體外受精與動(dòng)物克隆技術(shù)(編輯修改稿)
2025-02-17 14:22 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 同階段胚胎細(xì)胞的分化時(shí)間和發(fā)育潛力了解很少；（ 3）最后還存在同卵多胎的局限性，從目前的研究來(lái)看，由一枚胚胎通過(guò)胚胎分割方式獲得的后代數(shù)量有限。迄今，最好的結(jié)果是由一枚牛胚胎獲得 3個(gè)牛犢，這說(shuō)明孿生胚胎的發(fā)育潛力很有限。因此，通過(guò)胚胎分割技術(shù)生產(chǎn)大量克隆動(dòng)物目前難以取得進(jìn)展。 2. 胚胎分割目前存在的問(wèn)題和發(fā)展前景 第二節(jié) 核移植與動(dòng)物克隆 一、什么是動(dòng)物克隆？ 動(dòng)物克隆是一種通過(guò)核移植過(guò)程進(jìn)行無(wú)性繁殖的 技術(shù)。發(fā)育早期的動(dòng)物胚胎細(xì)胞，或成年動(dòng)物的體 細(xì)胞，經(jīng)顯微手術(shù)移植到去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中 之后，在適當(dāng)?shù)臈l件下，可以重新發(fā)育成正常胚 胎。這種胚胎被移植到生殖周期相近的母體之中， 可以發(fā)育成為正常動(dòng)物個(gè)體。 經(jīng)過(guò)核移植而產(chǎn)生的 動(dòng)物，其遺傳結(jié)構(gòu)與細(xì)胞核供體完全相同。 這種不 經(jīng)過(guò)有性生殖過(guò)程，而是通過(guò)核移植生產(chǎn)遺傳結(jié)構(gòu) 與細(xì)胞核供體相同動(dòng)物個(gè)體的技術(shù)，就叫做動(dòng)物克 隆。 核移植技術(shù)： 所謂核移植技術(shù)就是利用顯微操作技術(shù)將一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核移植到另一個(gè)細(xì)胞中，或者將兩個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核（或細(xì)胞質(zhì)）進(jìn)行交換，從而可能創(chuàng)造無(wú)性雜交生物新品種的一項(xiàng)技術(shù)。 胚 胎 克 隆： 使用的核供體細(xì)胞如果來(lái)自多細(xì)胞階段 的胚胎，叫做 胚胎克隆 。 體細(xì)胞克?。?使用的核供體細(xì)胞來(lái)自動(dòng)物體，叫做 體細(xì)胞克隆 。 二、兩棲類細(xì)胞核移植 ? 1938年 Spemann最先提出將多細(xì)胞胚胎的每一個(gè)細(xì)胞核移植到去掉核的卵母細(xì)胞中，使它們重新發(fā)育成胚胎的設(shè)想。 ? 1952年， Briggs和 King沿用 Spemann的思路和實(shí)驗(yàn)技術(shù)，首次獲得兩棲動(dòng)物美洲豹蛙胚胎細(xì)胞核移植的后代． 核供體為囊胚期的胚胎細(xì)胞 —— 實(shí)驗(yàn)成功 核供體為原腸胚期的中胚層和內(nèi)胚層細(xì)胞 —— 實(shí)驗(yàn)失敗 ?1958年到 1962年，英國(guó)劍橋大學(xué)的 John Gurdon和 Machineer利用爪 蟾原腸內(nèi)胚層細(xì)胞核移植，培育出可育的非洲爪蟾． ?1970年 John Gurdon以同樣的方法，用青蛙腳蹼角質(zhì)化細(xì)胞進(jìn)行移核 試驗(yàn)，蛙卵發(fā)育成了蝌蚪。 三、魚類的核移植 從 1961年開始，童第周等以金魚和鳑鮍魚為材料，進(jìn)行魚類不同亞科間的細(xì)胞核移植獲得成功，用以研究雜交細(xì)胞核與純種細(xì)胞核在發(fā)育功能上的差異，以及細(xì)胞質(zhì)對(duì)細(xì)胞核的影響． 1979年，中國(guó)科學(xué)院武漢水生物研究所利用鯽魚做移核試驗(yàn)。他們把鯽魚囊胚期細(xì)胞經(jīng)過(guò) 385天 59代連續(xù)傳代培養(yǎng)后，再將此種培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞核移植到同種鯽魚的未受精卵中。到 1980年 4月，他們成功地培育了兩尾無(wú)性繁殖的幼魚，其中一條發(fā)育正常。 1989年，童第周、牛滿江又將鯽魚胚胎細(xì)胞核移入鯉魚去核的未受精卵中，實(shí)現(xiàn)了不同種間的核質(zhì)雜交，成功地?zé)o性繁殖了“鯉鯽核魚”新品種。 四、哺乳類的細(xì)胞核移植 1977年，美國(guó)緬因州巴爾港的杰克遜實(shí)驗(yàn)室用“亞無(wú)性繁殖”的方式，培育出 7只單親小鼠。 ?將卵細(xì)胞受精，在精、卵核融合之前，把精核去掉，然后放入加有適量細(xì)胞松馳 B的溶液中。 ?經(jīng)此番處理的卵細(xì)胞的染色體復(fù)制后出現(xiàn)了兩個(gè)核，將此雙核細(xì)胞放入正常培養(yǎng)液中培養(yǎng)。 ?卵中的雙核細(xì)胞自動(dòng)融合，并且細(xì)胞開始分裂。 ?將此種胚胎移入母鼠子宮培育。 ?生產(chǎn)出 7只單親小鼠。 1981年，瑞士日內(nèi)瓦大學(xué)和美國(guó)杰克遜實(shí)驗(yàn)室合作，首次對(duì)小鼠卵進(jìn)行移核試驗(yàn)獲得成功。他們將囊胚內(nèi)細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞的核移入去核的受精卵中，經(jīng)培養(yǎng)移核卵發(fā)育至囊胚期，再將此胚胎移入同步孕鼠子宮內(nèi)，最后產(chǎn)下兩雌一雄仔鼠，并發(fā)育成了可育的個(gè)體。 五、核移植技術(shù)的一般操作程序 核移植克隆哺乳動(dòng)物的技術(shù)操作過(guò)程主要包括核受體和核供體的處理和制備、核移植、重組胚的體外或體內(nèi)培養(yǎng)、核移植胚胎移入代孕母畜（寄母）等步驟 。 1．核受體細(xì)胞的準(zhǔn)備 去核卵母細(xì)胞常常作為核移植的受體細(xì)胞。這是因?yàn)樵诼涯讣?xì)胞的細(xì)胞質(zhì)含有某種特定的因子，可以使移植核中所含有的基因表達(dá)程序發(fā)生重新排列，使已經(jīng)分化了的細(xì)胞重新回到發(fā)育過(guò)程的原點(diǎn)，同受精卵一樣開始個(gè)體發(fā)育過(guò)程。 卵母細(xì)胞的來(lái)源有兩種方式：一是用激素對(duì)雌體進(jìn)行超排處理，從輸卵管沖出體內(nèi)成熟的 MⅡ 卵母細(xì)胞。二是從屠宰場(chǎng)收集卵巢，吸出濾泡中的卵丘 — 卵母細(xì)胞復(fù)合體 (COCs)，在體外培養(yǎng)成熟后作為受體。 2．核供體細(xì)胞的準(zhǔn)備 在核移植操作中，細(xì)胞核供體細(xì)胞首先必須是完整的二倍體，該細(xì)胞必須保持有供體動(dòng)物完整的基因組； 其次，供體細(xì)胞核必須能夠在受體細(xì)胞質(zhì)的
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