綠色銀光蛋白ppt課件(編輯修改稿)
2025-02-11 08:35 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 人員發(fā)現(xiàn)，雖然 GFP有緊密的桶狀結(jié)構(gòu)和形成發(fā)光基團所必需的復雜的翻譯后修飾，當對 GFP的 N端和 C端部分交換重排并以一段間隔重新連接時， GFP仍然具有熒光。并且， GFP的某些位點可以耐受整段蛋白的插入，在結(jié)合金屬離子的黃色熒光蛋白（ Yellow Fluorescent Protein, YFP， GFP的突變體）中 145位插入鋅指結(jié)構(gòu)能使熒光強度多倍提高。 ? 4. GFP作為報告分子具有很多優(yōu)點，如實現(xiàn)了活細胞內(nèi)基因表達和定位、熒光為蛋白的內(nèi)在屬性、熒光發(fā)射無種屬依賴性、熒光信號對光漂白具有高抗性、檢測時不需要附加輔助因子、在細菌和真核細胞中表達無明顯毒性、具有高度穩(wěn)定性。另外，細胞內(nèi) GFP的檢測也比較簡單，如利用紫外燈、熒光顯微鏡、熒光激活細胞分選儀等，現(xiàn)有報道利用實時定量 PCR進行 GFP熒光定量測定的方法。 GFP應用 1. 在蛋白質(zhì)相互作用和構(gòu)型變化研究中的應用 一種活細胞內(nèi)蛋白質(zhì)相互作用的研究方法是蛋白質(zhì)片斷互補測定法（ proteinfragment plementation assay, PCA）。將標記蛋白在某個位點打開，用片斷分別標記兩個蛋白。如果被標記蛋白質(zhì)相互作用，則酶或熒光蛋白片斷靠近并重新折疊恢復活性。 Hu等提出了雙分子熒光互補實驗（ BiFC）的概念，用互補的熒光片斷標記不同蛋白來研究bZIP和 Rel轉(zhuǎn)錄因子家族的相互作用，確定了相互作用位置，信號傳遞對作用位點的調(diào)節(jié)等。 ? 熒光互補不僅僅在蛋白質(zhì)相互作用中有所應用， Jeong等研究人員以與底物結(jié)合時會有典型的構(gòu)象變化麥芽糖結(jié)合蛋白（ MBP）為模型，將MBP C端和 N端分別與 GFP片斷融合。結(jié)果證明加入底物的一組顯示出比對照組更強的熒光，由此提出 splitGFP在觀察蛋白構(gòu)型變化中的應用。 ? 另外，一種重要的熒光成像技術(shù) —熒光共振能量轉(zhuǎn)移（ fluorescence resonance energy transfer, FRET）也被廣泛應用。它能夠利用GFP及其突變體青色熒光蛋白（ CFP）、黃色熒光 蛋白 （ YFP）等，定時、定量、定位、無損傷地在活細胞內(nèi)檢測大分子構(gòu)象變化、蛋白之間相互作用、信號傳遞途徑。 ? 2. GFP 在信號轉(zhuǎn)導中的應用 ? 研究發(fā)現(xiàn) , 某些突變的 GFP 能夠發(fā)生熒光共振能量轉(zhuǎn)移 （ FRET ）， FRET 對于兩個熒光分子相互間的定位和距離高度敏感 (
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