懷菊葉片組織培養(yǎng)技術的研究學士論(編輯修改稿)
2025-02-14 00:04 本頁面
【文章內容簡介】 養(yǎng)室里，待用。 愈傷組織的誘導在無菌超凈臺上，把脫毒苗的葉片剪下然后剪成塊狀，盡量使每塊葉片上都保留切口，然后分別接種到正交試驗表（見表 1）設計的培養(yǎng)基上誘導愈傷組織，每種培養(yǎng)基接 6 瓶（每組中正接和背接各接三瓶，即正面接觸培養(yǎng)基的和背面接觸培養(yǎng)基的各三瓶）每瓶接種 5 塊葉片。十天后觀察愈傷組織生長的狀況，二十天后統(tǒng)計愈傷組織誘導率。愈傷組織誘導率=分化出愈傷組織的葉片總數(shù)／接種葉片的總數(shù)100%2 芽的分化 在無菌超凈臺上，將上述實驗后得到的愈傷組織按照原來的編號接到新配制的培養(yǎng)基（見表1）中，每瓶接種 5塊愈傷組織，一星期后觀察芽的分化情況，并計算發(fā)芽率。芽的分化率=分化出芽的數(shù)目／接種的愈傷組織的塊數(shù)100% 生根培養(yǎng)與移栽當培養(yǎng)的幼苗長至 至 ，具 2 至 3 片葉時將其切成單株，接到生根培養(yǎng)基 1/2MS+，大概一星期后，有小根出現(xiàn)，二十天后形成發(fā)達根系。此時，再把培養(yǎng)瓶拿出培養(yǎng)室，放在室外于常溫問下煉苗三天，最后移栽到土壤中，將試管苗培養(yǎng)成植株。 參數(shù)及分析 在測算愈傷組織誘導的影響因素時，采用 L9 ( 34 )正交表，根據(jù)設計安排組織了 9 次實驗。因子水平安排見表 1 中培養(yǎng)基按正交法設計。每組接種六瓶，背接和正接各 3 瓶，每瓶接種 5 塊葉片。觀察苗的葉片分化為愈傷組織的情況，統(tǒng)計愈傷組織誘導率。待轉入新的培養(yǎng)基后，培養(yǎng)一段時間后統(tǒng)計在統(tǒng)計發(fā)芽率。 運用正交設計助手Ⅱ(專業(yè)版)軟件進行培養(yǎng)基配方設計。 統(tǒng)計分析方法為極差分析和方差分析。 培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件懷菊的快繁培養(yǎng)基：MS + 6BA mg/L + NAA mg/L。誘導愈傷組織的培養(yǎng)基：在基本培養(yǎng)基 MS+Su3%+%上按照表 1 中三種植物激素的組合及濃度配比添加，配成 9 組不同的培養(yǎng)基（見表 3）每種培養(yǎng)基接六瓶，每瓶接 5 塊葉片，在黑暗條件下誘導。誘導分化出芽的培養(yǎng)基：同上表 1 中的培養(yǎng)基，每種培養(yǎng)基接三瓶，每瓶接 5 塊愈傷組織，培養(yǎng)室的溫度為(25177。1)℃，每天光照 12 h ，光照強度為 1 500~2 000 lx。培養(yǎng)基配制好以后都要在高壓滅菌鍋中滅菌 15min。 表1 L9 ( 34 )正交設計表Table 1 Orthogonal array L 9 ( 34 ) A B C D因素 Factor 2,4D mg/L 6BA mg/L NAA mg/L IAA mg/L水平 1 Level 1水平 2 Level 2水平 3 Level 3 0003 懷菊愈傷組織的分化在研究中將培養(yǎng)好的幼苗葉片接種于表 1 所列的 9 種培養(yǎng)基上，于黑暗條件下培養(yǎng) 10 d 左右，發(fā)現(xiàn)接種的葉片上有塊狀的愈傷組織形成,特別是在葉片的切口處愈傷組織形成明顯。15d 統(tǒng)計了愈傷組織的誘導率。從表 2 中可以得出背面接觸培養(yǎng)基的葉片脫分化形成愈傷組織早于正面接觸培養(yǎng)基的葉片。且誘導的成功率遠遠高于正接方式，所以背面接觸培養(yǎng)基的接種方式是最適合的方式。從表 3 的極差分析中可以看出，2，4D 是影響懷菊葉片愈傷組織分化的主要因素，影響最大，NAA 次之，6BA 比較小，IAA 的影響最小。正交表中均值越大，則說明代表該因子的某水平越好，從分化率的角度看，極差分析的結果可以得出誘導懷菊愈傷組織分化的較適宜培養(yǎng)基組合為 MS+2，4D + mg/L+ mg/L。正交設計是一種均一性設計，不可能含有所有處理組合，所以 A1B3C2D3 在實驗中沒有顯示出來。用此種配比的培養(yǎng)基進行了驗證實驗，結果表明，懷菊愈傷組織誘導快，誘導率高，從而證明實驗結果是正確的。表 2 懷菊愈傷組織誘導率及芽分化率Table 2Differentiating rate of callus and bud of bosom chrysanthemum因素 FactorA B C D處理Treatment 2,4D mg/L6BA mg/LNAA mg/LIAA mg/L愈傷誘導率(正接)（%）愈傷誘導率(背接)（%）芽分化率（背接）（%）1 0 2 0 100 3 0 0 4 0 20 5 0 0 6 0 7 0 0 0 0 8 0 0 0 20 9 0 4表3 菊愈傷誘導率的極差分析Table 3Mean deviation of callus of bosom chrysanthemum A B C D因素 Factor2，4D mg/L 6BA mg/L NAA mg/L IAA mg/L均值 1 Mean1 均值 2 Mean2 均值 3 Mean3 極差 Range 表4 懷菊愈傷組織誘導率的方差分析Table 4Variance analysis of induction rate of culls of bosom chrysanthemum因素Factor偏差平方和Sum of squares自由度Degree offreedomF 比F valueF 臨界（）F critical value顯著性SignificanceA 2 *B 2 C 2 誤差Error 2注:*表示在 0. 05 水平上差異顯著Note:*means significant difference at P=為了進一步反映各因子之間的差異，以便尋求最佳水平，我們進行了方差分析。由極差分析可知，因子方差分析表明(見表 4)因子 A (2,4D)對愈傷組織的誘導作用顯著,因為因子 D(IAA)的影響最不顯
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