浙江大學生物化學甲實驗課件實驗9氨基移換反應及其產(chǎn)物的鑒定(編輯修改稿)
2025-02-12 05:47 本頁面
【文章內容簡介】 毒物，要小心操作。 (2) 分離膠緩沖液： 3mol/L TrisHCl (3) 濃縮膠緩沖液： (4) 10% SDS (5) TEMED(N,N,N′ ,N′ －四甲基乙二胺） (增速劑） (6) 10%過硫酸銨（引發(fā)劑） (7) 電泳緩沖液（ ）： Tris 6g， 甘氨酸 ， SDS 2g，用蒸餾水溶解并定至 1000ml,使用時稀釋 1倍。 (8) 蛋白質樣品溶解液（ 2 蛋白質樣品溶解液）： 內含 1%SDS， 1%巰基乙醇， 40%蔗糖或 20%甘油， %溴酚藍， TrisHCl 。 (9)染色液： R250，加 50%甲醇，加 ，溶解混勻后使用。 (10)脫色液： 75ml乙酸， 50ml甲醇，加蒸餾水 875ml，混勻使用。 (11)蛋白質分子量標準溶液： ① β 半乳糖苷酶（ MW 116,000）， ② 牛血清白蛋白 (MW66,200)， ③ 卵清蛋白（ MW 45,000）， ④ 乳酸脫氫酶（ MW 35,000）， ⑤ 限制性內切酶 Bsp981（ MW 25， 000）， ⑥ β 乳球蛋白（ MW 18,400） , ⑦ 雞蛋清溶菌酶（ MW14,400）。 四、實驗器材 電泳儀、垂直電泳槽及配件（長短玻璃板各 1塊、封膠條 2條、梳子 1個） ； 微量移液器： 10μl 、 20μl 、 200μl 、 1000μl ； 燒杯、長滴管； 微量注射器 50μl ； 恒溫水浴 100℃ ； 高速臺式離心機； 離心管（ 、 ）及離心管架； ￠ 15cm培養(yǎng)皿（染色、脫色用）； 搖床（染色、脫色用） 。 五、操作步驟 準備電泳裝置：電泳槽、電泳儀。 配膠及凝膠的制備 （ 1）配制凝膠： 不連續(xù)體系 SDS－聚丙烯酰胺凝膠配制 注： 為去除抑制膠聚合的氧，加入 AP前可進行抽氣處理； 過硫酸銨和TEMED的量應根據(jù)室溫或聚合情況而定； 12%分離膠所需試劑量 (ml) 5%濃縮膠所需試劑量 (ml) %凝
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