動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容-在線瀏覽
2025-06-03 22:27本頁面
【正文】 VDHanks（1000mL），其他各組不配平衡鹽溶液。Hanks甲液：用約蒸餾水溶解乙液：用約蒸餾水溶解2H2O、KH2POMgSO4(3)(4)100mL用數(shù)滴液溶解克酚紅。將液移入液中。用雙蒸水定容至PH4℃冰箱過夜。濾過消毒，小瓶分裝（500mL、250mL2），冷藏。配制后液體呈桃紅色，(2)Ca、Mg(3)Ca、MgDHanksPBS（二）200mmol/l，L谷氨酰胺（10mL）(II（）+雙蒸水使用：每培養(yǎng)基加L谷氨酰胺。組配)方法：10mL液或雙蒸水溶解萬鏈霉素，再用鏈霉素溶解萬的青霉素，成每毫升青霉素、鏈霉素各萬單位的母液。培養(yǎng)液加青、鏈霉素母液基礎(chǔ)培養(yǎng)液的配制(IV顆粒完全溶解4將、兩混水終定冰靜2~3h濾除裝（250mL、250mL、500mL）無菌試驗(yàn)，寫好組號(hào)，20℃保存。4℃冰箱靜止（五）液（100mL）(V100mLPH（六）%胰蛋白酶溶液（400mL）(VI的胰蛋白酶(Trypsin)粉 DHanks 400mL先用少量溶解胰蛋白酶，再將剩下的液體加入混合，置1h％NaHCO4pH～，用微型濾膜抽濾，分裝置（七）%EDTA（乙二胺四乙酸二鈉）溶液（200mL）(VIEDTA+DHanks→四、思考題：配制后液體呈黃色意味著液體的發(fā)生了什么變化？用于分離細(xì)胞的消化液為什么宜用無離子的液或液配制L谷氨酰胺在營(yíng)養(yǎng)液中有何作用？營(yíng)養(yǎng)液制備后為什么要小劑量分裝？5實(shí)驗(yàn)四二、實(shí)驗(yàn)器材與用品肝組織 平衡鹽（BSS）液（各組自己配的）100mL 細(xì)胞培養(yǎng)皿完全培養(yǎng)液 滅菌培養(yǎng)皿1臺(tái)盼藍(lán) 血球計(jì)數(shù)板和蓋玻片三、實(shí)驗(yàn)步驟（一）組織塊原代培養(yǎng)將一小塊肝組織置于滅菌培養(yǎng)皿中，用或液漂洗表面，吸凈或DHanks，用眼科剪反復(fù)剪成大?。s需吸管吸取HanksDHanksBSS。次日，組織貼壁后，再補(bǔ)加營(yíng)養(yǎng)液。后觀察。（以液面蓋住細(xì)胞為宜），靜置分鐘。3～5mL將細(xì)胞懸液吸出左右，加到另一個(gè)培養(yǎng)瓶中并向每個(gè)瓶中分別加左右培養(yǎng)液，蓋好瓶塞，送回二氧化碳培養(yǎng)箱中，繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)。PH新鮮的培養(yǎng)液呈橙紅色。細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛，代謝酸性產(chǎn)物增多，營(yíng)養(yǎng)液酸性變黃。培養(yǎng)瓶若刷洗不潔，殘留堿性物質(zhì)，致營(yíng)養(yǎng)液增高，呈紫紅色。21/3微生物的污染與排除（1）細(xì)菌污染對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞的影響及污染物的檢測(cè)污染的細(xì)菌量比較大，增殖的細(xì)菌就可以導(dǎo)致培養(yǎng)液外觀渾濁，肉眼就可以判斷。pH，使培養(yǎng)液變渾濁、變色。原來的清晰培養(yǎng)背景變得模糊，大量的細(xì)菌甚至可以覆蓋細(xì)胞，對(duì)細(xì)胞的生存構(gòu)成威脅。（2）真菌污染對(duì)細(xì)胞的影響及污染物的檢測(cè)大多呈白色或淺黃色小點(diǎn)漂浮于培養(yǎng)液表面，肉眼可見；有的
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