現(xiàn)代微生物遺傳學第四授課單元(編輯修改稿)
2025-02-12 10:10 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 (relaxed plasmid)或高拷貝質(zhì)粒。（氯霉素可抑制細胞分離，終止染色體復制，但松弛型質(zhì)?？沙掷m(xù)復制，其拷貝數(shù)可達到 1000~3000）。 ? 二、質(zhì)粒的復制 – (P120) ? 質(zhì)粒的復制起點稱為 oriV,大腸桿菌為oriC。 ? 復制主要通過 ?型復制和滾環(huán)復制之一進行。其中以 ?型復制為主（包括單向和雙向）。 ? 質(zhì)粒只編碼一種或少數(shù)幾種與復制有關(guān)的蛋白質(zhì)，其他復制蛋白都來自宿主。 – oriV的功能和 pBR322質(zhì)粒 ? 復制起點區(qū) oriV功能與質(zhì)粒載體的構(gòu)建、寄主范圍 ? pBR322質(zhì)粒： pMB1的 ori和 rop（ ROP蛋白對質(zhì)粒的復制負調(diào)控）區(qū)； pSC101的 tetr； Tn3的 ampr。屬中等拷貝質(zhì)粒， 10~30個 /細胞 ? pUC類：高拷貝質(zhì)粒（ 100~300個 /細胞），也是 pMB1的 ori，但是沒有 rop。 ? 質(zhì)粒的寄主范圍和質(zhì)粒的拷貝數(shù)均決定于質(zhì)粒的 ori區(qū)域。 三、質(zhì)粒復制的調(diào)控 ? 質(zhì)粒的調(diào)控一般采用直接或間接的 負調(diào)控 機制。 ? 負調(diào)控因子可是 蛋白質(zhì) 、 RNA或 DNA重復序列。 ? 調(diào)控類型可分兩類： – 抑制物 靶位調(diào)控 (inhibitortarget regulation) – 重復子 競爭結(jié)合調(diào)控 (iteronbinding regulation) ? 靶位調(diào)控 ? 依賴一小段 反向轉(zhuǎn)錄的RNA作為抑制物，通過它與 質(zhì)粒 DNA復制引物 或 編碼 Rep蛋白（復制蛋白）的 mRNA的互補結(jié)合以阻止質(zhì)粒復制的起始。 – (1) ColE1質(zhì)粒復制調(diào)控（ P122圖 57） ? 抑制物（負調(diào)控因子）：反義RNA、 Rop蛋白 ? 靶位：質(zhì)粒復制的前提引物 ? 機制：反義 RNA和引物 RNA互補結(jié)合，阻止其發(fā)揮作用； Rop 蛋白具有強化反義RNA和引物 RNA結(jié)合的作用。 是抑制物對靶位的直接調(diào)控模型。 – (2)R1質(zhì)粒的復制調(diào)控 ? 抑制物通過抑制 Rep蛋白的形成而阻止了該蛋白對 oriV的激活作用。是間接調(diào)控模型。 ? 抑制物： – CopB蛋白：是PrepA啟動子的阻遏蛋白； – copA基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 RNA： Rep蛋白 mRNA互補，抑制其
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