【文章內(nèi)容簡介】 llele）； 由于群體中的突變，同一座的基因系列稱為 復等位基因 。 HLA復合體的每一座存在為數(shù)眾多的復等位基因，由于各個座位基因是隨機組合的，故人群中的 基因型 可達 108之多。 A5 A10 B40 B16 A1 A2 B8 B35 甲 （ 6） 乙 （ 6） A5， A10， B40， B16 復等位基因 第十七章 器官移植及其免疫學檢驗 一對等位基因同為顯性稱為共顯性 。 HLA復合體中每一個等位基因均為共顯性，從而大大增加了人群中的 HLA表型的多樣性，達到 107數(shù)量級。因此除了同卵雙生者外，無關個體間 HLA型別完全相同的可能性極小。 A2 A10 B40 B16 A1 A2 B8 B35 HLA molecule ： A1， A2， B8， B35 甲 甲 乙 乙 HLA molecule ： A2， A10， B40， B16 共顯性表達 第十七章 器官移植及其免疫學檢驗 HLA的單元型遺傳 第十七章 器官移植及其免疫學檢驗 ① PCRRFLP（ restriction fragment length polymorphism） ② PCRSSO（ sequence specific oligonucleotide probes） ③ PCRSSP（ sequence specific primers） ④ PCRSSCP（ singlestrand conformation polymorphism ） （二） HLA DNA分型技術 第十七章 器官移植及其免疫學檢驗 ? 基本原理： 根據(jù) HLA核苷酸堿基序列的多態(tài)性和已知的 DNA序列，設計一系列等位基因型別特異性順序引物。引物的 3’端堿基根據(jù)多態(tài)性序列與其嚴格互補。因此，每一型別都具有特定的引物對相對應。通過特定的 PCR反應體系擴增各等位基因的型別特異性 DNA片段，產(chǎn)生相對應的特異性擴增產(chǎn)物條帶。 PCRSSP分型法 第十七章 器官移植及其免疫學檢驗 HLA DRB1 等位基因 PCR SSP 分型引物序列 Table 1. Sense primer squence of HLA DRB1 alleles typing by PCR SSP HLA D RB1 Allele Primer sequence 5’end Primer sequence 3’end 0101 TTG TGG CAG CTT AAG TTT GAA T CTG CAC TGT GAA GCT CTC AC 1501 TCC TGT GGC AGC CTA AGA G CCG CGC CTG CTC CAG GAT 1601 TCC TGT GGC AGC CTA AGA G AGG TGT CCA CCG CGG CG 0301 TAC TTC CAT AAC CAG GAG GAG A TGC AGT AGT TGT CCA CCC G 0405 GTT TCT TGG AGC AGG TTA AAC A CTG CAC TGT GAA GCT CTC AC 1101 GTT TCT TGG AGT ACT CTA CGT C CTG GCT GTT CCA GTA CTC CT 1202 AGT ACT CTA CGG GTG AGT GTT CAC TGT GAA GCT CTC CAC AG 1301 TAC TTC CAT AAC CAG GAG GAG A CCC GCT CGT CTT CCA GGA T 1401 GTT TCT TGG AGT ACT CTA CGT C TCT GCA ATA GGT GTC CAC CT 0706 CCT GTG GCA GGG TAA GTA TA CCC GTA GTT GTG TCT GCA CAC 0803 AGT ACT CTA CGG GTG AGT GTT CTG CAG TAG GTC TCC ACC AG 第十七章 器官移植及其免疫學檢驗 ? PCRSSP分型法操作步驟 1． 基因 DNA提取 2． 引物混合物的組成 3． TaqDNA聚合酶 4． 擴增條件的選擇 5． 電泳 6． 結果判斷 第十七章 器官移植及其免疫學檢驗 1： 陰性對照 ； 2： 為 DR3； 3： 為 DR11； 4： 為 DR4； 5:為DR1； 6： 為 DR12； 7： 為 DR15； 8： 為 DR12； 9： 為 Mark。 圖： HLADR DR15陽性的雜合子電泳圖譜 第十七章 器官移植及其免疫學檢驗 PCRSSO分型法 ? PCR 基因片段擴增后利用已知的序列特異性寡核苷酸探針，通過雜交的方法進行擴增片段的分析鑒定。探針與 PCR 產(chǎn)物在一定條件下雜交具有高度的特異性，嚴格遵循堿基互補的原則。探針可用放射性同位素標記，通過放射自顯影的方法檢測，也可用非放射性標記如地高辛、生物素、過氧化物酶等進行相應的標記檢測。 基本原理 第十七章 器官移植及其免疫學檢驗 PCRSSO技術分辨率高，特異性強，可區(qū)分只差一個核苷酸的序列，其檢出范圍寬，是HLA基因分型技術中最好的一種。 方法評價 第十七章 器官移植及其免疫學檢驗 多熒光微珠免疫分析 是將標記有生物素的序列特異性引物分別擴增HLA A、 B、 DRB1等基因座位的特異性片段 ,擴增產(chǎn)物與事先包被在不同顏色的磁珠上的已知的寡核苷酸探針進行雜交 ,經(jīng)沖洗將沒有雜交上的DNA洗脫 ,與探針結合的標記有生物素的 DNA 片段與熒光素標記的親和素結合，多熒光微珠在Luminex100流式細胞儀上進行判讀結果。 基本原理 第十七章 器官移植及其免疫學檢驗 同其他技術相比較，其最獨特的優(yōu)勢是可在幾秒內(nèi)同時檢測上千個分子 , 對 HLA多個位點進行低、中、高分辨率的分型。 方法評價 第十七章 器官移植及其免疫學檢驗 二、紅細胞血型抗原 ? 人紅細胞血型抗原是重要的組織相容性抗原 ， 移植前應檢測供者與受者的血型是否相符 ， 最佳選擇是二者血型相同 ， 或至少符合輸血原則 。 ? 輸血原則： O型受者只接受 O型移植物； A型受者接受 A型或 O型； B型受者接受 B型或 O型； AB型受者接受范圍較廣 。 Rh抗原應相配 。 第十七章 器官移植及其免疫學檢驗 三、交叉配型 ? 將受者和供者 淋巴細胞進行混合培養(yǎng) （ mixed lymphocyte culture, MLC）， 由于淋巴細胞表面富有 HLAI和 HLA