史上最強生物課件復(fù)習(xí)動物細(xì)胞工程(編輯修改稿)
2025-02-09 16:10 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 成細(xì)胞群，怎樣才能克隆出單一的 B淋巴細(xì)胞？ 設(shè)法使一種能產(chǎn)生特定抗體的 B淋巴細(xì)胞與能在體外大量增殖的骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，所得到的 融合細(xì)胞既能大量增殖，又能產(chǎn)生足夠數(shù)量的特定抗體 。 B淋巴細(xì)胞？ 用某種抗原（多次）注射實驗動物，使其發(fā)生特異性免疫反應(yīng)，分化形成能產(chǎn)生特定抗體的 B淋巴細(xì)胞 B淋巴細(xì)胞？ ？ B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞放在一起融合時， 有幾種融合方式？ 離心、振動、電激；聚乙二醇； 滅活的病毒 從免疫動物的脾臟獲取。 BB融合細(xì)胞 雜交瘤細(xì)胞 瘤 瘤融合細(xì)胞 資料： 細(xì)胞合成 DNA有 D和 S兩條途徑，其中 D途徑能被氨基嘌呤阻斷。淋巴細(xì)胞有這兩種 DNA的合成途徑，但一般不分裂增殖。 骨髓瘤細(xì)胞中只有 D途徑而沒有 S途徑，但能不斷分裂增殖。 在培養(yǎng)液中加入氨基嘌呤，收集增殖的細(xì)胞，就是 雜交瘤細(xì)胞 。這種培養(yǎng)基被稱為“ HAT”選擇培養(yǎng)基。 ？ ？ 既能 大量繁殖 ，又能 產(chǎn)生專一抗體 。 ？ 否，由于與骨髓瘤細(xì)胞融合的 B淋巴細(xì)胞有許多種，因此從這些種雜交瘤細(xì)胞中提取抗體的仍然是多種抗體的混合物。 抗原 抗原 針對同種抗原的多種抗體 篩選 到能產(chǎn)生我們需要的產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞？ 通常采用 有限稀釋克隆細(xì)胞的方法 獲得單細(xì)胞克隆，再 利用抗原抗體雜交法檢測 ，篩選出分泌產(chǎn)生所需特異抗體的雜交細(xì)胞株，然后進(jìn)行擴大培養(yǎng)。 多孔動物細(xì)胞培養(yǎng)板 將含有雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)液按比例稀釋，分別加入多孔細(xì)胞培養(yǎng)板的小孔中， 稀釋度保證每個小孔中的細(xì)胞數(shù)不多于 1個 ，進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。 抗原抗體雜交法檢驗呈陽性 利用抗原抗體雜交法檢測雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的特異性抗體 陽性孔 方法 —— 抗原 抗體雜交法 在單克隆抗體制備過程中，兩次篩選的原理和方法是不相同的。 第一次篩選 第二次篩選 ？ ？ 培養(yǎng)特異的雜交瘤細(xì)胞，從中提取出單一抗體，即單克隆抗體。 體外培養(yǎng)或體內(nèi)培養(yǎng) 由單個雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行無性繁殖 ,也就是通過克隆，形成細(xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強的抗體稱為單克隆抗體。 ① 特異性強、靈敏度高 ② 可以大量制備 ？ ① 作為診斷試劑 具有 準(zhǔn)確、高效、簡易、快速的優(yōu)點 ，可定位診斷腫瘤、心血管畸形等疾病。 。 ② 定位診斷腫瘤、心血管畸形等疾病 ③ 用于治療疾病和運載藥物 制成生物導(dǎo)彈 ，將藥物定向帶到癌細(xì)胞所在的位置，在原位殺死癌細(xì)胞，療效高、副作用小。 單克隆抗體 篩 選 雜交細(xì)胞 雜交瘤細(xì)胞 體外或體內(nèi) 細(xì)胞培養(yǎng) 篩選 骨髓瘤 細(xì)胞 誘導(dǎo)細(xì)胞融合 特異性雜交瘤細(xì)胞 雜交瘤細(xì)胞系 提取 經(jīng)過免疫的 B淋巴細(xì)胞 動物細(xì)胞融合技術(shù) 動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù) 單克隆抗體的制備過程： 特點：既能產(chǎn)生專一抗體又能大量繁殖 特點：特異性強靈敏度高可大量制備
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