微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)降解尿素和纖維素用(編輯修改稿)
2025-02-02 14:57 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 ____________。 ②為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在 30—— 300的平板上進(jìn)行計(jì)數(shù)。 (細(xì)菌：稀釋度 104106；放線菌：稀釋度 103105；霉菌：稀釋度102104) ③ 為使結(jié)果接近真實(shí)值可將 同一稀釋度加到三個(gè)或三個(gè)以上的平皿中 ，經(jīng)涂布，培養(yǎng)計(jì)算出菌落平均數(shù)。 當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連著一起時(shí)，平板上觀察到的菌落只有一個(gè)。 顯微鏡直接計(jì)數(shù)法： 利用特定 細(xì)菌計(jì)數(shù)板 或 血細(xì)胞計(jì)數(shù)板 ，在顯微鏡下計(jì)算一定容積里樣品中微生物的數(shù)量。 不能區(qū)分死菌與活菌； 不適于對(duì)運(yùn)動(dòng)細(xì)菌的計(jì)數(shù)； 需要相對(duì)高的細(xì)菌濃度； 個(gè)體小的細(xì)菌在顯微鏡下難以觀察 缺點(diǎn) 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù) （三）實(shí)例： 課題背景 1）尿素的利用 尿素 是一種重要的 農(nóng)業(yè)氮肥。 尿素 不能直接被農(nóng)作物 吸收。 土壤中的細(xì)菌將尿素 分解成氨 之后才能被植物利用。 2）細(xì)菌利用尿素的原因 土壤中的細(xì)菌分解尿素是因?yàn)樗鼈?能合成脲酶 CO(NH2) 脲酶 + H2O + CO2 NH3 3）常見的分解尿素的微生物 芽孢桿菌、小球菌、假單胞桿菌、克氏桿菌、棒狀桿菌、梭狀芽孢桿菌，某些真菌和放線菌也能分解尿素。 4）課題目的 ① 從土壤中分離出能夠分解尿素的細(xì)菌 ② 統(tǒng)計(jì)每克土壤樣品中究竟含有多少這樣的細(xì)菌 瓊脂 尿素 葡萄糖 MgSO4`7H2O NaH2PO4 KH2PO4 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)所需培養(yǎng)基： ① 從物理性質(zhì)看此培養(yǎng)基屬于哪類？ 固體培養(yǎng)基 ② 在此培養(yǎng)基中哪些作為碳源、氮源？ 碳源： 葡萄糖 氮源： 尿素 培養(yǎng)基的 唯一氮源為尿素 ，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長(zhǎng)發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物。 4) 培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生物的原理 實(shí)驗(yàn)的具體操作 ㈠ .土壤取樣 從肥沃、濕潤(rùn)的土壤中取樣。先鏟去表層土 3cm左右，再取樣，將樣品裝入事先準(zhǔn)備好的信封中。 ◆取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的的信封在使用前都要滅菌。 ㈡ .制備培養(yǎng)基： 制備以尿素為唯一氮源的 選擇培養(yǎng)基 。 ◆ 應(yīng)在火焰旁稱取土壤 10g。 ◆在稀釋土壤溶液的過程中，每一步都要在火焰旁進(jìn)行 ◆ 分離不同的微生物采用不同的稀釋度 原因：不同微生物在土壤中含量不同 目的：保證獲得菌落數(shù)在 30～ 300之間、適于計(jì)數(shù)的平板 [三 ]樣品的稀釋 ㈣ .取樣涂布 ◆ 如果得到了 2個(gè)或 2個(gè)以上菌落數(shù)目在 30—— 300的平板，則說明稀釋操作比較成功，并能夠進(jìn)行菌落的計(jì)數(shù)，如果 同一稀釋倍數(shù)的三個(gè)重復(fù)的菌落數(shù)相差較大，表明試驗(yàn)不精確 ，需要重新實(shí)驗(yàn)。 實(shí)例 2：在做分解尿素的細(xì)菌的篩選與統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的實(shí)驗(yàn)時(shí)， A同學(xué)從對(duì)應(yīng)的 106倍稀釋的培養(yǎng)基中篩選出大約150個(gè)菌落，但是其他同學(xué)在同樣的稀釋度下只選擇出大約 50個(gè)菌落。分析其原因。 原因： ⑴ 土樣不同 ⑵ 培養(yǎng)基污染或操作失誤 (或者是混入了其他的含氮物質(zhì) ) 小結(jié)：通過這個(gè)事例可以看出，實(shí)驗(yàn)結(jié)果要有說服力，對(duì)照的設(shè)置是必不可少的。 方案一： 由其他同學(xué)用與 A同學(xué)相同土樣進(jìn)行實(shí)驗(yàn) 方案二： 將 A同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣 (或加等量無菌水 )的情況下進(jìn)行培養(yǎng)，作為空白對(duì)照，以證明培養(yǎng)基是否受到污染。 結(jié)果預(yù)測(cè)： 如果結(jié)果與 A同學(xué)一致，則證明 A無誤；如果結(jié)果不同，則證明 A同學(xué)存在操作失誤或培養(yǎng)基的配制有問題。 設(shè)置對(duì)照： 設(shè)置對(duì)照的主要目的 是排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。 纖維素分解菌的篩選（教材 P28） 選擇 ___________的環(huán)境，采集土樣制成樣品。將樣品接種在以 _________為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)，目的是增加纖維素分解菌的濃度。采用 ___________________法 ,將樣品接種到含有 剛果紅 的固體的培養(yǎng)基上，挑選產(chǎn)生 _______的菌落來篩選纖維素分解菌。 纖維素豐富 纖維素 稀釋涂布平板 透明圈 分解纖維素微生物的分離： 實(shí)驗(yàn)操作 土壤取樣 梯度稀釋 將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上（含剛果紅） 挑選產(chǎn)生透明圈的菌落 選擇培養(yǎng) (液體培養(yǎng)基 ) 篩選并增大菌種濃度 稀釋菌種 ㈤ .微生物的培養(yǎng)與觀察 在菌落計(jì)數(shù)時(shí)，每隔 24h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目。 選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果， 以防止因培養(yǎng)時(shí)間不足而導(dǎo)致遺漏菌落的數(shù)目。 培養(yǎng)不同微生物往往需要不同培養(yǎng)溫度。 細(xì)菌： 30～ 37℃ 培養(yǎng) 1～ 2d 放線菌： 25～ 28℃ 培養(yǎng) 5～ 7d 霉菌： 25～ 28℃ 的溫度下培養(yǎng) 3～ 4d。 微生物的培養(yǎng)與觀察 三 .結(jié)果分析與評(píng)價(jià) ，若培養(yǎng)物有雜菌污染，菌落數(shù)偏高；若培養(yǎng)物混入其他氮源，則菌落形態(tài)多樣，菌落數(shù)偏高，難以選擇出分解尿素的微生物。 ：選擇每個(gè)平板上長(zhǎng)有 30— 300個(gè)菌落的
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