檢驗技術(shù)化學(xué)發(fā)光和熒光免疫技術(shù)及儀器(編輯修改稿)
2025-02-11 18:28 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 標(biāo)記物 間接偶聯(lián) 23 7． O(羧甲基 )羥胺法 O羧甲基衍生物 8．混合酸酐法 24 四、反應(yīng)類型 ?化學(xué)發(fā)光免疫分析 ?化學(xué)發(fā)光酶免疫分析 ?微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析 根據(jù)發(fā)光免疫分析中發(fā)光反應(yīng)的不同體系和標(biāo)記方法不同 25 (chemiluminescence immunoassay， CLIA) 用 化學(xué)發(fā)光劑直接標(biāo)記抗原或抗體 , 免疫反應(yīng)后生成標(biāo)記的免疫復(fù)合物 ,通過啟動發(fā)光試劑 (NaOHH2O2)作用于 AE而發(fā)光，發(fā)光強度依賴于免疫反應(yīng)物中化學(xué)發(fā)光劑的濃度。 ?原理 : ?常用化學(xué)發(fā)光劑 : 吖啶酯 (acridinium ester， AE)類化合物 ?反應(yīng)特點 : CLIA檢測小分子抗原采用競爭法；大分子抗原則采用夾心法。與大分子的結(jié)合不會減小所產(chǎn)生的光量，從而增加靈敏度。 強烈的直接發(fā)光在 1 s內(nèi)完成，為快速的閃爍發(fā)光。 ?應(yīng)用 : 26 1)直接化學(xué)發(fā)光使用吖啶酯 (AE)作為標(biāo)記物，無需附加催化劑 。 AE氧化直接發(fā)光，氧化反應(yīng)在 430 nm處快速發(fā)光并在 1s內(nèi)達到峰值。發(fā)光強度是 I125在 1min內(nèi)發(fā)光強度的十萬倍，因此系統(tǒng)該具有高速度、產(chǎn)光強等特點。 2)AE有甲基，增加了試劑的穩(wěn)定性 ，使試劑的穩(wěn)定性好，有效期更長。 3)AE作為化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物， 對溫度及 pH等外界環(huán)境的變化不敏感，故其具有很高的精密度。 4)AE相對分子質(zhì)量水常小 (MW： 481)，使其對結(jié)合反應(yīng)的空間位阻作用減少，增加擴散率，提高了靈敏度，可達 l015molL1。 5)AE是以共價鍵結(jié)合抗體 而不影響抗體結(jié)合抗原的反應(yīng)，故不影響發(fā)光。 6)AE加堿后，發(fā)光是在一暗盒中進行，其光量值與濃度有著良好的線性關(guān)系，且 本底較低 。 吖啶酯的特點 27 2．化學(xué)發(fā)光酶免疫分析 (chemiluminescent enzyme immnunoassay， CLEIA) 采用 參與發(fā)光效應(yīng)的酶 作為標(biāo)記物標(biāo)記抗體或抗原，免疫反應(yīng)后形成酶標(biāo)記抗原抗體復(fù)合物，利用魯米諾作為發(fā)光底物在酶和啟動發(fā)光試劑 (NaOHH2O2)的催化下，產(chǎn)生發(fā)光反應(yīng)，發(fā)光強度依賴于酶免疫反應(yīng)物中酶的濃度。 ?原理 : 底物 產(chǎn)物 發(fā)光 Ag + Ab* AgAb* * 28 ?常用標(biāo)記物 : 辣根過氧化物酶 (HRP)或 ALP ?反應(yīng)特點 : ① 標(biāo)記物常標(biāo)記抗體； ② 標(biāo)記物作為發(fā)光反應(yīng)的催化劑，本身不發(fā)光 。 29 3．微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析 (microparticle chemiluminescence immunoassay， MLIA) ? 以 順磁性微粒作為載體包被抗體 ，利用磁性微粒能被磁場吸引，在磁力的作用下發(fā)生力學(xué)移動的特性，迅速捕捉到被測抗原。 ? 加入 堿性磷酸酶標(biāo)記的第二抗體 ，形成磁性微粒包被抗體 抗原 酶標(biāo)記抗體復(fù)合物 ? 經(jīng)洗滌去掉未結(jié)合的抗體后， 加入 ALP的發(fā)光底物 AMPDD， AMPDD被復(fù)合物上 ALP催化發(fā)光 ,發(fā)射光所釋放的光子能量被光量子閱讀系統(tǒng)記錄，通過計算機處理系統(tǒng)將光能量強度在標(biāo)準(zhǔn)曲線上轉(zhuǎn)換為待測
環(huán)評公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1