【文章內容簡介】 CSFV核酸載量的增加，感染豬臨床表觀癥狀越發(fā)嚴重。 QRTPCR 技術檢測細胞因子方法的優(yōu)勢 QRTPCR 技術是由美國 Applied Biosystems 公司推出的一種新型定量 PCR技術，目前，在國內外應用較為廣泛。 QRTPCR 實現(xiàn)了 PCR 從定性到定量的轉變 ,提高實驗的重復性，避免了傳統(tǒng) PCR 以終產物檢測定量產生的偏差 ,提高實驗的重復，具有特異性強、靈敏度高、操作簡單、線性關系好等優(yōu) 點，常用于基因定量檢測、定量疾病相關基因的表達，現(xiàn)在已廣泛用于人類和禽類疾病的定量分析、快速檢測、基因分型、早期診斷等方面 [16]。 QRTPCR 可以采用相對定量和絕對定量 2 種方式實現(xiàn)定量檢測，但都有各自的優(yōu)缺點，需根據具體的試驗選擇合適的定量方式，從而得到更準確的試驗結果。提高 QRTPCR 技術的特異性和靈敏度需從多方面著手，主要指特異性探針及引物的設計，選擇合適的 Mg2+濃度、引物和探針濃度、循環(huán)數等，該技術己被廣泛用于檢測細胞 mRNA 表達量的變化；比較不同組織的 mRNA 表達差異；驗證基因芯片； siRNA 干擾的實驗結果。它涉及到 DNA 或 RNA 樣品制備，反轉錄及 PCR 反應等一系列重要的分子生物學過程 [17]。 目前 QRTPCR 技術主要有 SYBRGreen 和 TaqMan 探針兩種方法。SYBRGreen 是一種熒光染料，它能夠與雙鏈 DNA 非特異結合，這種熒光染料適用于所有引物的擴增，成本較低，方法簡便，但熒光染料也能夠與其它雙鏈 DNA結合，因此需要對其進行溶解曲線分析，達到對其它非特異性擴增產物或者引物二聚體加以辨別去除的目的。而 TaqMan 探針法則是探針與靶序列配對，探針上有兩個基因（ 3’淬滅基因和 5’報告基因）。完整的探針沒有熒光產生，而報告基因與淬滅基因分離時，發(fā)射熒光。此法對引物及探針的設計要求更高，但同時檢測的特異性更高，結果更為可靠 [18]。本實驗采用的是 SYBRGreen 法，此法的優(yōu)點是使用方便，成本低，通用性好，設計引物時僅需設計兩個引物，而且熒光染新鄉(xiāng)學院本科畢業(yè)論文（設計） 13 料對 DNA 模板沒有選擇性。但缺點是 SYBRGreen 能與所有雙鏈 DNA 結合，所以反應結束時，必須對產物做溶解曲線分析。 CSFV 感染 PBMC 對 IL2 mRNA 轉錄水平的影響 CSFV 石門毒株感染豬 PBMC 后機體產生免疫應答， PBMC 分泌的白介素類發(fā)揮著重要的調控 作用，白介素類細胞因子若在異常情況下可能會導致免疫病理反應。其中 IL2 為調控免疫應答的重要因子，它是動物機體中最重要的免疫調節(jié)細胞因子之一，是由活化的 T 淋巴細胞產生并作用于 T 淋巴細胞，具有激活 T淋巴細胞、促進 B 淋巴細胞分化和誘導產生 γ 干擾素的功能 [19]。研究 CSFV 感染 PBMC 對 IL2 mRNA 轉錄水平的影響，對了解 CSFV 感染過程中免疫應答的激發(fā)和調控具有重大的意義。 CSFV 感染 PMBC 后結果顯示：在 CSFV 感染后 0~7d， IL2 mRNA 轉錄水平顯著下降，而在第 10~14d， IL2 mRNA 轉錄水平顯著升高，第 21d IL2 mRNA轉錄水平又恢復到正常水平。通過對實驗結果進行分析，得出如下結論： CSFV感染后 0~7d， CSF 在機體內大量增殖，對機體的免疫細胞及免疫因子造成了一定的損傷，造成了機體內 IL2 mRNA 轉錄水平的降低，以至于導致機體內 IL2含量的下降和機體對抗 CSFV 產生免疫應答能力的下降 ，即在 IL2 mRNA 轉錄水平上顯示為降低； CSFV 感染后 7~14d，隨著機體體液免疫和細胞免疫的不斷進行， T 淋巴細胞和 B 淋巴細胞相繼 分化各種免疫相關因子，各種免疫細胞因子之間的相互協(xié)調使機體免疫應答能力不斷提高，機體抗病毒能力進一步增強，與此同時 IL2 mRNA 轉錄水平提高，機體內 IL2 的含量呈遞增趨勢，即在 IL2 mRNA 轉錄水平上顯示為增加，其中 CSFV 感染后第 14d IL2 mRNA 轉錄水平最高，表明了在第 14d IL2 誘導機體細胞產生抗病毒感染應答現(xiàn)象最為明顯；CSFV感染后 14~21d， IL2 mRNA轉錄水平又恢復到正常水平，表明機體內 CSFV已經被消滅，機體內不再需要過多 IL2，因此 IL2 mRNA 轉錄水平 為正常水平。 新鄉(xiāng)學院本科畢業(yè)論文（設計） 14 參考文獻 [1]葛明東 , 胡德建 , 王藝超 . 細胞因子類藥物的臨床應用 [J]. 中國當代醫(yī)藥 , 2022, 16(6): 44～ 45. 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The caravan, consisting of more than 100 camels, three horsedrawn carriages and four support vehicles, started the trip from Jingyang county in Shaanxi on Sept 19, 2022. It will pass through Gansu province and Xinjiang Uygur autonomous region, and finally arrive in Almaty, formerly known as AlmaAta, the largest city in Kazakhstan, and Dungan in Zhambyl province. The trip will cover about 15,000 kilometers and take the caravan more than one year to plete. The caravan is expected to return to Jingyang in March 2022. Then they will e back, carrying specialty products from Kazakhstan A small art troupe founded six decades ago has grown into a household name in the