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正文內(nèi)容

植株生理生長指標(biāo)的測定(編輯修改稿)

2025-05-04 23:15 本頁面
 

【文章內(nèi)容簡介】 1%磺胺4444444%萘基乙烯胺4444444每管含亞硝態(tài)氮/μg0(二)樣品中硝酸還原酶活力測定 酶的提取,剪碎于研缽中置于低溫冰箱冰凍30min,取出置冰浴中加少量石英砂及4mL提取緩沖液,研磨勻漿,轉(zhuǎn)移于離心管中在4℃、4000r/min下離心15min,上清液即為粗酶提取液。酶的反應(yīng) mL試管中,混勻,在25℃水浴中保溫30min,對照不加NADH溶液。終止反應(yīng)和比色測定 保溫結(jié)束后立即加入1mL磺胺溶液終止酶反應(yīng),再加1mL萘基乙烯胺溶液,顯色15min后于4000r/min下離心5min,取上清液在540nm下比色測定吸光度。根據(jù)回歸方程計算出反應(yīng)液中所產(chǎn)生的亞硝態(tài)氮總量(μg)。三、結(jié)果計算樣品中硝酸還原酶活性μg/g?h=xVSVTWtx—反應(yīng)液酶催化產(chǎn)生的亞硝態(tài)氮總量(μg); VT—提取酶時加入的緩沖液體積,mL;VS—酶反應(yīng)時加入的粗酶液體積,mL; W—樣品鮮重,g;t —反應(yīng)時間,h。Ⅱ活體法一、材料、儀器設(shè)備及試劑(一)實(shí)驗(yàn)材料 水稻、小麥或其他植物葉片、幼穗等。 (二)試劑 亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液:準(zhǔn)確稱取分析純NaNO2 ,然后再吸取5mL定容至1000mL,即為含亞硝態(tài)氮的1μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)液。 1%磺胺溶液:(25mL濃鹽酸加水定容至100mL即為3mol/L HCl)。 %萘基乙烯胺溶液: mL無離子水中,貯于棕色瓶中。 mol/L KNO3溶液: mol/L 。30%三氯乙酸溶液:30g三氯乙酸,水溶后定容至100mL。(三)儀器設(shè)備 真空泵、真空干燥器、小燒杯、玻璃瓶塞、其他用具同離體法。二、實(shí)驗(yàn)步驟(一)標(biāo)準(zhǔn)曲線制作:同離體法(二)酶反應(yīng)及活性測定取樣:~ 4份,剪成1cm左右的小段,放于小燒杯中,用直徑略小于燒杯直徑的玻璃瓶塞將材料全部壓于杯底,其中1份作對照,另外3份做酶活性測定用。反應(yīng):先向?qū)φ展苤屑尤?mL 30%三氯乙酸,然后各管中都加入9mL ,混勻后立即放入干燥器中,抽氣1min再通入空氣,再抽真空,反復(fù)幾次,以排除組織間隙的氣體,至葉片完全軟化沉入杯底,以便底物溶液進(jìn)入組織。最后通入氮?dú)饷芊夂螅?5℃黑暗中反應(yīng)30min,再分別向測定管(對照管除外)加入1mL 30%三氯乙酸終止酶反應(yīng)。比色測定:將各管搖勻靜置2min后,各取2mL反應(yīng)液,加入1mL磺胺和1mL萘基乙烯胺,搖勻顯色15min后,于4000r/min下離心5min,取上清液于540nm處測其吸光度。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出反應(yīng)液中生成的亞
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