【文章內容簡介】 模式，報告結果的不一致對于臨床實驗室來說是不可回避，也是目前醫(yī)療糾紛主要集中點和“結果互認”的最大障礙，因此在減小室內變異的同時必須引入陽性和弱陽性的報告方式。八、原始記錄ELISA檢測結果變異大，不同體系難以溯源，因結果不一致而引起的醫(yī)療糾紛逐日增多，因此ELISA檢測的原始存根必須完整而全面地保存，包括布局，原始吸光度值，檢測的陰陽結果，檢測者，試劑廠家，批號，質控品來源及批號等。嚴禁人為修改檢測結果。九、質量控制（室內質控）ELISA定性試驗的臨床意義在于是否檢出病原體，與檢出量無關，因此質量控制（quality control, QC）要保證試驗的靈敏度和重復性。目前定性實驗的質控規(guī)則還還存在爭議，目前有以下幾種比較流行的理論：⑴室內質控品室內質控品的穩(wěn)定以及合適的濃度是運用一切質控規(guī)則的前提。可選擇S/CO值減去精密度測定中得到的三倍批間C%（通常的ELISA測定批間變異（C%）在15%左右）與該S/CO值的乘積（意即三倍SD）仍大于1的質控血清作監(jiān)測重復性的室內質控品用。 計算公式：S/CO（13C%）=S/CO3SD。同時選擇S/。⑵ “即刻性”質控一些實驗室不是每天進行ELISA項目的檢驗，而ELSIA部分試劑盒效期短 ，用同一批號試劑盒連續(xù)常規(guī)測20次，難度較大。采用即刻法質控統(tǒng)計方法，只需連續(xù)測3次，即可對第3次檢驗結果進行質控。①先將測定值從小到大排列，X1最小，Xn最大 ；②計算X和s；③計算SI上限值和下限值。SI上=（X最小X）/S，SI下=（X最大X）/S；④對照SI表，檢查是否出控。SI上、下限≤規(guī)定值，在控； SI上或下限規(guī)定值，失控。⑶LeeyJennings質控圖結合Westgard多規(guī)則質控方法LeeyJennings質控圖以及Westgard多規(guī)則質控方法最早應用于生化檢測的質量控制，在ELISA檢測中仍為探索階段，一般認為：①一 次超出3SD；②連續(xù)二次超出2SD；③3～5次連續(xù)處于一側的2SD之內；④5～7次連續(xù)偏向橫軸的一側，均為失控。目前多采用一次超過2SD作為“告警”，一次超出3SD為“失控”。另外還有Westgard多規(guī)則質控規(guī)則、累積和（CUSUM）質控規(guī)則等質控方法。⑷衛(wèi)生部臨床檢驗中心確定的質控方法：室內質控品：定性測定的室內質控品，除了試劑盒附帶的陰陽性對照外，實驗室還應該選擇至少2個室內質控品，其中一個為弱陽性質控品，接近Cutoff值，S/Co值應該為2～4之間；另一個為陰性質控品。定量測定則至少要求一個水平的質控品。測定頻度：每臺儀器，每次檢測患者樣本時至少測定一次室內質控品；ELISA測定每塊板都要測定室內質控品。質控圖繪制：定性測定可采用弱陽性質控品的S/Co值作質控圖。定量測定參照臨床化學的繪制方法。質控判斷規(guī)則：定性測定為弱陽性的質控品不能測定為陰性；陰性質控品不能測定為陽性。重復性的判斷規(guī)則為12S（警告限），13S為失控限。定量測定參照臨床化學的判斷規(guī)則。⑸室內質控的現(xiàn)狀及應對措施免疫質控品制作困難，不管是自制血清或者購于其它機構，其穩(wěn)定性和濃度很難達到要求，加之ELISA影響因素較多，失控后很難找到確切的原因。因此如何開展ELISA室內質控一直困擾著臨床檢測者?；诖?，不同實驗室采取了不同的應對措施，舉例如下：①選擇衛(wèi)生部臨床檢驗中心（NCCL）的低值質控血清作為室內質控品，儲備量以3個月，采用一次超過2SD作為“告警”，一次超出3SD為“失控”的質控規(guī)則，（但該法對于HBeAb（4NCU/ml）、 HBcAb(2NCU/ml)檢測不適用，因為即使質控在控，其結果也可能為陰性）；②由于質控品不穩(wěn)定，每個月需重新設立靶值 ，并根據(jù)常規(guī)C設定SD（SD= C175。）；③陰陽性對照正常，室內弱陽性和陰性質控正常，且沒有出現(xiàn)“花板”（洗板不干凈，背景顏色深）的情況下認為該檢測批有效，但仍需對位于“灰區(qū)”和弱陽性的HBsAg、HBeAg結果及少見模式結果進行復查，避免偶然因素及孔間差對結果造成影響；④若陰陽性對照、陰性質控異常，或出現(xiàn)“花板”的情況則必須整批復查；⑤在陰陽性對照、陰性質控正常且未出現(xiàn)“花板”的情況下，弱陽性質控S/Co超出3SD時復查位于“灰區(qū)”標本，超出+3SD時則復查弱陽性標本；⑥對于抗體檢測，尤其是競爭法檢測HBeAb、HbcAb，由于不同試劑盒、不同檢測方法間CO值存在差異及變異系數(shù)大等因素，結果缺乏可比性，失控后的處理很難滿意地解決，在沒有統(tǒng)一的判斷標準、較小的變異系數(shù)及明確的臨床意義的情況下，引入弱陽性報告方式在臨床實踐中證明可行；⑦室內質控的評價：認真分析每一次室內質控失控的原因，并對各項檢測的均值，C等進行月與月之間的比較分析，及時發(fā)現(xiàn)試劑盒檢出能力的變化及操作中存在的問題，并采取適當?shù)拇胧﹣硖岣邫z測的精準性。（室間質評）室間質評是一種回顧性評價，主要是控制實驗結果的準確性，也是某些定量實驗量值的溯源。作為臨床實驗室應當積極參與各級室間質評計劃，其要點是保證同病人標本一樣對待室間質評物。必須強調的是室間質量評價結果必須同室內質控一并分析，查找原因以期改進工作中的不足，同時指導實驗室選擇合適的試劑盒。十、免疫檢驗存在的問題HB基因組變異對病毒HBsAg和HBeAg測定影響問題，以及如何評價試劑盒對這些變異株的檢測效能；HBcAb檢測在保證輸血安全中的意義；HBeAb、HBcAb溯源性問題；HBcAb檢測模式的問題等均困擾著臨床檢測者。[1] 李金明. 臨床酶免疫測定技術. 第1版. 北京：人民軍醫(yī)出版社，2005：87105.[2] 沈霞. 臨床免疫學與免疫學檢驗新技術. 第1版. 北京：人民軍醫(yī)出版社，2002：1219.[3] ：人民衛(wèi)生出版社，1999：140.[4] 李金明. 乙型肝炎病毒血清標志物測定及結果解釋的若干問題. 中華檢驗醫(yī)學雜志，2006，29（5）：385389.[5] 衛(wèi)生部臨床檢驗中心，中國醫(yī)院協(xié)會臨床檢驗管理專業(yè)委員會. 《醫(yī)療機構臨床實驗室管理辦法》及配套文件，2006：1011.在定性免疫測定中，確定合適的陰陽性判斷值對減少假陽性和假陰性具有重要意義。處于陽性判斷值定值域中的測定結果可歸為可疑，即ELISA測定的“灰區(qū)”。目前國內用做傳染性病原體抗原或抗體檢測的ELISA試劑盒沒有統(tǒng)一在定性免疫測定中，確定合適的陰陽性判斷值對減少假陽性和假陰性具有重要意義。處于陽性判斷值定值域中的測定結果可歸為可疑，即ELISA測定的“灰區(qū)”。目前國內用做傳染性病原體抗原或抗體檢測的ELISA試劑盒沒有統(tǒng)一的“灰區(qū)”設置標準，而僅僅以“陽性判斷值”（Cut off Value，Co值）來判斷陰陽性結果，這就會涉及到檢測結果低于但接近Co值的血液是否合格的問題。根據(jù)ELISA測定的Co值來判斷結果，假陽/陰性不可能完全避免，其只不過是將假陽/陰性降低到較低的比例而已。那么“灰區(qū)”范圍設置多大才比較合適，我們就此問題進行了初步探討，現(xiàn)報告如下。1 材料與方法 1．1 樣本 2007年5月—9月，本中心初、復檢抗HCV結果不一致但復核結果為陰性的樣本1 394份。2006年1月—2007年9月抗HCV陽性報廢的血液樣本643份，并特意收集這期間初、復檢結果不一致且陰性結果協(xié)方差值（Cov值）≥050的樣本44份。1 NCU/ml抗HCV定值血清(批號0802)由衛(wèi)生部臨床檢驗中心提供。樣本采集、保存與運輸按照“全血及成分血質量要求（GB18469—2001）”中“全血的質量要求”收集全血，在血液采集后4—6 h內以1 500 r/min，15 min離心取上清收集血漿并分成3份，分別用于ELISA方法 抗HCV、FQPCR方法HCV RNA檢測和復核檢測。20℃下保存期為3個月、70℃下保存期為1年，運輸采用干冰。 1．2 試劑與儀器 酶聯(lián)免疫試劑盒初檢試劑(廈門新創(chuàng)公司)、復檢試劑（上?？迫A公司）、病毒核酸擴增熒光檢測試劑盒（達安基因股份有限公司，批號：H10762）；（上海浩源生物科技有限公司，批號：20070021）、復核試劑測試系統(tǒng)［COBAS公司 AmpliScreen HCV Test (V20)，批號：H10762］。核酸擴增實時熒光基因分析儀（達安基因股份有限公司，DA7600）、核酸自動提取系統(tǒng)（Chemagen公司，Magnetic Separation Module I型）、核酸提取儀（TBG公司，EZ Beads32）、PCR核酸擴增檢測技術（ABI公司，7500實時PCR分析系統(tǒng)）、全自動樣品處理機（TECAN公司，RSP200/8型）、全自動酶免分析儀（Microlab公司，F(xiàn)AME 24/20型）。 1．3 實驗設計 初復檢篩查實驗采用ELISA方法，對初次具反應性的樣本用相同試劑再次雙孔復試，所有陰性樣本再用FQPC