植株生理生長指標(biāo)的測定(編輯修改稿)
2025-05-04 23:15 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 1%磺胺4444444%萘基乙烯胺4444444每管含亞硝態(tài)氮/μg0（二）樣品中硝酸還原酶活力測定 酶的提取，剪碎于研缽中置于低溫冰箱冰凍30min，取出置冰浴中加少量石英砂及4mL提取緩沖液，研磨勻漿，轉(zhuǎn)移于離心管中在4℃、4000r/min下離心15min，上清液即為粗酶提取液。酶的反應(yīng) mL試管中，混勻，在25℃水浴中保溫30min，對照不加NADH溶液。終止反應(yīng)和比色測定 保溫結(jié)束后立即加入1mL磺胺溶液終止酶反應(yīng)，再加1mL萘基乙烯胺溶液，顯色15min后于4000r/min下離心5min，取上清液在540nm下比色測定吸光度。根據(jù)回歸方程計算出反應(yīng)液中所產(chǎn)生的亞硝態(tài)氮總量（μg）。三、結(jié)果計算樣品中硝酸還原酶活性μg/g?h=xVSVTWtx—反應(yīng)液酶催化產(chǎn)生的亞硝態(tài)氮總量（μg）； VT—提取酶時加入的緩沖液體積，mL；VS—酶反應(yīng)時加入的粗酶液體積，mL； W—樣品鮮重，g；t —反應(yīng)時間，h。Ⅱ活體法一、材料、儀器設(shè)備及試劑（一）實(shí)驗(yàn)材料 水稻、小麥或其他植物葉片、幼穗等。 （二）試劑 亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取分析純NaNO2 ，然后再吸取5mL定容至1000mL，即為含亞硝態(tài)氮的1μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)液。 1％磺胺溶液：（25mL濃鹽酸加水定容至100mL即為3mol/L HCl）。 ％萘基乙烯胺溶液： mL無離子水中，貯于棕色瓶中。 mol/L KNO3溶液： mol/L 。30%三氯乙酸溶液：30g三氯乙酸，水溶后定容至100mL。（三）儀器設(shè)備 真空泵、真空干燥器、小燒杯、玻璃瓶塞、其他用具同離體法。二、實(shí)驗(yàn)步驟（一）標(biāo)準(zhǔn)曲線制作：同離體法（二）酶反應(yīng)及活性測定取樣：~ 4份，剪成1cm左右的小段，放于小燒杯中，用直徑略小于燒杯直徑的玻璃瓶塞將材料全部壓于杯底，其中1份作對照，另外3份做酶活性測定用。反應(yīng)：先向?qū)φ展苤屑尤?mL 30%三氯乙酸，然后各管中都加入9mL ，混勻后立即放入干燥器中，抽氣1min再通入空氣，再抽真空，反復(fù)幾次，以排除組織間隙的氣體，至葉片完全軟化沉入杯底，以便底物溶液進(jìn)入組織。最后通入氮?dú)饷芊夂螅?5℃黑暗中反應(yīng)30min，再分別向測定管（對照管除外）加入1mL 30%三氯乙酸終止酶反應(yīng)。比色測定：將各管搖勻靜置2min后，各取2mL反應(yīng)液，加入1mL磺胺和1mL萘基乙烯胺，搖勻顯色15min后，于4000r/min下離心5min，取上清液于540nm處測其吸光度。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出反應(yīng)液中生成的亞
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