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正文內(nèi)容

大型儀器培訓(xùn)word版(編輯修改稿)

2025-02-04 08:12 本頁面
 

【文章內(nèi)容簡介】 2) 具有剛性平面結(jié)構(gòu)的分子。剛性的不飽和的平面結(jié)構(gòu)具有較高的熒光效率,分子剛性及共平面性越大,熒光效率越高。例如, 8羥基喹啉是弱熒光物質(zhì),當(dāng)與 Zn2+、 Mg2+等離子螯合后,剛性平面結(jié)構(gòu)增強(qiáng),熒光就增強(qiáng)。相反,如果原來結(jié)構(gòu)中平面性較好,但分子上取代了較大基團(tuán)后,由于位阻的原因,使分子的共平面性下降,因而熒光減弱。 ( 3) 苯環(huán)上取代基的類型。給電子基團(tuán)常使熒光增強(qiáng),吸電子基團(tuán)及鹵素會減弱甚至破壞熒光。 了解熒光和物質(zhì)分 子結(jié)構(gòu)的關(guān)系,可以幫助我們考慮如何將非熒光物質(zhì)轉(zhuǎn)化為熒光物質(zhì)或?qū)晒鈴?qiáng)度不大或選擇性不高的物質(zhì)轉(zhuǎn)化為熒光強(qiáng)度大及選擇性高的熒光物質(zhì),以提高分析的效果。 環(huán)境對熒光的影響: 分子所處的環(huán)境,如溫度、溶劑、 PH 值等都會影響分子結(jié)構(gòu)和立體構(gòu)像,從而影響熒光強(qiáng)度 。 ( 1) 一般說來,大多數(shù)熒光物質(zhì)的溶液隨著溫度的降低,熒光效率和熒光強(qiáng)度將增加;相反,溫度升高熒光效率將下降。 ( 2) 同一種熒光物質(zhì)溶于不同的溶劑,其熒光光譜的位置和強(qiáng)度可能胡明顯的不同。一般情況下,隨著溶劑的極性增加,熒光強(qiáng)度將增強(qiáng)。 ( 3) 溶劑 PH 值的影響,當(dāng)熒光物質(zhì) 是弱酸或弱堿時,溶劑 PH 值對熒光強(qiáng)度有較大影響。 ( 4) 猝滅劑的影響,熒光猝滅是指熒光物質(zhì)與溶劑子或其他溶質(zhì)分子相互作用,引起熒光強(qiáng)度降低、消失或熒光強(qiáng)度與濃度不呈線性的關(guān)系的現(xiàn)象。引起熒光猝滅的物質(zhì)稱為猝滅劑( quencher)。常見的猝滅劑有鹵素離子、重金屬離子、氧分子、以及硝基化合物、重氮化合物、羰基化合物等。 三、熒光的定量分析 熒光測定的線性范圍一般在 105~100μ g/ml。當(dāng)濃度較高時,吸光度( A)〉 時,由于自猝滅和自吸收等原因,熒光強(qiáng)度與濃度不呈線性關(guān)系,熒光強(qiáng)度同濃度的線性關(guān)系將向 濃度軸偏離,發(fā)生負(fù)偏差。 與紫外 可見分光光度法相同,也可采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法和標(biāo)準(zhǔn)對照法。 測量條件的選擇 ( 1) 選擇線性范圍:當(dāng)熒光物質(zhì)溶液的吸光度 A≤ 時,熒光強(qiáng)度與濃度才呈線性關(guān)系。 ( 2) 選擇合適的激發(fā)光和熒光波長:一般選擇激發(fā)光譜中能產(chǎn)生最強(qiáng)熒光的入射光波長作為激發(fā)光,熒光光譜選擇最強(qiáng)熒光的波長作為熒光測定的波長。 四、 光光度計(jì)的結(jié)構(gòu) 發(fā)光源:采用高壓氙燈。 試樣池:熒光分析用的試樣池需用低熒光材料,常用石英池,形狀為四面透光的方形。 測器:熒光的強(qiáng)度比較弱,因此要求檢測器有較高的靈敏度,常用光電倍增管 。 單色器:采用光柵作為單色器。在測定激發(fā)光譜時,應(yīng)固定發(fā)射單色器波長,掃描激發(fā)單色器波長;而當(dāng)測定熒光物質(zhì)的熒光光譜時,則應(yīng)固定激發(fā)單色器波長掃描發(fā)射單色器的波長。 五、 熒光分光度計(jì)的性能 可檢測熒光、磷光及生物發(fā)光 掃描速度快,可達(dá) 24000 nm/分,數(shù)據(jù)采集速率達(dá) 80 次 /秒 波長范圍: 1901100 nm 光譜帶寬: 、 、 10 和 20 nm 五檔切換 具有液體池和固體池,并可自動控溫。 六 、 熒光分光度計(jì)的使用 : 開啟計(jì)算機(jī)、打開分光光度計(jì)主機(jī),運(yùn)行 Cary Eclipse 軟件 。 按樣品的測定要求進(jìn)入相應(yīng)的測定模塊。 設(shè)定測定參數(shù),按操作流程測試樣品,測定結(jié)果保存或打印。 測試完畢后,在系統(tǒng)指定的出口退出系統(tǒng);先關(guān)閉分光光度計(jì)主機(jī)電源,再關(guān)閉電腦,切斷總電源。 罩上儀器罩,打掃室內(nèi)衛(wèi)生,并在儀器使用登記本上填寫使用記錄。 七、 熒光 光度計(jì) 使用注意事項(xiàng): 比色皿使用之前應(yīng)清洗干凈。若比色皿很臟,清洗方法為:先將比色皿置于鉻酸洗液中浸泡半小時左右,再用蒸餾水洗凈,涼干留用。 比色皿用完之后,應(yīng)先用無水乙醇清洗,后再用蒸餾水洗凈,涼干后收于比色皿盒中。 定期清理儀器的比色部 分,以保持儀器內(nèi)部的整潔和潔凈。 原子吸收光譜分析 原子吸收光譜法( AAS),亦稱原子吸收分光光度法,是基于蒸氣相中待測元素的基態(tài)原子對其共振輻射的吸收強(qiáng)度來測定試樣中該元素含量的一種儀器分析方法。它是測定痕量和超痕量元素的有效方法。 原子吸收光譜分析的應(yīng)用:( 1)、在元素分析中的應(yīng)用:原子吸收光譜分析在元素分析中的應(yīng)用最為廣泛?,F(xiàn)已廣泛應(yīng)用于工業(yè)、農(nóng)業(yè)、生化、地質(zhì)、治金、食品、環(huán)保等各個領(lǐng)域,日前原子吸收已成為金屬元素分析的最為有力工具之一,而且在許多領(lǐng)域已 作為標(biāo)準(zhǔn)分析方法。( 2)在理論研究中的應(yīng)用:能測定活化能、氣體原子擴(kuò)散系數(shù)、解離能、蒸氣壓等。( 3)在有機(jī)分析中的應(yīng)用:多種有機(jī)物與相應(yīng)的金屬元素之間的化學(xué)計(jì)量反應(yīng)而間接測定有機(jī)化合物。如 8羥基奎啉( Cu)。( 4)在金屬元素形態(tài)分析:通過氣液色譜分離后以原子吸收測定,可以分析金屬元素的不同價態(tài) 一、原子吸收光譜分析的特點(diǎn): 檢出限低?;鹧嬖游展庾V法( FAAS)檢出限可達(dá) ng/ml 量級,石墨爐原子吸收光譜法的檢出限可達(dá) 1013~1014g。 選擇性好。原子吸收光譜是元素的固有特征,這是其選擇性好的根本原因。 精密度高。原子吸收光譜的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差一般可達(dá)到 1%,最好時可以達(dá)到 %或更好。 抗干擾能力強(qiáng)。原子吸收線數(shù)目少,一般不存在共薦元素的光譜重疊干擾。 應(yīng)用范圍廣。適用分析的元素范圍廣,可分析周期表中絕大多數(shù)的金屬與非金屬元素。不但可以直接和間接用于元素成分分析,而且可以利用聯(lián)用技術(shù)可以進(jìn)行元素的形態(tài)分析,還可以進(jìn)行同位素分析。 用樣量小?;鹧嬖游展庾V法( FAAS)測定的進(jìn)樣量為 3~6ml/min,采用微量進(jìn)樣進(jìn)甚至可以小至 1050μ l,石墨爐原子吸收光譜法的液體進(jìn)樣量為 1020μ l,固體進(jìn)樣量為毫克級 。 儀器設(shè)備相對比較簡便,操作簡便,易于掌握。 二、原子吸收光譜的產(chǎn)生: 原子通常處于能量最低的基態(tài)。當(dāng)輻射通過原子蒸氣,且輻射頻率相應(yīng)于原子中的電子由基態(tài)躍遷到較高能態(tài)所需的能量的頻率時,原子從入射輻射中吸收能量,發(fā)生共振吸收,產(chǎn)生原子吸收光譜。原子吸收光譜是電子在原子基態(tài)和第一激發(fā)態(tài)之間躍遷的結(jié)果,原子能級是量子化的,因此,在所有情況下,原子對輻射頻率的吸收都是有選擇性的。每一種原子都有其自身所特有的能級結(jié)構(gòu),產(chǎn)生反映該種原子結(jié)構(gòu)特征的原子吸收光譜。原子吸收光譜通常位于光譜的紫外區(qū)和可見區(qū)。 三、 原子吸收光譜分析的基本關(guān)系式: 在確定的實(shí)驗(yàn)條件下,蒸氣相中的原子數(shù) N 與試樣中被測元素的含量 C 成正比。在實(shí)驗(yàn)條件一定時,對于特定的元素測定,得到原子吸收光譜定量分析的關(guān)系式為 A=KC,吸光度與試樣中被測元素的含量成正比。這是原子吸收光譜分析的定量基礎(chǔ)。 四、 定量分析: 原子吸收光譜分析是一種相對分析方法,用校正曲線進(jìn)行定量。常用的定量方法有標(biāo)準(zhǔn)曲線、標(biāo)準(zhǔn)加入法。此外,如為雙通道儀器,可用內(nèi)標(biāo)法定量。在這些方法中,標(biāo)準(zhǔn)曲線法是最基本的定量方法。 ( 1) 標(biāo) 準(zhǔn)曲線法:又稱校正曲線法,是用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)配制標(biāo)準(zhǔn)系列,在標(biāo)準(zhǔn)條件下,測定各標(biāo)準(zhǔn)樣品的吸光度值,以吸光度值 A 和濃度 C 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,在同樣條件下,測定樣品的吸光度值,再通過繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線求得相應(yīng)的的濃度。標(biāo)準(zhǔn)曲線法成功應(yīng)用的基礎(chǔ)在于:標(biāo)準(zhǔn)系列與被分析樣品的基體的精確匹配、標(biāo)樣濃度的準(zhǔn)確確定與吸光度值的準(zhǔn)確測量。同時,待測樣品所測的吸光度值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍之內(nèi)。 ( 2) 標(biāo)準(zhǔn)加入法:原子吸收光譜分析是相對分析法,用校正曲線確定含量,分析結(jié)果的準(zhǔn)確性直接依賴于標(biāo)準(zhǔn)樣品和被分析樣品物理化學(xué)性質(zhì)的相似性。在實(shí)際的分析過程中,樣品 的基體、組成、和濃度千變?nèi)f化,要找到完全與被測樣品組成相匹配的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是不容易的。標(biāo)準(zhǔn)加入法可以自動進(jìn)行基體匹配,補(bǔ)償樣品基體的物理和化學(xué)干擾,提高測定的準(zhǔn)確度。標(biāo)準(zhǔn)加入法操作如下,分取幾份等量的被分析試樣,在其中分別加入不同量的被測元素標(biāo)準(zhǔn)溶液,依次在標(biāo)準(zhǔn)條件下測定它們的吸光度值,制作吸光度值對加入量的校正曲線,將校正曲線外延與橫坐標(biāo)相交,原點(diǎn)至交點(diǎn)的距離,即為試樣中被測元素的含量。 標(biāo)準(zhǔn)加入法所依據(jù)的原理是吸光度的加和性。從這一原理考慮,要求:( 1)不能存在相對系統(tǒng)誤差,即試樣的基體效應(yīng)不 得隨被測元素含量對干擾組分含量的比值改變而改變。( 2)必須校正背景和空白值。( 3)校正曲線是線性的。 ( 3) 內(nèi)標(biāo)法:是在標(biāo)準(zhǔn)試樣和被分析試樣中分別加入一定量的內(nèi)標(biāo)元素,在標(biāo)準(zhǔn)條件下測定分析元素和內(nèi)標(biāo)元素的吸光度比值,并與標(biāo)樣濃度繪制校正曲線。在同樣條件下,測定試樣中被測元素和內(nèi)標(biāo)元素的吸光度比值,通過校正曲線求得試樣中被測元素的含量。內(nèi)標(biāo)法的最大優(yōu)點(diǎn)是可以減少實(shí)驗(yàn)條件的變動而引起的隨機(jī)誤差,提高測定的精密度。因?yàn)橐瑫r測定被測元素和內(nèi)標(biāo)元素的吸光度,所以儀器必須為雙通道原子吸收光譜儀。 五、 測定條件的選擇和優(yōu)化 : 測定條件的正確選擇與優(yōu)化,對于保證測定結(jié)果的準(zhǔn)確度和精密度是非常重要的。測定條件包括分析線、光譜帶寬、燈電流和原子化條件等。選擇與優(yōu)化的標(biāo)準(zhǔn)是獲得最高而穩(wěn)定的吸光度值。 ( 1) 分析線選擇: 在原子吸收光譜分析中,通常都是選擇共振吸收線作為分析線,可以獲得較高的靈敏度。但在分析多譜線元素時,要考慮譜線相互的干擾,如共振線吸收線 附近有 、 及離子線 ,即使使用很窄的光譜通帶,亦難將這些譜線分開,為避免譜線之間的干擾,有時寧愿選用次靈敏線 作為分析線。分析高濃度試樣,為保持校正曲線有足夠?qū)挼膭討B(tài)范圍,常選用次靈敏線為分析線。 ( 2) 光譜帶寬選擇: 在保證干擾譜線和非吸收光不進(jìn)入光譜通帶內(nèi)的前提下,宜用較寬的光譜通帶,以充分利用輻射光源的能量,獲得較大的光強(qiáng)。對于多譜線元素,通常選用較窄的光譜通帶。 (
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