【文章內容簡介】 究迅速發(fā)展，特別是 分裂素與生長素的比例控制控制器官分化（ differentiation）的激素模式的建立 ，使植物組織培養(yǎng)的技術與理論體系得以形成。 White（ 1934）在培養(yǎng)基中加入酵母浸出液和蔗糖，培養(yǎng)番茄根獲得成功。接著，他用 3種 B族維生素 —— 吡哆醇（ B6）、硫胺素（ B1）和煙酸（ B3）代替了酵母浸出液，建立了適合于根培養(yǎng)的 White培養(yǎng)基。 Gautheret（ 1934）在 Knop溶液中加入 B族維生素和 IAA后，使山毛柳形成層生長顯著增加。 后來， Skoog和崔瀓（ 1948）發(fā)現(xiàn)， 腺嘌呤與生長素的比例 是控制煙草髓愈傷組織上芽和根形成的主要條件之一。隨著細胞分裂素的發(fā)現(xiàn)， Skoog和 Miller（ 1957）提出植物激素控制器官形成的概念，指出在煙草髓組織培養(yǎng)中，根和芽的分化取決于兩類生長調節(jié)劑的相對濃度， 比例高時促進生根，比例低則促進芽的分化 。這一概念至今仍然被人們所接受。 Reinert和 Steward（ 1958）對胡蘿卜懸浮培養(yǎng)細胞和愈傷組織形成體細胞胚作了報道，用實驗科學地論證了植物細胞全能性，標志著植物生物技術快速發(fā)展的開始。 ? 從植物細胞全能性理論的提出到其被實驗科學地證實，植物組織培養(yǎng)研究領域走過了近 60年的發(fā)展歷程。眾多學者睿智性的實驗夠西和卓有成效的啟發(fā)性研究，激勵著一代又一代學者執(zhí)著的進行植物生長發(fā)育奧秘的探知。當影響植物細胞分裂和器官形成的機理被揭示后，學者們對該領域進行了全面研究，獲得的成果枝繁葉茂，發(fā)表的文章浩如煙海，形成了一套成熟的植物組織培養(yǎng)的理論體系和技術方法，擁有著極其廣泛的應用領域，從而在生物科學中建成了這門具有理論、技術和應用的科學。 ? 1958年， ，應用 外源細胞分裂素可以打破頂端優(yōu)勢 ，促使休眠的測壓啟動生長，從而形成微型的多枝多芽小灌木叢狀結構。 ? 1960年， 提出了利用 莖尖離體快速繁殖蘭花屬的方法，該方法繁殖系數(shù)極高，并能脫除植物病毒。利用此技術國際上相繼建立了“ 蘭花工業(yè) ”（ orchid industry）。 ? 1960年，英國學者 番茄根和煙草葉片，獲得了原生質體，開創(chuàng)了 植物原生質體培養(yǎng)的研究 。 ? 1969年， Kaul發(fā)現(xiàn)三角葉薯蕷懸浮培養(yǎng)物可以生產(chǎn)薯蕷皂苷配基。目前利用組織培養(yǎng)途徑生產(chǎn)的此生代謝物有皂苷類、甾醇類、生物堿、醌類、氨基酸和蛋白質等。 ? 1972年， 體的融合實驗，獲得了第一株體細胞種間雜種植株。 植物細胞工程技術的應用 試管苗快速繁殖 ? 試管苗快速繁殖 可以通過莖尖、側芽、種子和愈傷組織再生苗以及脫毒苗等進行。最早研究試管苗繁殖的有， Knudson （ 1992）研究了蘭花種子的非共 生萌發(fā)，中國羅 士韋教授在 1945 年率先進行的植 物莖尖培養(yǎng)，對 植物生物技術發(fā) 展作出 了重要貢 獻。 據(jù)許智宏院士統(tǒng)計， 1996年中國已經(jīng)有700種植物通過莖尖和愈傷組織培養(yǎng)再生植株。目前，已經(jīng)試管苗繁殖并實現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化的植物有蘭花、馬鈴薯、甘薯、香蕉、草莓、楊樹、桉樹、蘋果、安祖花、月季等。試管苗年生產(chǎn)量達到千萬株以上的植物有蘭花、馬鈴薯、香蕉、草莓和楊樹等。 花藥、胚胎培養(yǎng) ? 花藥或小孢子和未成熟胚珠培養(yǎng) 是獲得純合雜種的主要途徑。 ? Vasil（ 1957）最早對洋蔥花藥的培養(yǎng)進行了研究，到 1964年， Guha和 Maheshwari獲得了曼陀羅植物花藥培養(yǎng)來源的單倍體植株，而從未成熟胚珠培養(yǎng)產(chǎn)生單倍體植株直到 1976年才成功。朱至清教授設計的 N6培養(yǎng)基，適合水稻和其他禾本科植物花藥培養(yǎng)，在世界各國實驗室中得到應用，促進了花藥培養(yǎng)的研究。 ? 據(jù) Bhojwani和 Razdan（ 1996）統(tǒng)計，有25科 134種，種植面積到達 116萬公頃；22個水稻新品種，種植面積 100萬公頃；玉米 1個新品種推廣面積 10000公頃；甜椒 1個新品種種植面積 5800公頃。中國在花藥和胚珠培養(yǎng)研究領域中出于世界領先地位。 次生代謝產(chǎn)物 ? 在 1942年， Gautheret就報道了組織培養(yǎng)中的 次生代謝產(chǎn)物 ，但直到 Kaul和 Staba（ 1976）發(fā)現(xiàn)阿密茴（ Ammi visnaga）培養(yǎng)細胞的次生代謝產(chǎn)物與整體植物相等后，通過細胞培養(yǎng)生產(chǎn)有用化合物的研究才得以發(fā)展。現(xiàn)今國內外開始研究工廠化培養(yǎng)細胞生產(chǎn)有用化合物。例如紫草細胞生產(chǎn)紫草寧，長春花細胞生產(chǎn)吲哚堿，煙草生產(chǎn)煙堿，人參細胞生產(chǎn)人參皂苷和紅豆杉細胞生產(chǎn)紫杉醇等。 體細胞變異 ? 植物組織培養(yǎng)中體細胞變異的研究起步較晚， Carlsin（ 1970）進行生物化學誘變并篩選出煙草突變體。 1981年， Larkin和Scowcroft提出體細胞變異的概念。據(jù)Maluszynshi等（ 1995）統(tǒng)計，利用組織培養(yǎng)誘導、篩選和培育的突變體品種有1700多個，涉及 154種植物。 原生質體培養(yǎng) ? 原生質體培養(yǎng)在 Cocking（ 1960）利用纖維素酶和果膠酶降解細胞壁獲得產(chǎn)量高的原生質體之后發(fā)展起來。 1971年，Takebe等獲得煙草葉肉原生質體再生植株。據(jù)許智宏院士（ 1999）統(tǒng)計，通過原生質體培炎成功的植物涉及 46個科，161個屬， 368種或亞種。中國學者首次報道的原生質體再生植株的植物有 50多種。在原生質體培養(yǎng)成功的基礎上，Carlson等（ 1972）獲得了粉藍煙草（ Nicotiana glauca）和。 Melchers等（ 1978）獲得了馬鈴薯和番茄的屬間體細胞雜種，而且該雜種具有耐寒性。 ? 1990年，加拿大煙草業(yè)公布了第一個原生質體融合的煙草新品種。除了獲得植物內、中間、屬間和科間體細胞雜種植株外， Makankawkeyoon等（ 1995）還獲得了植物界與動物界之間（即煙草與小鼠體細胞間）的雜種植株，雜種葉片有小鼠免疫球蛋白 G基因的表達，據(jù)賈敬芬統(tǒng)計，1984－ 1993年增加的體細胞雜種植物，種內組合有 14個，種間 62個。屬間 47個，并有 2個種間組合的胞質雜種。 LI等（ 1999）報道， 1983－ 1996年之間利用原生質體融合技術對作物品種的改良中涉及 12個科、 22個屬 33個種的植物作為原生質體融合的受體，優(yōu)良農(nóng)藝形狀的供體物種有89個種 2個雜種，涵蓋 40個屬。這些體細胞雜種中有種間