綠色銀光蛋白ppt課件(編輯修改稿)
2025-02-11 08:35 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 人員發(fā)現(xiàn)，雖然 GFP有緊密的桶狀結(jié)構(gòu)和形成發(fā)光基團(tuán)所必需的復(fù)雜的翻譯后修飾，當(dāng)對(duì) GFP的 N端和 C端部分交換重排并以一段間隔重新連接時(shí)， GFP仍然具有熒光。并且， GFP的某些位點(diǎn)可以耐受整段蛋白的插入，在結(jié)合金屬離子的黃色熒光蛋白（ Yellow Fluorescent Protein, YFP， GFP的突變體）中 145位插入鋅指結(jié)構(gòu)能使熒光強(qiáng)度多倍提高。 ? 4. GFP作為報(bào)告分子具有很多優(yōu)點(diǎn)，如實(shí)現(xiàn)了活細(xì)胞內(nèi)基因表達(dá)和定位、熒光為蛋白的內(nèi)在屬性、熒光發(fā)射無(wú)種屬依賴性、熒光信號(hào)對(duì)光漂白具有高抗性、檢測(cè)時(shí)不需要附加輔助因子、在細(xì)菌和真核細(xì)胞中表達(dá)無(wú)明顯毒性、具有高度穩(wěn)定性。另外，細(xì)胞內(nèi) GFP的檢測(cè)也比較簡(jiǎn)單，如利用紫外燈、熒光顯微鏡、熒光激活細(xì)胞分選儀等，現(xiàn)有報(bào)道利用實(shí)時(shí)定量 PCR進(jìn)行 GFP熒光定量測(cè)定的方法。 GFP應(yīng)用 1. 在蛋白質(zhì)相互作用和構(gòu)型變化研究中的應(yīng)用 一種活細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)相互作用的研究方法是蛋白質(zhì)片斷互補(bǔ)測(cè)定法（ proteinfragment plementation assay, PCA）。將標(biāo)記蛋白在某個(gè)位點(diǎn)打開(kāi)，用片斷分別標(biāo)記兩個(gè)蛋白。如果被標(biāo)記蛋白質(zhì)相互作用，則酶或熒光蛋白片斷靠近并重新折疊恢復(fù)活性。 Hu等提出了雙分子熒光互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)（ BiFC）的概念，用互補(bǔ)的熒光片斷標(biāo)記不同蛋白來(lái)研究bZIP和 Rel轉(zhuǎn)錄因子家族的相互作用，確定了相互作用位置，信號(hào)傳遞對(duì)作用位點(diǎn)的調(diào)節(jié)等。 ? 熒光互補(bǔ)不僅僅在蛋白質(zhì)相互作用中有所應(yīng)用， Jeong等研究人員以與底物結(jié)合時(shí)會(huì)有典型的構(gòu)象變化麥芽糖結(jié)合蛋白（ MBP）為模型，將MBP C端和 N端分別與 GFP片斷融合。結(jié)果證明加入底物的一組顯示出比對(duì)照組更強(qiáng)的熒光，由此提出 splitGFP在觀察蛋白構(gòu)型變化中的應(yīng)用。 ? 另外，一種重要的熒光成像技術(shù) —熒光共振能量轉(zhuǎn)移（ fluorescence resonance energy transfer, FRET）也被廣泛應(yīng)用。它能夠利用GFP及其突變體青色熒光蛋白（ CFP）、黃色熒光 蛋白 （ YFP）等，定時(shí)、定量、定位、無(wú)損傷地在活細(xì)胞內(nèi)檢測(cè)大分子構(gòu)象變化、蛋白之間相互作用、信號(hào)傳遞途徑。 ? 2. GFP 在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中的應(yīng)用 ? 研究發(fā)現(xiàn) , 某些突變的 GFP 能夠發(fā)生熒光共振能量轉(zhuǎn)移 （ FRET ）， FRET 對(duì)于兩個(gè)熒光分子相互間的定位和距離高度敏感 (
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