b型dna僅僅是眾多dna雙螺旋構象中的一種在外界條件的改【精品(編輯修改稿)
2025-02-08 07:43 本頁面
【文章內容簡介】 eation） 拉拉鏈作用 （ Zippering） DNA的復性對片段有兩個要求： (1) 互補順序的碰撞和排列； (2) 堿基的正確配對和氫鍵的形成。 下列因素可導致 DNA變性 ： ? 高溫 、 ? 酸 、 ? 堿 、 ? 尿素 、 ? 甲酰胺 DNA變性后物理性質發(fā)生的變化 ： （ 1） 流體力學的性質發(fā)生改變：粘度下 降 ， 而沉降速度增加； （ 2） 提高了對紫外線的吸收能力 ， 此稱為 增色效應 （ hyperchromic effect） 。 ?雙鏈 DNA的 A260=（ 濃度為 50μg/ml 時 ，對波長 260nm紫外線的吸收能力 ） ； ?單鏈 DNA的 A260=； ?游離堿基 或核苷酸的 A260=。 ?解鏈溫度 （ melting temperature, Tm）或 熔點 ， Tm是 A260的升高達到極大值一半時的溫度 。 即是變性溫度范圍的中點 。 ?影響變性的因素： 外部條件 如 溫度 和 正離子 的濃度 。 濃度低于 ， 單價陽離子增高 10倍 ， T m增加 176。 內部條件 GC含量 及 分子類型 當 GC的含量上升 1%，則 Tm上升 ℃ 馬默多蒂 （ MarmurDoty） 關系式 ： Tm = +(G +C)%， 或 GC%=（ ） 復性動力學公式 C 1 1 C0 2 1+KC0t1/2 根據復性動力學公式我們可以知到些什么？ 復性進行一半時 = = (1) 單鏈濃度隨著時間的增大而減?。? (2） 反應速率取決于初始的單鏈濃度 Co； (3) 以反應濃度和 COt1/2為座標可繪復性曲線； (4) 通過 COt1/2值可測原核生物基因組的大??； 已知大腸桿菌的基因組為 , COt1/2 = COt1/2 （ 任何基因組 DNA） / = 任何基因組大小 / (5)原核生物基因組大小不同 ， 復性曲線也不同； (6) 可用以區(qū)分真核生物和原核生物基因組 。 單一順序和重復順序 復性動力學曲線的區(qū)別 ?真核生物的 DNA有重復順序，而原核 生物多為單一順序。 (1) 單一順序的復性曲線常只有一個拐點， 而重復順序常有多個拐點。 (2) COt 比值變化范圍。 原核 生物的 COt比值為 100, 真核 生物的 COt比值大于 100 影響復性反應的因素 (1) DNA片段的大?。? (2) DNA的濃度； (3) DNA復雜性 。 (4) 溫度 。 最佳復性溫度一般比 Tm低 25?C。 (5) 鹽的濃度： 復性時要求鹽的濃度達到足夠高 。為什么 ？ 在復性反應中如何知道單鏈已經結合成雙鏈了呢？ 可以通過哪些法來檢測 ？ (1) 減色效應 （ hpochromic effcef） 測定光密度 ， 即 OD值 （ optical density） ，DNA從單鏈變成雙鏈 ， OD260減少 30% (2) 羥基磷灰石柱層析 羥基磷灰石對雙鏈 DNA吸附較牢 ， 不易 吸附單鏈 第五節(jié) 分子雜交 分子雜交（ molecular hybridization） 共同特點是： (1)都是應用復性動力學原理； (2)都必須有 探針 （ probe）的存在。 探針就是用同位素或非同位素如熒光染料，生物素等標記的短片段特異 DNA或 RNA順序。 常用的分子雜交方法 ? 一 . 原位分子雜交 （ in situ hybridization） ? 二 . 斑點雜交 （ dot blotting） ? 三 . 薩瑟雜交 （ Southern blot） ? 四 . 諾瑟雜交 （ Northern hybridization） ? 五 . Western blotting ? 六 . 電鏡觀察 ? (1) 異源雙鏈定位法 （ Heferoduplex mapping） ? (2) R環(huán)定位法 （ Rloop mapping） (a) 變性 雜交 變性 ( b ) D N A 變性 R N A 雜交 R 環(huán) 圖 9 25 異源雙鏈定位法 (a) 和 R 環(huán)作圖 (b) 8vR3qM+lHamp。gCZbxU6tP1oK(jF$eAX9vS4rN+mIamp。hDZcyV7tQ2oL)kG$fBXawS 5rO0mJ *hEdzV 8uQ3pL kH%fCYaxT6sO1nJ(iF!d AW8vR3qM+lHamp。gCZby U6tP1oK(jF$eAX 9vS4rN+mIa
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