植物組織培養(yǎng)脫毒快繁技術(shù)的綜述(編輯修改稿)
2025-08-10 00:19 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 產(chǎn)中應(yīng)用最廣泛的一種方法。1998年，桂林市大地生物技術(shù)研究所與廣西山河經(jīng)濟發(fā)展公司聯(lián)合開展羅漢果脫毒苗的培育生產(chǎn)技術(shù)科技攻關(guān)，在選出的健康植株中選取營養(yǎng)體,經(jīng)過莖尖培養(yǎng)與其它脫毒方法相結(jié)合脫毒后進行組織培養(yǎng)，從而獲得不帶病的健康苗。經(jīng)農(nóng)業(yè)種植區(qū)試點種植表明，這些經(jīng)莖尖培養(yǎng)脫毒快繁得到的羅漢果脫毒苗植株健壯無病，長勢旺，結(jié)果早，數(shù)量多，品質(zhì)高，與傳統(tǒng)壓蔓技術(shù)種植的普通苗相比，種后第一年結(jié)果的植株達50%~70%，增加近一倍；平均每株掛果約30個，增加了兩倍，一級果增加了15%，有效成分羅漢果甜甙的收取率則提高了5%。廣西農(nóng)科院生物所杭玲等在《羅漢果莖尖脫毒快繁技術(shù)》一文中試驗，選擇羅漢果青皮果品種，采用種子播種的實生苗,經(jīng)接花葉病毒而致病的植株，運用莖尖培養(yǎng)與熱處理相結(jié)合的方法對供試材料進行除病毒，經(jīng)用生物學(xué)指示植物鑒定,脫毒率達100%。據(jù)研究，植物體內(nèi)某一部分組織器官不帶病毒的原因是：分生組織的細胞生長速度快，病毒在植物體內(nèi)繁殖的速度相對較慢，而且病毒的傳播是靠篩管組織進行轉(zhuǎn)移或通過細胞間連絲傳遞給其他細胞，因此病毒的傳遞擴散也受到一定限制，這樣便造成植物體的部分組織細胞沒有病毒。根據(jù)這個原理，可以利用莖尖培養(yǎng)來培育無病毒苗木。 抗病毒藥劑法 概述抗病毒藥劑法，這是一種新的脫毒方法，運用一些抗病藥劑的作用影響病毒RNA的復(fù)制形成，干擾病毒的正常生長，從而達到除去病毒的目的。常用的抗病毒化學(xué)藥物有三氮唑核苷（病毒唑），5二氫尿嘧啶（DHT）和雙乙酰二氫5氮尿嘧啶（DADHT）。這些藥物常常通過直接注射到帶病毒的植株上，或者加到植株生長的培養(yǎng)基上。這種方法一般要與莖尖培養(yǎng)相結(jié)合應(yīng)用。經(jīng)過抗病毒藥劑處理的嫩莖，切取莖尖，再進行組織培養(yǎng)，就會提高脫毒率和成活率。采用病毒抑制劑與莖尖培養(yǎng)相結(jié)合的脫毒方法，可以較容易的脫除多種病毒，而且這種方法對取材要求不嚴(yán)，接種莖尖可大于1mm，易于分化出苗，提高存活率。 原理抗病毒藥劑法的作用原理是抗病毒藥劑在三磷酸狀態(tài)下會阻止病毒RNA帽子結(jié)構(gòu)形成而達到除去病毒的效果。 簡史羅曉芳等于1996年曾在培養(yǎng)基中加入病毒唑，脫除了兩種蘋果潛隱病毒[1]。除了以上三種脫毒方法以外，花藥培養(yǎng)法、莖尖嫁接脫毒、愈傷組織培養(yǎng)法、胚珠培養(yǎng)法也可用于植物組織培養(yǎng)快繁脫毒。3 脫毒效果的檢測方法 經(jīng)過脫毒處理的植株是否還存在病毒，必須經(jīng)過病毒學(xué)檢測才能確定。可靠的病毒檢測方法與建立有效的脫毒方法同等重要。傳統(tǒng)上一直沿用的檢測方法是目測法，但是這種方法無法剔除潛隱性病毒。后來出現(xiàn)的指示植物法，擴大了檢測范圍。近年來隨著生物科學(xué)的迅猛發(fā)展，免疫學(xué)方法，分子生物學(xué)方法等許多先進的理化技術(shù)的應(yīng)用，促進了病毒檢測技術(shù)的改進與發(fā)展。下面簡要介紹幾種檢測脫毒苗的方法。 植株直接測定法 直接觀察植株莖葉有無某種病毒引起的可見癥狀，是最簡單的測定方法。不過，由于某些寄主植物感染病毒后需要較長的時間才出現(xiàn)癥狀，有的并不能使寄主植物出現(xiàn)可見的癥狀，因而無法快速檢驗。 指示植物法此法最早是美國的病毒學(xué)家Holmes l929年發(fā)現(xiàn)的[1]。利用病毒在其他植物上出現(xiàn)癥狀的特征，作為鑒別種類的標(biāo)準(zhǔn)。當(dāng)原始寄主的癥狀不明顯時，就可用指示植物法，這是因為指示植物比原始寄主更容易表現(xiàn)癥狀。具體做法是將病葉研磨，把汁液接種到寄主植物上，對于木本植物，是將原始寄主嫁接到指示植物上。指示植物法簡便易行，成本低，但它靈敏性差，所需時間長，難以區(qū)分病毒種類。 抗血清鑒定法要進行抗原的制備(包括病毒的繁殖，病葉研磨和粗汁液澄清等)，抗血清的采收、分離等。血清可分裝到小玻璃瓶中，貯存在–15
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