枸杞多糖的生化分析和降血糖活性(編輯修改稿)
2025-02-02 11:17 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 用 MillicellERS（ Millipore Corp.）測量的跨膜電阻值評價單層完整性。單細胞層的 TEER≥ 300cm 。 說明 細胞的生長是封閉膜， 因此 可以用作腸吸收的體外模型。 葡萄糖攝取測定：除去上述 Caco2單層細胞模型的培養(yǎng)基。 用 2ml HBSS（ ）洗滌細胞兩次，第二次洗滌時于 CO 2培養(yǎng)箱中靜置 20分鐘。根據(jù)實驗組，將適量的葡萄糖和 LBP3b溶于 HBSS，過濾滅菌，在使用前加熱至 37℃。 MTT測定法用來測試 LBP3b 對 Caco2細胞的毒性。 混合葡萄糖和（或者）混有 HBSS的 LBP3b，連接 至 AP側(cè)，向 BL側(cè)加入 HBSS作為進料流體，并將它們放置在孵化器中。 在此期間，吸出 AP 側(cè)的液體來檢測過量的葡萄糖。 根據(jù)課程的數(shù)量，在小房間中將等量的液體再次放入 AP側(cè)。葡萄糖的濃度通過葡萄糖氧化酶法估算， 通過其在培養(yǎng)基中的減少量來計算葡萄糖的吸收量并且用mmol / l來表達。 管號 管號 圖 DEAE纖維素柱上的洗脫曲線（ A） 。 LBP3 在 Sephadex G150 柱上的洗脫曲線（ B）。 . 統(tǒng)計分析 所有組的數(shù)據(jù)都用 SPSS ， 通過方差（ ANOVA）的單向分析來進行統(tǒng)計分析， 區(qū)別測試和對照研究的方法的意義由學(xué)生的 t檢驗確立，P值小于 ，所有結(jié)果表示為每組的平均值為177。 SD（ n = 5）。 . 提取 CLBP 稱為 CLBP的粗多糖從 。根據(jù)個人的因素實驗的結(jié)果，正交實驗表明影響膜通量的主要因素是物質(zhì)的溫 度和操作壓力?？紤]到膜的使用壽命和生產(chǎn)成本，綜合這些因素，結(jié)果表明最優(yōu)的工藝溫度是 30℃，使用中性物質(zhì)的工作壓力為 MPa。 . CLBP 的純化 按照上面所述從大麥桿菌 CLBP。在流速 / min 條件下，將CLBP在帶有蒸餾水和 / l NaCl 的 DEAE纖維素柱（ OH， 90cm）上純化，通過自動餾分收集器收集洗脫液并通過在 280nm條件下的 UV吸收進行監(jiān)測以及在 490nm下測定苯酚硫酸。將洗脫物分成四部分，分別命名為LBP1， LBP2， LBP3 和 LBP4（圖 1A）。使用 Sephadex G150進一步純化亞級分LBP3柱（ 60cm），得到另外兩種純化的組分，命名為 LBP3a和 LBP3b（圖1B）。從洗脫曲線來看，多糖（ 490nm）和蛋白質(zhì)（ 280nm）的洗脫峰通常發(fā)生在相同位置。 這表明多糖可以與蛋白質(zhì)組合存在。 . LBP3b 的分子量和單糖分析 LBP3b的 HPGPC 如圖 2所示。 根據(jù)基于 P82系列葡聚糖標準 [log（ MW） = + （ R2 =， t = ） ]的標準曲線測定，其分子量為 。 通過柱前衍生化高效液相色譜分析 LBP3b 中的單糖組成。 LBP3b 的單糖組成在標準糖的 HPLC保留時間的基礎(chǔ)上來分析（圖 3A）。很明顯，有六種標準單糖組合物被鑒定了，從低到高， D甘露糖的保留時間為 min，鼠李糖為 分鐘， d葡萄糖為 ， d半乳糖為 ， d木糖為 鐘，并且 d阿拉伯糖為 。根據(jù)這個規(guī)則， LBP3b主要由 D甘露糖，1鼠李糖， d葡萄糖， d半乳糖和 d木糖組成，摩爾比為 ： ： ：1： 。這個結(jié)果可能與之前報道的從同一物種分離的 LBP有很大不同，表明它們在結(jié)構(gòu)上有所差異，這可能是由于植物收集來源的不同，分離程序的不同，或可能是確定單糖比的方法不同。
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