【文章內容簡介】 胞懸浮液細胞懸浮液傳代細胞培 養(yǎng)二、動物細胞培養(yǎng) ： 動物細胞培養(yǎng)就是從動物機體中取出相關的組織 ,將它分散成單個細胞 ,然后 ,放在適宜的培養(yǎng)基中 ,讓這些細胞生長和增殖 ,并維持結構和功能的一門技術。 動物細胞培養(yǎng) 將動物組織消化后的初次培養(yǎng)稱為 原代培養(yǎng) 。 原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng) 用胰蛋白酶將出現(xiàn)接觸抑制的貼壁細胞從培養(yǎng)瓶壁上脫離下來，制成細胞懸液，分裝到多個培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，這個過程叫 傳代培養(yǎng) 。 細胞系和細胞株 初次培養(yǎng)的細胞經第一次傳代成功后，即稱之為 細胞系 。 從一個經過生物學鑒定的細胞系用單細胞分離培養(yǎng)或通過篩選方法， 由單細胞增殖形成的細胞群 ，稱 細胞株 。 有限細胞系和無限細胞系 大多數(shù)細胞系在 有限的代數(shù)內增殖 ，當超過有限世代后，它們可能有兩種情況，一是衰老死亡，二是發(fā)育成無限細胞系或稱 連續(xù)細胞系 。 有限細胞系轉換成永久細胞系的過度期稱為轉換期，其轉換過程在動物細胞培養(yǎng)中稱為體外轉化 。 接觸抑制 密度抑制 貼附生長 貼附生長 粘附型細胞 :附著在某一固相支持物表面才能生長的細胞。 懸浮型細胞 :不必附著于固相支持物表面，而在懸浮狀態(tài)下即可生長的細胞。 絕大多數(shù)有機體細胞屬粘附型細胞，只有少數(shù)細胞類型如某些 腫瘤細胞和白細胞 可在懸浮狀態(tài)下生長。 細胞接觸抑制 細胞在貼壁生長過程中，細胞間相互接觸，細胞分裂和生長停止的現(xiàn)象。 密度抑制 細胞培養(yǎng)過程中， 細胞密度增大，培養(yǎng)液中營養(yǎng)成分減少，代謝產物增多， 細胞因營養(yǎng)的枯竭和代謝物的影響而導致的細胞分裂和生長停止 。 體內：粘附是全方位，外形具有復雜的立體特征 體外：多數(shù)情況，細胞只有一個附著平面，外形一般與體內時明顯不同 細胞在體內、外的粘附方式存在差異 上皮細胞型 成纖維細胞型 游走細胞型 多型性細胞型 培養(yǎng)動物細胞形態(tài) 類似體內的上皮細胞， 扁平，不規(guī)則多角形，中有圓形核 。彼此緊密相連成鋪石狀薄層；生長時呈膜狀移動；很少脫離細胞群而單個活動 上皮細胞型 胞體 梭形或不規(guī)則三角形 ；胞質向外伸出 2— 3個長短不等的 細胞突起 ；中有 卵圓形核 。排列成放射狀，漩渦狀，不連成片。 成纖維細胞型 游走細胞型 外形不規(guī)則且不斷變化 ，細胞內容易出現(xiàn)暗的 吞噬性顆粒 。生長位置不固定，分散，呈活躍的的游走和變形運動。 多型性細胞型 外形不規(guī)則， 細胞由略呈 多角形的胞體 和細長的、類似偽足的 胞突 兩部分組成，胞內容易出現(xiàn)暗的吞噬性顆粒 血清 ：如 Hela細胞系在高血清－成纖維細胞樣；低血清－上皮樣細胞 pH： 如 Hela細胞系，太酸或太堿－成纖維細胞樣；標準 pH－上皮樣細胞 細胞密度 ： 3T3，低密度－成纖維細胞樣；高密度－上皮樣細胞 生長狀態(tài)改變 ：懸?。瓐A形懸??；貼附－成纖維或上皮樣 轉化與否 ：未轉化成纖維樣；轉化后－可成上皮樣 培養(yǎng)細胞形態(tài)變化 三、培養(yǎng)細胞的生長和增殖過程 所謂培養(yǎng)細胞生命期，是指細胞在培養(yǎng)中持續(xù)增殖和生長的時間。包括 原代培養(yǎng)期、傳代培養(yǎng)期 及 衰退期 。 正常培養(yǎng)的細胞周期 生長曲線 潛伏期 指數(shù)增長期 平衡期 衰退期 所謂細胞的 “ 一代 ” 是指從細胞接種到分離再培養(yǎng)的一段時間。 四、動物細胞培養(yǎng)的基本技術 1. 無菌、無毒的環(huán)境 添加一定量的抗生素，定期更 換 培 養(yǎng) 液。 2. 溫度和 pH 溫 度 pH 與 體 內 相近 3537℃ ~ 3. 氣體環(huán)境 O2 CO2 細胞代謝所必需 維持 pH ? CO2培養(yǎng)箱（ 95% 空氣＋ 5% CO2 ） 5 .平衡鹽溶液 BSS 人工合成培 養(yǎng) 基的基 礎 用液，用 來 洗 滌細 胞。 Hanks液、 Earle液和 PBS液等 4. 營養(yǎng)物質 糖、 氨 基酸、促生 長 因子、無機 鹽 、微量元素、激素以及 動 物或人血 清 等。 1 . 0 0對氨基苯甲酸200 . 0 0 5維生素 B 1 2392 0 . 0 0L 纈氨酸191 . 0 0鹽酸硫胺素382 3 . 1 9L 酪氨酸180 . 2 0核黃素375 . 0 0L 色氨酸171 . 0 0鹽酸吡哆醇362 0 . 0 0L 蘇氨酸163 . 0 0氯化膽堿353 0 . 0 0L 絲氨酸151 . 0 0煙酰胺342 0 . 0 0L 脯氨酸143 5 . 0 0i 肌醇331 5 . 0 0L 苯丙氨酸131 . 0 0葉酸321 5 . 0 0L 甲硫氨酸120 . 2 5D 泛酸鈣314 0 . 0 0L 賴氨酸鹽酸鹽110 . 2 0生物素305 0 . 0 0L 亮氨酸103 0 0 . 0 0L 谷氨酰胺295 0 . 0 0L 異亮氨酸95 . 0 0酚紅282 0 . 0 0L 羥脯氨酸81 . 0 0還原谷胱甘肽271 5 . 0 0L 組氨酸72 0 0 0 . 0 0葡萄糖261 0 . 0 0甘氨酸66 0 0 0 . 0 0氯化鈉252 0 . 0 0L 谷氨酸54 0 0 . 0 0氯化鉀246 5 . 1 5L 胱氨酸二鹽酸鹽46 7 6 . 1 3無水磷酸二氫鈉232 0 . 0 0L 門冬氨酸34 8 . 8 4無水硫酸鎂225 0 . 0 0L 門冬酰胺21 0 0 . 0 0硝酸鈣212 9 0 . 0 0L 精氨酸1含量 ( mg / L )化合物名稱序號含量 ( mg / L )化合物名稱序號對氨基苯甲酸維生素纈氨酸鹽酸硫胺素酪氨酸核黃素色氨酸鹽酸吡哆醇蘇氨酸氯化膽堿絲氨酸煙酰胺脯氨酸肌醇苯丙氨酸葉酸甲硫氨酸泛酸鈣賴氨酸鹽酸鹽生物素亮氨酸谷氨酰胺異亮氨酸酚紅羥脯氨酸還原谷胱甘肽組氨酸葡萄糖甘氨酸氯化鈉谷氨酸氯化鉀胱氨酸二鹽酸鹽無水磷酸二氫鈉門冬氨酸無水硫酸鎂門冬酰胺硝酸鈣精氨酸含量化合物名稱序號含量化合物名稱序號RPMI1640 細胞培養(yǎng)基成分 （配制時添加碳酸氫鈉 2022mg/L） 五、動物細胞大規(guī)模培養(yǎng) 培養(yǎng)方式分為： ? 分批式 ? 流加式 ? 半連續(xù)式 ? 連續(xù)式 分批式培養(yǎng) 分批式培養(yǎng)：指先將細胞和培養(yǎng)液一次性裝入反應器內進行培養(yǎng)，細胞不斷生長，產物不斷形成，經一段時間后，終止培養(yǎng)。 特點： ?分批式培養(yǎng)過程的環(huán)境隨時間變化很大 ?細胞的生長階段可分為延滯期 、 對數(shù)生長期 、 減速期 、 平穩(wěn)期和衰退期 。 流加式培養(yǎng) 特點： ?可避免某種營養(yǎng)成分的初始濃度過高； ?能防止營養(yǎng)成分在培養(yǎng)過程中被耗盡； ?整個過程反應體積是變化的 。 流加式培養(yǎng)是指先將終體積 1/3~1/2的 培養(yǎng)液裝入反應器，接種細胞，進行培養(yǎng)，在培養(yǎng)過程中，隨著細胞對營養(yǎng)物質的不斷消耗，新的營養(yǎng)成分又不斷補充至反應器內，使細胞持續(xù)生長代謝，到反應終止時取出整個反應系。 半連續(xù)式培養(yǎng) 指在分批式培養(yǎng)的基礎上 ， 將分批培養(yǎng)的培養(yǎng)液部分取出 ， 并補充加入等量的新鮮培養(yǎng)基 ， 使反應器內培養(yǎng)液的總體積保持不變 。半連續(xù)培養(yǎng)能夠重復獲得大量均一的培養(yǎng)細胞供進一步利用 。 特點：操作簡便 、 生產效率高 ， 可長期生產 ， 細胞密度和產品產量一直保持在較高水