腫瘤標(biāo)志物臨床檢測(cè)的基本原則(1)(編輯修改稿)
2025-01-31 15:37 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 性依賴于靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。 ?PCR由變形 — 退火 — 延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成。 腫瘤研究中的分子生物學(xué)檢測(cè) ? 癌癥的病理從分子生物學(xué)角度看，主要是多階段，多步驟的累積性的 DNA突變或損失發(fā)生調(diào)控細(xì)胞分化生長(zhǎng)功能的基因所造成的。 ? 一般表現(xiàn)為：原癌基因激活，抑癌基因抑制，妨礙 DNA復(fù)制修復(fù)的穩(wěn)定性。其 DNA改變可包括：基因突變、缺失、擴(kuò)增、 DNA重排，非正?；蛉诤霞皩?duì) DNA核苷酸修飾等。 ? 除抑癌基因外，還可以研究多種致癌基因，抗腫瘤藥物的耐藥性等多種課題。分子生物學(xué)技術(shù)可廣泛用于腫瘤的檢測(cè)中。 七 .TM測(cè)定的影響因素 1． 腫瘤的大小和腫瘤細(xì)胞的數(shù)量 。 2． 腫瘤細(xì)胞合成和分泌腫瘤標(biāo)志物的速度 3． 腫瘤組織的血供情況 4． 腫瘤細(xì)胞是否有壞死和壞死的程度 5. 腫瘤細(xì)胞的分化程度和腫瘤的分期 6. 腫瘤細(xì)胞是否表達(dá)和合成腫瘤標(biāo)志物 7. 腫瘤標(biāo)志物在體內(nèi)的降解和排泄速度 : 1)肝腎功能異常和膽汁淤積等可造成 TM濃度增高。 2）風(fēng)濕病時(shí) CA199濃度可升高。 3）強(qiáng)烈的治療作用（如手術(shù)、放療、化療）和連續(xù)的細(xì)胞死亡、腫瘤部位供血障礙等均可導(dǎo)致 TM濃度變化。 4）某些藥物會(huì)影響 TM的濃度，如前列腺癌抗雄激素治療可抑制 PSA的產(chǎn)生。 5）直腸和肛檢可致 PSA和 PAP升高。 : 1)血液的稀釋作用可使 TM的陽(yáng)性率下降 ,如直接采集腫瘤組織或其附近組織分泌的體液進(jìn)行測(cè)定可提高檢測(cè)靈敏度和特異性。 2）紅細(xì)胞、漿細(xì)胞和血小板中存在 NSE，因此未及時(shí)分離血清的標(biāo)本有可能使血清 NSE濃度升高。 3）血清放置于室溫中有些 TM如 PAP可因其不穩(wěn)定而降解。 4） CA153對(duì)蛋白酶和神經(jīng)酰胺酶很敏感，應(yīng)避免微生物的污染，以免影響測(cè)定結(jié)果。 5） “ Hook”效應(yīng)的影響。 6）同一病人甚至同一份血清使用不同的試劑盒測(cè)定，有時(shí)結(jié)果會(huì)相差很大。 其原因可能是由于使用的抗體同一抗原的不同位點(diǎn)所致。即使使用完全相同的統(tǒng)一抗體，也可能因抗原的異質(zhì)性（如原發(fā)腫瘤轉(zhuǎn)移后，失去了原有的抗原性），影響了結(jié)果，造成了假象，這種現(xiàn)象特別容易發(fā)生在療效評(píng)價(jià)中，尤其在使用前一種試劑盒測(cè)定的值作為后一種試劑盒的參考值時(shí)。因此用一種新的試劑盒時(shí)，應(yīng)對(duì)病人標(biāo)本進(jìn)行 2－ 3次的對(duì)照測(cè)定。 7)異嗜性抗體的影響 :大多數(shù)的 TM試劑盒使用兩種鼠的單克隆抗體 ,如血清中出現(xiàn)嗜異性抗體 ,特別是已知的人抗鼠嗜異性抗體時(shí) ,可能在兩種鼠的單抗間起 “ 橋梁 ”作用 ,導(dǎo)致假陽(yáng)性。避免的辦法是在樣品中事先加入鼠的 IgG,用 PEG沉淀 ,去除嗜異性抗體 ,或進(jìn)行其他的預(yù)處理。 八 .腫瘤標(biāo)志物的臨床價(jià)值評(píng)價(jià) （ SE）： 是指該指標(biāo)的真陽(yáng)性率或陽(yáng)性率，或是指腫瘤患者的 TM陽(yáng)性率； 靈敏度＝真陽(yáng)性數(shù)／真陽(yáng)性數(shù)＋假陰性數(shù) 100％ ＝真陽(yáng)性數(shù)／被檢病人總數(shù) 100％ 如：在 100例腫瘤病人中檢測(cè)結(jié)果 70例病人為陽(yáng)性，則其靈敏度為 70／ 100，即 70％，其中 30例為假陰性。 （ SP）： 是指該指標(biāo)的真陰性率或陰性率，或是指非腫瘤患者的 TM陰性率； 特異性＝真陰性數(shù)／真陰性數(shù)＋假陽(yáng)性數(shù) 100％ ＝真陰性數(shù)／對(duì)照組總數(shù) 100％ 如：對(duì) 100例對(duì)照人群進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn) 97例為陰性，則其特異性為 97／ 100，即 97％，其中 97例為真陰性， 3例為假陽(yáng)性。 特異性往往隨著選擇不同的對(duì)照組而不同。 (efficiency)或稱準(zhǔn)確度 指的是該項(xiàng)指標(biāo)在全部測(cè)定人群中真陽(yáng)性與真陰性之和所占全部測(cè)定人數(shù)的比率。反映該 TM能準(zhǔn)確區(qū)分腫瘤與非腫瘤患者的能力 . 準(zhǔn)確度 =真陽(yáng)性數(shù) +真陰性數(shù) /測(cè)定總?cè)藬?shù) （ positive predictive value , PPV）： 是指 TM陽(yáng)性時(shí)該患者患腫瘤的可能性有多大； 陽(yáng)性預(yù)測(cè)值（ PPV)＝真陽(yáng)性數(shù)／真陽(yáng)性數(shù)＋對(duì)照組假陽(yáng)性數(shù) 100％ 如：在對(duì) 100例病人的檢測(cè)中， 70例為陽(yáng)性結(jié)果，而在對(duì) 100例對(duì)照人群檢測(cè)中， 5例為陽(yáng)性結(jié)果，則其 PPV為 70／（ 70＋ 5） 100％，即為 ％。 （ negative predictive value , NPV）： 是指 TM陰性時(shí)不患腫瘤的可能性有多大 . 陰性預(yù)測(cè)值（ NPV）＝真陰性數(shù)／真陰性數(shù)＋腫瘤組假陰性數(shù) 100％ 如：在對(duì) 100例對(duì)照組人群中， 98例為陰性，對(duì) 100例腫瘤病人的檢測(cè)中 30例為假陰性結(jié)果，則其 NPV值為 98／（ 98＋ 30） 100％，即 ％。 （ positive likelihood ratio） 指該 TM真陽(yáng)性率與假陽(yáng)性率之比 ， 反映其正確判斷陽(yáng)性的可能性是錯(cuò)誤判斷陽(yáng)性可能性的倍數(shù) ， 應(yīng)該越大越好 。 (negative likelihood ratio) 指該 TM假陽(yáng)性率與真陽(yáng)性率之比 ， 反映其錯(cuò)判陰性的可能性是正確判斷陰性可能性的倍數(shù) ， 應(yīng)該越小越好 。 由此可見(jiàn)， PPV(陽(yáng)性預(yù)測(cè)值 )與靈敏度類似；NPV(陰性預(yù)測(cè)值 )與特異性類似； 不同 的是在PPV和 NPV的指標(biāo)中包含了各自的對(duì)照組人群中的數(shù)據(jù)，因此更客觀的反映了試驗(yàn)的可信程度。 PPV與 NPV不僅與 SE和 SP有關(guān)，還與人群的患病率有關(guān)； 某一 TM的 SE、 SP、 PPV、 NPV不是固定不變的 ， 而是依賴于選定的臨界值； （ ROC)的應(yīng)用 正常參考值：來(lái)自于一組對(duì)照人群的均值并考慮到其標(biāo)準(zhǔn)差。 臨界值：根據(jù)客觀標(biāo)準(zhǔn)確診為病人和正常對(duì)照組二組人群所確定的。 九 .TM的臨床應(yīng)用 ： 迄今為止還沒(méi)有一種理想的 TM，因此使TM用于普查受到限制。 :TM基本上不能對(duì)腫瘤進(jìn)行定位，因?yàn)榻^大多數(shù) TM都無(wú)器官特異性，只有極少數(shù) TM如PSA、 PAP具有器官特異性，但這些指標(biāo)卻又不具備腫瘤特異性。 ： 任何一種 TM都存在假陽(yáng)性和假陰性的問(wèn)題，因此單憑 TM的測(cè)定值通常不能對(duì)腫瘤進(jìn)行確診 。 ： 大多數(shù) TM與疾病的分期有關(guān)，且濃度與腫瘤的大小或分期有關(guān)系。如結(jié)腸癌 CEA濃度與腫瘤大小有關(guān)、幾乎所有的 TM在腫瘤晚期時(shí)均呈現(xiàn)較高的濃度。但這是總體而言，由于各期 TM的濃度范圍很廣，且互相重疊，因此并不能根據(jù)個(gè)體測(cè)定值來(lái)判斷腫瘤的大小，也不能
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