植物組織培養(yǎng)脫毒快繁技術(shù)的綜述(編輯修改稿)
2025-08-10 00:19 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 產(chǎn)中應(yīng)用最廣泛的一種方法。1998年，桂林市大地生物技術(shù)研究所與廣西山河經(jīng)濟(jì)發(fā)展公司聯(lián)合開展羅漢果脫毒苗的培育生產(chǎn)技術(shù)科技攻關(guān)，在選出的健康植株中選取營(yíng)養(yǎng)體,經(jīng)過莖尖培養(yǎng)與其它脫毒方法相結(jié)合脫毒后進(jìn)行組織培養(yǎng)，從而獲得不帶病的健康苗。經(jīng)農(nóng)業(yè)種植區(qū)試點(diǎn)種植表明，這些經(jīng)莖尖培養(yǎng)脫毒快繁得到的羅漢果脫毒苗植株健壯無(wú)病，長(zhǎng)勢(shì)旺，結(jié)果早，數(shù)量多，品質(zhì)高，與傳統(tǒng)壓蔓技術(shù)種植的普通苗相比，種后第一年結(jié)果的植株達(dá)50%~70%，增加近一倍；平均每株掛果約30個(gè)，增加了兩倍，一級(jí)果增加了15%，有效成分羅漢果甜甙的收取率則提高了5%。廣西農(nóng)科院生物所杭玲等在《羅漢果莖尖脫毒快繁技術(shù)》一文中試驗(yàn)，選擇羅漢果青皮果品種，采用種子播種的實(shí)生苗,經(jīng)接花葉病毒而致病的植株，運(yùn)用莖尖培養(yǎng)與熱處理相結(jié)合的方法對(duì)供試材料進(jìn)行除病毒，經(jīng)用生物學(xué)指示植物鑒定,脫毒率達(dá)100%。據(jù)研究，植物體內(nèi)某一部分組織器官不帶病毒的原因是：分生組織的細(xì)胞生長(zhǎng)速度快，病毒在植物體內(nèi)繁殖的速度相對(duì)較慢，而且病毒的傳播是靠篩管組織進(jìn)行轉(zhuǎn)移或通過細(xì)胞間連絲傳遞給其他細(xì)胞，因此病毒的傳遞擴(kuò)散也受到一定限制，這樣便造成植物體的部分組織細(xì)胞沒有病毒。根據(jù)這個(gè)原理，可以利用莖尖培養(yǎng)來(lái)培育無(wú)病毒苗木。 抗病毒藥劑法 概述抗病毒藥劑法，這是一種新的脫毒方法，運(yùn)用一些抗病藥劑的作用影響病毒RNA的復(fù)制形成，干擾病毒的正常生長(zhǎng)，從而達(dá)到除去病毒的目的。常用的抗病毒化學(xué)藥物有三氮唑核苷（病毒唑），5二氫尿嘧啶（DHT）和雙乙酰二氫5氮尿嘧啶（DADHT）。這些藥物常常通過直接注射到帶病毒的植株上，或者加到植株生長(zhǎng)的培養(yǎng)基上。這種方法一般要與莖尖培養(yǎng)相結(jié)合應(yīng)用。經(jīng)過抗病毒藥劑處理的嫩莖，切取莖尖，再進(jìn)行組織培養(yǎng)，就會(huì)提高脫毒率和成活率。采用病毒抑制劑與莖尖培養(yǎng)相結(jié)合的脫毒方法，可以較容易的脫除多種病毒，而且這種方法對(duì)取材要求不嚴(yán)，接種莖尖可大于1mm，易于分化出苗，提高存活率。 原理抗病毒藥劑法的作用原理是抗病毒藥劑在三磷酸狀態(tài)下會(huì)阻止病毒RNA帽子結(jié)構(gòu)形成而達(dá)到除去病毒的效果。 簡(jiǎn)史羅曉芳等于1996年曾在培養(yǎng)基中加入病毒唑，脫除了兩種蘋果潛隱病毒[1]。除了以上三種脫毒方法以外，花藥培養(yǎng)法、莖尖嫁接脫毒、愈傷組織培養(yǎng)法、胚珠培養(yǎng)法也可用于植物組織培養(yǎng)快繁脫毒。3 脫毒效果的檢測(cè)方法 經(jīng)過脫毒處理的植株是否還存在病毒，必須經(jīng)過病毒學(xué)檢測(cè)才能確定?？煽康牟《緳z測(cè)方法與建立有效的脫毒方法同等重要。傳統(tǒng)上一直沿用的檢測(cè)方法是目測(cè)法，但是這種方法無(wú)法剔除潛隱性病毒。后來(lái)出現(xiàn)的指示植物法，擴(kuò)大了檢測(cè)范圍。近年來(lái)隨著生物科學(xué)的迅猛發(fā)展，免疫學(xué)方法，分子生物學(xué)方法等許多先進(jìn)的理化技術(shù)的應(yīng)用，促進(jìn)了病毒檢測(cè)技術(shù)的改進(jìn)與發(fā)展。下面簡(jiǎn)要介紹幾種檢測(cè)脫毒苗的方法。 植株直接測(cè)定法 直接觀察植株莖葉有無(wú)某種病毒引起的可見癥狀，是最簡(jiǎn)單的測(cè)定方法。不過，由于某些寄主植物感染病毒后需要較長(zhǎng)的時(shí)間才出現(xiàn)癥狀，有的并不能使寄主植物出現(xiàn)可見的癥狀，因而無(wú)法快速檢驗(yàn)。 指示植物法此法最早是美國(guó)的病毒學(xué)家Holmes l929年發(fā)現(xiàn)的[1]。利用病毒在其他植物上出現(xiàn)癥狀的特征，作為鑒別種類的標(biāo)準(zhǔn)。當(dāng)原始寄主的癥狀不明顯時(shí)，就可用指示植物法，這是因?yàn)橹甘局参锉仍技闹鞲菀妆憩F(xiàn)癥狀。具體做法是將病葉研磨，把汁液接種到寄主植物上，對(duì)于木本植物，是將原始寄主嫁接到指示植物上。指示植物法簡(jiǎn)便易行，成本低，但它靈敏性差，所需時(shí)間長(zhǎng)，難以區(qū)分病毒種類。 抗血清鑒定法要進(jìn)行抗原的制備(包括病毒的繁殖，病葉研磨和粗汁液澄清等)，抗血清的采收、分離等。血清可分裝到小玻璃瓶中，貯存在–15
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