微生物的實驗室培養(yǎng)降解尿素和纖維素用(編輯修改稿)
2025-02-02 14:57 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 ____________。 ②為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在 30—— 300的平板上進(jìn)行計數(shù)。 (細(xì)菌：稀釋度 104106；放線菌：稀釋度 103105；霉菌：稀釋度102104) ③ 為使結(jié)果接近真實值可將 同一稀釋度加到三個或三個以上的平皿中 ，經(jīng)涂布，培養(yǎng)計算出菌落平均數(shù)。 當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連著一起時，平板上觀察到的菌落只有一個。 顯微鏡直接計數(shù)法： 利用特定 細(xì)菌計數(shù)板 或 血細(xì)胞計數(shù)板 ，在顯微鏡下計算一定容積里樣品中微生物的數(shù)量。 不能區(qū)分死菌與活菌； 不適于對運動細(xì)菌的計數(shù)； 需要相對高的細(xì)菌濃度； 個體小的細(xì)菌在顯微鏡下難以觀察 缺點 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù) （三）實例： 課題背景 1）尿素的利用 尿素 是一種重要的 農(nóng)業(yè)氮肥。 尿素 不能直接被農(nóng)作物 吸收。 土壤中的細(xì)菌將尿素 分解成氨 之后才能被植物利用。 2）細(xì)菌利用尿素的原因 土壤中的細(xì)菌分解尿素是因為它們 能合成脲酶 CO(NH2) 脲酶 + H2O + CO2 NH3 3）常見的分解尿素的微生物 芽孢桿菌、小球菌、假單胞桿菌、克氏桿菌、棒狀桿菌、梭狀芽孢桿菌，某些真菌和放線菌也能分解尿素。 4）課題目的 ① 從土壤中分離出能夠分解尿素的細(xì)菌 ② 統(tǒng)計每克土壤樣品中究竟含有多少這樣的細(xì)菌 瓊脂 尿素 葡萄糖 MgSO4`7H2O NaH2PO4 KH2PO4 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)所需培養(yǎng)基： ① 從物理性質(zhì)看此培養(yǎng)基屬于哪類？ 固體培養(yǎng)基 ② 在此培養(yǎng)基中哪些作為碳源、氮源？ 碳源： 葡萄糖 氮源： 尿素 培養(yǎng)基的 唯一氮源為尿素 ，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物。 4) 培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生物的原理 實驗的具體操作 ㈠ .土壤取樣 從肥沃、濕潤的土壤中取樣。先鏟去表層土 3cm左右，再取樣，將樣品裝入事先準(zhǔn)備好的信封中。 ◆取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的的信封在使用前都要滅菌。 ㈡ .制備培養(yǎng)基： 制備以尿素為唯一氮源的 選擇培養(yǎng)基 。 ◆ 應(yīng)在火焰旁稱取土壤 10g。 ◆在稀釋土壤溶液的過程中，每一步都要在火焰旁進(jìn)行 ◆ 分離不同的微生物采用不同的稀釋度 原因：不同微生物在土壤中含量不同 目的：保證獲得菌落數(shù)在 30～ 300之間、適于計數(shù)的平板 [三 ]樣品的稀釋 ㈣ .取樣涂布 ◆ 如果得到了 2個或 2個以上菌落數(shù)目在 30—— 300的平板，則說明稀釋操作比較成功，并能夠進(jìn)行菌落的計數(shù)，如果 同一稀釋倍數(shù)的三個重復(fù)的菌落數(shù)相差較大，表明試驗不精確 ，需要重新實驗。 實例 2：在做分解尿素的細(xì)菌的篩選與統(tǒng)計菌落數(shù)目的實驗時， A同學(xué)從對應(yīng)的 106倍稀釋的培養(yǎng)基中篩選出大約150個菌落，但是其他同學(xué)在同樣的稀釋度下只選擇出大約 50個菌落。分析其原因。 原因： ⑴ 土樣不同 ⑵ 培養(yǎng)基污染或操作失誤 (或者是混入了其他的含氮物質(zhì) ) 小結(jié)：通過這個事例可以看出，實驗結(jié)果要有說服力，對照的設(shè)置是必不可少的。 方案一： 由其他同學(xué)用與 A同學(xué)相同土樣進(jìn)行實驗 方案二： 將 A同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣 (或加等量無菌水 )的情況下進(jìn)行培養(yǎng)，作為空白對照，以證明培養(yǎng)基是否受到污染。 結(jié)果預(yù)測： 如果結(jié)果與 A同學(xué)一致，則證明 A無誤；如果結(jié)果不同，則證明 A同學(xué)存在操作失誤或培養(yǎng)基的配制有問題。 設(shè)置對照： 設(shè)置對照的主要目的 是排除實驗組中非測試因素對實驗結(jié)果的影響，提高實驗結(jié)果的可信度。 纖維素分解菌的篩選（教材 P28） 選擇 ___________的環(huán)境，采集土樣制成樣品。將樣品接種在以 _________為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)，目的是增加纖維素分解菌的濃度。采用 ___________________法 ,將樣品接種到含有 剛果紅 的固體的培養(yǎng)基上，挑選產(chǎn)生 _______的菌落來篩選纖維素分解菌。 纖維素豐富 纖維素 稀釋涂布平板 透明圈 分解纖維素微生物的分離： 實驗操作 土壤取樣 梯度稀釋 將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上（含剛果紅） 挑選產(chǎn)生透明圈的菌落 選擇培養(yǎng) (液體培養(yǎng)基 ) 篩選并增大菌種濃度 稀釋菌種 ㈤ .微生物的培養(yǎng)與觀察 在菌落計數(shù)時，每隔 24h統(tǒng)計一次菌落數(shù)目。 選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果， 以防止因培養(yǎng)時間不足而導(dǎo)致遺漏菌落的數(shù)目。 培養(yǎng)不同微生物往往需要不同培養(yǎng)溫度。 細(xì)菌： 30～ 37℃ 培養(yǎng) 1～ 2d 放線菌： 25～ 28℃ 培養(yǎng) 5～ 7d 霉菌： 25～ 28℃ 的溫度下培養(yǎng) 3～ 4d。 微生物的培養(yǎng)與觀察 三 .結(jié)果分析與評價 ，若培養(yǎng)物有雜菌污染，菌落數(shù)偏高；若培養(yǎng)物混入其他氮源，則菌落形態(tài)多樣，菌落數(shù)偏高，難以選擇出分解尿素的微生物。 ：選擇每個平板上長有 30— 300個菌落的
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