醫(yī)用分子遺傳學dna復制(編輯修改稿)
2025-02-04 06:22 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 DNA聚合酶 ?的作用 ? DNA聚合酶 ? : 多亞基、多功能酶。 ? 大亞基： DNA聚合酶活性。 ? 100nt/次 ? 小亞基：引物酶活性， 合成 RNA。 ? 起始 DNA的合成：合成 RNA引物和在RNA3’ 羥基端合成一段 DNA。 DNA聚合酶 ?的作用 ? DNA聚合酶 ?的 結構 ? 多亞基組成： ? P125 大亞基，催化亞基，含聚合酶和 外切酶活性 ? P50 與增殖細胞核抗原 (PCNA)結合相關 ? P66 ? P12 DNA聚合酶 ?的 功能 ? 主要 DNA復制酶： DNA聚合酶活性，延伸 DNA鏈。 ?與 RFC和 PCNA形成 “ 全酶 ” ，在 RFC和 PCNA等的協(xié)同下，促使 DNA聚合酶 ?的解離 ， DNA聚合酶 ?接替 DNA聚合酶 ?繼續(xù) DNA鏈的合成 DNA聚合酶 ?向 DNA聚合酶 ?的轉(zhuǎn)換。 ? 復制校正功能： 3’5’外切核酸酶活性 ? DNA聚合酶 ?、 ? 主要功能： DNA修復。 ? DNA聚合酶 γ ：線粒體 DNA復制 二、真核生物 DNA聚合酶附屬蛋白 PCNA： 增殖細胞核抗原（Proliferating Cell Nuclear Antigen)， DNA聚合酶的附屬蛋白，參與 DNA的合成，類似 ?二聚體。 RFC：復制因子 C(Replication Factor C)。多亞基復合物， DNA聚合酶的附屬蛋白， 識別引物末端 ,參與鏈的延長。類似 ?復合物。 PRP1和 PRP2 Primer Recognition Protein 增加 DNA聚合酶 ?與模板－引物末端的親和力，增加 DNA聚合酶 ?的活性。 PCR 與 Taq DNA 聚合酶 Taq DNA聚合酶特性 （ Taq DNA polymerase） 最初由 ?? 性質(zhì) 具有 5’－ 3’聚合酶活性以及依賴于聚合作用的 外切酶活性 ?? 耐熱性 此酶是一種耐熱的依賴于 DNA的 DNA聚合酶 最適反應溫度為 72℃ － 80℃ ?? 應用 能以高溫變性的靶 DNA分離出來的單鏈 DNA 為模板，進行 DNA的體外擴增－ PCR反應。 三 引物酶 primase DNA聚合酶不能引發(fā) DNA新生鏈的合成，只能 在 已存在的 DNA鏈 或 RNA鏈上延長 DNA。引物酶催化引物 RNA的合成。 四 連接酶 ligase ? 1967年發(fā)現(xiàn) ? 催化岡奇片段間磷酸二酯鍵的形成，二個片段必須都與完整的模板鏈結合。 ? 大腸桿菌的連接酶需 NAD+， 真核細胞的連接酶需要 ATP。 ? 可連接雙鏈 DNA中的單鏈切口 ， RNADNA雜交體雙鏈單鏈切口 ， 不能連接雙鏈 RNA中的單鏈切口 。 五 與 DNA解鏈和解旋有關的酶 五 與 DNA解鏈和解旋有關的酶 （一） DNA螺旋酶（ Helicase） ? 催化雙螺旋解旋和解鏈 ? 需消耗 ATP （ 二）拓撲異構酶（ Topoisomerase) ? DNA 回旋酶（ Gyrase） ? 促進 DNA雙鏈的解開 ,需消耗 ATP。 ? 兼有內(nèi)切酶和連接酶活性 , 可迅速使 DNA兩條鏈斷開又接上 , 消除解鏈酶產(chǎn)生的拓撲張力。 當引入負超螺旋 時需要由 ATP提供能量 , 同復制有關。 （三）單鏈結合蛋白 ? DNA
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