【文章內容簡介】 2） 具有剛性平面結構的分子。剛性的不飽和的平面結構具有較高的熒光效率，分子剛性及共平面性越大，熒光效率越高。例如， 8羥基喹啉是弱熒光物質，當與 Zn2+、 Mg2+等離子螯合后，剛性平面結構增強，熒光就增強。相反，如果原來結構中平面性較好，但分子上取代了較大基團后，由于位阻的原因，使分子的共平面性下降，因而熒光減弱。 （ 3） 苯環(huán)上取代基的類型。給電子基團常使熒光增強，吸電子基團及鹵素會減弱甚至破壞熒光。 了解熒光和物質分 子結構的關系，可以幫助我們考慮如何將非熒光物質轉化為熒光物質或將熒光強度不大或選擇性不高的物質轉化為熒光強度大及選擇性高的熒光物質，以提高分析的效果。 環(huán)境對熒光的影響： 分子所處的環(huán)境，如溫度、溶劑、 PH 值等都會影響分子結構和立體構像，從而影響熒光強度 。 （ 1） 一般說來，大多數熒光物質的溶液隨著溫度的降低，熒光效率和熒光強度將增加；相反，溫度升高熒光效率將下降。 （ 2） 同一種熒光物質溶于不同的溶劑，其熒光光譜的位置和強度可能胡明顯的不同。一般情況下，隨著溶劑的極性增加，熒光強度將增強。 （ 3） 溶劑 PH 值的影響，當熒光物質 是弱酸或弱堿時，溶劑 PH 值對熒光強度有較大影響。 （ 4） 猝滅劑的影響，熒光猝滅是指熒光物質與溶劑子或其他溶質分子相互作用，引起熒光強度降低、消失或熒光強度與濃度不呈線性的關系的現象。引起熒光猝滅的物質稱為猝滅劑（ quencher）。常見的猝滅劑有鹵素離子、重金屬離子、氧分子、以及硝基化合物、重氮化合物、羰基化合物等。 三、熒光的定量分析 熒光測定的線性范圍一般在 105~100μ g/ml。當濃度較高時，吸光度（ A）〉 時，由于自猝滅和自吸收等原因，熒光強度與濃度不呈線性關系，熒光強度同濃度的線性關系將向 濃度軸偏離，發(fā)生負偏差。 與紫外 可見分光光度法相同，也可采用標準曲線法和標準對照法。 測量條件的選擇 （ 1） 選擇線性范圍：當熒光物質溶液的吸光度 A≤ 時，熒光強度與濃度才呈線性關系。 （ 2） 選擇合適的激發(fā)光和熒光波長：一般選擇激發(fā)光譜中能產生最強熒光的入射光波長作為激發(fā)光，熒光光譜選擇最強熒光的波長作為熒光測定的波長。 四、 光光度計的結構 發(fā)光源：采用高壓氙燈。 試樣池：熒光分析用的試樣池需用低熒光材料，常用石英池，形狀為四面透光的方形。 測器：熒光的強度比較弱，因此要求檢測器有較高的靈敏度，常用光電倍增管 。 單色器：采用光柵作為單色器。在測定激發(fā)光譜時，應固定發(fā)射單色器波長，掃描激發(fā)單色器波長；而當測定熒光物質的熒光光譜時，則應固定激發(fā)單色器波長掃描發(fā)射單色器的波長。 五、 熒光分光度計的性能 可檢測熒光、磷光及生物發(fā)光 掃描速度快，可達 24000 nm/分，數據采集速率達 80 次 /秒 波長范圍： 1901100 nm 光譜帶寬： 、 、 10 和 20 nm 五檔切換 具有液體池和固體池，并可自動控溫。 六 、 熒光分光度計的使用 ： 開啟計算機、打開分光光度計主機，運行 Cary Eclipse 軟件 。 按樣品的測定要求進入相應的測定模塊。 設定測定參數，按操作流程測試樣品，測定結果保存或打印。 測試完畢后，在系統指定的出口退出系統；先關閉分光光度計主機電源，再關閉電腦，切斷總電源。 罩上儀器罩，打掃室內衛(wèi)生，并在儀器使用登記本上填寫使用記錄。 七、 熒光 光度計 使用注意事項： 比色皿使用之前應清洗干凈。若比色皿很臟，清洗方法為：先將比色皿置于鉻酸洗液中浸泡半小時左右，再用蒸餾水洗凈，涼干留用。 比色皿用完之后，應先用無水乙醇清洗，后再用蒸餾水洗凈，涼干后收于比色皿盒中。 定期清理儀器的比色部 分，以保持儀器內部的整潔和潔凈。 原子吸收光譜分析 原子吸收光譜法（ AAS），亦稱原子吸收分光光度法，是基于蒸氣相中待測元素的基態(tài)原子對其共振輻射的吸收強度來測定試樣中該元素含量的一種儀器分析方法。它是測定痕量和超痕量元素的有效方法。 原子吸收光譜分析的應用：（ 1）、在元素分析中的應用：原子吸收光譜分析在元素分析中的應用最為廣泛。現已廣泛應用于工業(yè)、農業(yè)、生化、地質、治金、食品、環(huán)保等各個領域，日前原子吸收已成為金屬元素分析的最為有力工具之一，而且在許多領域已 作為標準分析方法。（ 2）在理論研究中的應用：能測定活化能、氣體原子擴散系數、解離能、蒸氣壓等。（ 3）在有機分析中的應用：多種有機物與相應的金屬元素之間的化學計量反應而間接測定有機化合物。如 8羥基奎啉（ Cu）。（ 4）在金屬元素形態(tài)分析：通過氣液色譜分離后以原子吸收測定，可以分析金屬元素的不同價態(tài) 一、原子吸收光譜分析的特點： 檢出限低?；鹧嬖游展庾V法（ FAAS）檢出限可達 ng/ml 量級，石墨爐原子吸收光譜法的檢出限可達 1013~1014g。 選擇性好。原子吸收光譜是元素的固有特征，這是其選擇性好的根本原因。 精密度高。原子吸收光譜的相對標準偏差一般可達到 1%，最好時可以達到 %或更好。 抗干擾能力強。原子吸收線數目少，一般不存在共薦元素的光譜重疊干擾。 應用范圍廣。適用分析的元素范圍廣，可分析周期表中絕大多數的金屬與非金屬元素。不但可以直接和間接用于元素成分分析，而且可以利用聯用技術可以進行元素的形態(tài)分析，還可以進行同位素分析。 用樣量小?；鹧嬖游展庾V法（ FAAS）測定的進樣量為 3~6ml/min，采用微量進樣進甚至可以小至 1050μ l，石墨爐原子吸收光譜法的液體進樣量為 1020μ l，固體進樣量為毫克級 。 儀器設備相對比較簡便，操作簡便，易于掌握。 二、原子吸收光譜的產生： 原子通常處于能量最低的基態(tài)。當輻射通過原子蒸氣，且輻射頻率相應于原子中的電子由基態(tài)躍遷到較高能態(tài)所需的能量的頻率時，原子從入射輻射中吸收能量，發(fā)生共振吸收，產生原子吸收光譜。原子吸收光譜是電子在原子基態(tài)和第一激發(fā)態(tài)之間躍遷的結果，原子能級是量子化的，因此，在所有情況下，原子對輻射頻率的吸收都是有選擇性的。每一種原子都有其自身所特有的能級結構，產生反映該種原子結構特征的原子吸收光譜。原子吸收光譜通常位于光譜的紫外區(qū)和可見區(qū)。 三、 原子吸收光譜分析的基本關系式： 在確定的實驗條件下，蒸氣相中的原子數 N 與試樣中被測元素的含量 C 成正比。在實驗條件一定時，對于特定的元素測定，得到原子吸收光譜定量分析的關系式為 A=KC，吸光度與試樣中被測元素的含量成正比。這是原子吸收光譜分析的定量基礎。 四、 定量分析： 原子吸收光譜分析是一種相對分析方法，用校正曲線進行定量。常用的定量方法有標準曲線、標準加入法。此外，如為雙通道儀器，可用內標法定量。在這些方法中，標準曲線法是最基本的定量方法。 （ 1） 標 準曲線法：又稱校正曲線法，是用標準物質配制標準系列，在標準條件下，測定各標準樣品的吸光度值，以吸光度值 A 和濃度 C 繪制標準曲線，在同樣條件下，測定樣品的吸光度值，再通過繪制的標準曲線求得相應的的濃度。標準曲線法成功應用的基礎在于：標準系列與被分析樣品的基體的精確匹配、標樣濃度的準確確定與吸光度值的準確測量。同時，待測樣品所測的吸光度值應在標準曲線范圍之內。 （ 2） 標準加入法：原子吸收光譜分析是相對分析法，用校正曲線確定含量，分析結果的準確性直接依賴于標準樣品和被分析樣品物理化學性質的相似性。在實際的分析過程中，樣品 的基體、組成、和濃度千變萬化，要找到完全與被測樣品組成相匹配的標準物質是不容易的。標準加入法可以自動進行基體匹配，補償樣品基體的物理和化學干擾，提高測定的準確度。標準加入法操作如下，分取幾份等量的被分析試樣，在其中分別加入不同量的被測元素標準溶液，依次在標準條件下測定它們的吸光度值，制作吸光度值對加入量的校正曲線，將校正曲線外延與橫坐標相交，原點至交點的距離，即為試樣中被測元素的含量。 標準加入法所依據的原理是吸光度的加和性。從這一原理考慮，要求：（ 1）不能存在相對系統誤差，即試樣的基體效應不 得隨被測元素含量對干擾組分含量的比值改變而改變。（ 2）必須校正背景和空白值。（ 3）校正曲線是線性的。 （ 3） 內標法：是在標準試樣和被分析試樣中分別加入一定量的內標元素，在標準條件下測定分析元素和內標元素的吸光度比值，并與標樣濃度繪制校正曲線。在同樣條件下，測定試樣中被測元素和內標元素的吸光度比值，通過校正曲線求得試樣中被測元素的含量。內標法的最大優(yōu)點是可以減少實驗條件的變動而引起的隨機誤差，提高測定的精密度。因為要同時測定被測元素和內標元素的吸光度，所以儀器必須為雙通道原子吸收光譜儀。 五、 測定條件的選擇和優(yōu)化 ： 測定條件的正確選擇與優(yōu)化，對于保證測定結果的準確度和精密度是非常重要的。測定條件包括分析線、光譜帶寬、燈電流和原子化條件等。選擇與優(yōu)化的標準是獲得最高而穩(wěn)定的吸光度值。 （ 1） 分析線選擇： 在原子吸收光譜分析中，通常都是選擇共振吸收線作為分析線，可以獲得較高的靈敏度。但在分析多譜線元素時，要考慮譜線相互的干擾，如共振線吸收線 附近有 、 及離子線 ，即使使用很窄的光譜通帶，亦難將這些譜線分開，為避免譜線之間的干擾，有時寧愿選用次靈敏線 作為分析線。分析高濃度試樣，為保持校正曲線有足夠寬的動態(tài)范圍，常選用次靈敏線為分析線。 （ 2） 光譜帶寬選擇： 在保證干擾譜線和非吸收光不進入光譜通帶內的前提下，宜用較寬的光譜通帶，以充分利用輻射光源的能量，獲得較大的光強。對于多譜線元素，通常選用較窄的光譜通帶。 （