動物細胞工程ppt課件(編輯修改稿)
2024-10-08 18:20 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 和腫瘤細胞特性的雜交瘤細胞。 ?利用動物細胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細胞。 （二）單克隆抗體的制備 整個制備過程為何要經(jīng)過 兩次篩選 ? 第一次篩選：用特定的選擇培養(yǎng)基篩選出多種雜交瘤細胞 第二次篩選 （克隆化培養(yǎng)和抗體檢測） ：篩選出能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細胞。 如何進行雜交瘤細胞的抗體檢測及克隆化培養(yǎng)？ 融合后的細胞經(jīng)選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)后，能存活的細胞就是雜交瘤細胞。但 這些雜交瘤細胞并非都是能分泌所需抗體的細胞 ，通常用 “ 有限稀釋法 ” 來選擇。將雜交瘤細胞稀釋，用 多孔細胞培養(yǎng)板 培養(yǎng)，使每孔細胞不超過一個，通過培養(yǎng)讓其增殖。然后 檢測各孔上清液中細胞分泌的抗體 （常用酶聯(lián)免疫吸附試驗法）， 那些上清液可與特定抗原結(jié)合的培養(yǎng)孔為陽性孔。 陽性孔中的細胞還不能保證是來自單個細胞，挑選陽性孔的細胞繼續(xù)進行有限稀釋，一般需進行 3～ 4次，直至確信每個孔中增殖的細胞為單克隆細胞。該過程即為雜交瘤細胞的克隆化培養(yǎng)。 在多孔培養(yǎng)板上，在每孔只有一個雜交瘤細胞的情況下，培養(yǎng)得到的細胞群是單個雜交瘤細胞克隆得來的，所以產(chǎn)生的抗體必然是化學(xué)性質(zhì)單一的，特異性強的單克隆抗體。這里的 單克隆 確有 單個細胞克隆的含義，只不過 克隆的 不是 B淋巴細胞，而是雜交瘤細胞 。 雜交瘤細胞既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)生專一抗體。 單克隆抗體的 概念： 由 單個雜交瘤細胞 進行無性繁殖 ,也就是通過克隆，形成細胞群，這一細胞群所產(chǎn)生的 化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強的抗體 稱為單克隆抗體。 注射抗原 B淋巴細胞 骨髓瘤細胞 細胞融合
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