西北大學(xué)研究生科研實(shí)驗(yàn)資助項(xiàng)目-用于黃曲霉毒素定量檢測(cè)的金磁微粒標(biāo)記快速層析試紙條的研制申請(qǐng)書(編輯修改稿)
2025-02-03 00:43 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 和磁性納米粒子超順磁性雙重特質(zhì)，將單質(zhì)金還原在磁性氧化物粒子表面，發(fā)明了核殼型Fe3O4/Au 磁性微粒；在修飾有功能團(tuán)的氧化物粒子表面組裝納米金，發(fā)明了組裝結(jié)構(gòu)的 Fe3O4/Au 磁性微粒，項(xiàng)目組將上述兩種微粒命名為金磁微粒（ GoldMag Particles）；該成果 已獲授權(quán)專利 11 項(xiàng)，其中美國(guó)發(fā)明專利 1 項(xiàng)，中國(guó)發(fā)明專利 9 項(xiàng)，實(shí)用新型專利 1 項(xiàng)；針對(duì)新型磁性微粒合成和應(yīng)用產(chǎn)品的拓展升級(jí)，申請(qǐng)了中國(guó)發(fā)明專利 21 項(xiàng)，其中已公開 11 項(xiàng)，圍繞核心技術(shù)原始創(chuàng)新和應(yīng)用產(chǎn)品集成創(chuàng)新的專利群已經(jīng)形成；在國(guó)內(nèi)外發(fā)表相關(guān)論文 40 余篇，納米金磁微粒的光學(xué)性質(zhì)及應(yīng)用研究還有許多值得開展研究的工作 。 6 四、研究方案 項(xiàng)目研究?jī)?nèi)容、研究思路、實(shí)驗(yàn)方法（包括重點(diǎn)難點(diǎn)、解決途徑）等。 本項(xiàng)目的內(nèi)容包括： 對(duì)合成的核殼型磁性納米微粒進(jìn)行表面功能化修飾 1）酸處理去除納米金磁微粒未包裹的 氧化物粒子（通過實(shí)驗(yàn)已基本掌握了酸處理除去氧化物粒子的條件）。 2）將酸處理后核殼型納米金磁的表面功能化修飾，主要原理就是 Au 與SH的反應(yīng)使納米金磁表面帶有一層功能基團(tuán)使其具有很好的分散性和具納米金光學(xué)性質(zhì)，同時(shí)在 PBS，生理鹽水的條件下不發(fā)生團(tuán)聚，能更便于偶聯(lián)生物分子而仍然具有好的分散性和光學(xué)性質(zhì)（這一部分內(nèi)容通過實(shí)驗(yàn)已經(jīng)基本獲得了非常好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 AFB1 完全抗原的制備 1） 優(yōu)化乙基 N， N二甲基丙基碳二亞胺 (EDC）法制備 AFB1 完全抗原的條件 。 2） AFB1 完全抗原的鑒定與評(píng)價(jià)：包括測(cè) 定抗原濃度、純度和特異性以及蛋白偶聯(lián)率。 金磁標(biāo)記抗體層析試紙條檢測(cè)黃曲霉毒素 1） 金磁標(biāo)記抗體的制備：優(yōu)化金磁標(biāo)記抗體的條件和優(yōu)選最佳的標(biāo)記抗體稀釋液，以保證標(biāo)記抗體在試紙條上順利展層。 2）試紙條的組裝：優(yōu)選試紙條組件材料，并以適宜的結(jié)合墊處理液處理結(jié)合墊。然后按一定的規(guī)格組裝試紙條。金磁標(biāo)記試紙條檢測(cè)黃曲霉毒素的原理如下： 7 2）檢測(cè) 檢測(cè)線和質(zhì)控線同時(shí)出現(xiàn)紅色條帶，則樣品呈未出現(xiàn)條帶，試紙條檢測(cè)結(jié)果無效。 3） 確定試紙條的檢測(cè)限以及陰性。如果僅質(zhì)控線出現(xiàn)紅色條帶，樣品呈陽性。如果質(zhì)控線對(duì) 試紙條 使用效果的 進(jìn)行 初步評(píng)價(jià) 與 ELISA 法、 HPLC 法進(jìn)行比較并確認(rèn)同時(shí)測(cè)試試紙條的 特異性 、穩(wěn)定性。 4）通過磁信號(hào)對(duì)試紙條上的黃曲霉毒素進(jìn)行定量檢測(cè)，這是金磁標(biāo)記試紙條最突出的優(yōu)點(diǎn)，既定性又定量。 通過以上方法進(jìn)行 黃曲霉毒素的 檢測(cè)能夠 比膠體金層析試紙的檢測(cè)方法更靈敏同時(shí)做到定量檢測(cè) 。通過對(duì)核殼納米金磁微粒的表面功能化修飾能克服納米金在不同緩沖液中發(fā)生團(tuán)聚而影響后續(xù)的生物分子的檢測(cè)，同時(shí)具有功能化的末端（如羧基末端）的金磁微粒能夠比納米金更快速 牢固 的偶聯(lián)生物分子。具有磁性的 Fe3O4 且不需要高速離心僅 需要磁性分離架就能快速 方便 完成偶聯(lián)不同的生物分子。并且具有金殼層的表面保持了納米金 特有 的光學(xué)性質(zhì)，從而實(shí)現(xiàn)了 對(duì)黃曲霉毒素的快速定量檢測(cè) 。 為檢驗(yàn)新方法的建立奠定基礎(chǔ)。 參考文獻(xiàn)： [1] HyeYoung Park,? Mark J. Schadt, Lingyan Wang, IIm Stephanie Lim, Peter N. Njoki, Soo
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