǎng)組織塊從二氧化碳培養(yǎng)箱中取出，在超凈工作臺(tái)中倒掉瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)液，加入少許消化液――%胰蛋白酶溶液。（以液面蓋住細(xì)胞為宜），靜置5～10分鐘。在倒置鏡下觀察被消化的細(xì)胞，如果細(xì)胞變園，相互之間不再連接成片，這時(shí)應(yīng)立即在超凈工作臺(tái)中將消化液倒掉，加入3～5mL新鮮培養(yǎng)液，吹打，制成細(xì)胞懸液。將細(xì)
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