[醫(yī)藥衛(wèi)生]第六章動物細胞制藥(編輯修改稿)
2025-01-31 11:57 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 奔丙氨酸、蘇氨酸、色氨酸、酪氨酸、纈氨酸。 ②維生素： A、脂溶性的： VA、 VD、 VE、 VK。 B、水溶性的： VB族、 VC等 ③糖類： C源，是能量來源。 葡萄糖、谷氨酰胺。使用葡萄糖時，要加入丙酮酸鈉；有些還要加入核糖和脫氧核糖、醋酸鈉。 ④無機鹽：主要是保持滲透壓、緩沖 pH的變化，并積極參與細胞代謝。一般加入 NaCl,KCl,MgSO4,CaCl2,NaH2PO4, NaHCO3等。還有 FeSO4,CuSO4,ZnSO4等 ⑤ 其他成分：合成核酸的前體物質(zhì)，如腺苷、鳥苷、胞苷、尿苷、胸苷。還要加入動物血清，如 510%的小牛血清，作用機理不明?？赡苤饕菫榱耍? A 提供細胞生長增殖所需要的各種生長因子和激素； B 提供有利于細胞貼壁所需要的貼附因子和伸展因子； C 提供可識別金屬、激素、維生素、脂類的結(jié)合蛋白； D 提供細胞生長所必需的脂肪酸和微量元素； E 提供良好的 pH緩沖系統(tǒng)。 無血清培養(yǎng)基 優(yōu)點： A、提高細胞培養(yǎng)的可重復(fù)性避免了由于血清批次之間的差異； B、避免了由于血清帶來的病毒、真菌、支原體微生物等的污染； C、供應(yīng)充足、穩(wěn)定； D、產(chǎn)品易于純化； E、避免了血清中某些因素對有些細胞的毒性； F、減少了血清中某些蛋白對生物測定的干擾，便于實驗結(jié)果的分析。 無血清培養(yǎng)基中一般需要加入： A、激素和生長因子； B、結(jié)合蛋白； C、貼附和伸展因子； D、其他利于細胞生長的因子和元素：如消除氧自由基損害的谷胱苷肽，微量元素如硒等。 一、動物細胞大規(guī)模培養(yǎng)的方法 根據(jù)培養(yǎng)細胞的種類分為原代細胞培培養(yǎng)和傳代細胞培養(yǎng)，也可以根據(jù)培養(yǎng)容器和方式的不同分為靜止培養(yǎng)、旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)、攪拌培養(yǎng)、微載體培養(yǎng)、中空纖維培養(yǎng)、固體床和流化床培養(yǎng)等。 懸浮培養(yǎng)： 適用于一切非貼壁細胞的培養(yǎng)，也適應(yīng)于兼性貼壁細胞。 優(yōu)點：操作簡便。培養(yǎng)條件比較均一，傳質(zhì)和傳氧較好，容易擴大培養(yǎng)規(guī)模。 缺點：由于細胞體積小，很難采取灌流培養(yǎng)，因此細胞密度一般比較低。 第四節(jié) 動物細胞培養(yǎng)的方式和操作方法 貼壁培養(yǎng) 適用于貼壁細胞和兼性貼壁細胞。 優(yōu)點：適應(yīng)于細胞種類廣，因為生產(chǎn)中使用的大多數(shù)細胞都是貼壁細胞，較易采用灌流培養(yǎng)，細胞密度高。 缺點：操作比較麻煩，需要合適的貼壁材料和足夠的面積，培養(yǎng)條件不易單一，傳質(zhì)和傳氧較差。不便進行擴大培養(yǎng)。 貼壁培養(yǎng)在傳代和擴大培養(yǎng)時需要用酶將細胞從基質(zhì)上消化下來。常用的消化物有：胰酶、 EDTA、胰酶 — 檸檬酸鹽、胰酶 EDTA聯(lián)合使用。其他如膠原酶、鏈霉蛋白酶、木瓜酶等。他們的作用主要是使細胞間質(zhì)和一些促使細胞貼壁的蛋白因子水解，使細胞從基質(zhì)分離成單個細胞。 貼壁 — 懸浮培養(yǎng)（也稱假懸浮培養(yǎng)） 是將貼壁培養(yǎng)和懸浮培養(yǎng)二者結(jié)合，優(yōu)勢互補，形成更理想、更適應(yīng)于工業(yè)化生產(chǎn)的培養(yǎng)方法。 （ 1）微載體培養(yǎng) 采用葡聚糖 SephadexA50微顆小粒培養(yǎng)貼壁細胞。 優(yōu)點：可創(chuàng)造相當(dāng)大的貼附面積，供細胞貼附生長增殖。由于載體體積小，比重輕，可經(jīng)輕度攪拌即可微小顆粒攜帶細胞自由地懸浮在培養(yǎng)基內(nèi)，充分發(fā)揮懸浮培養(yǎng)的一切優(yōu)點。 葡聚糖凝膠專用柱 理想的微載體應(yīng)該具備的條件： A、微載體表面性質(zhì)與細胞有良好的相容性，適于細胞附著、伸展和增殖； B、微載體的材料無毒性。對培養(yǎng)細胞無毒性，還要不會產(chǎn)生影響產(chǎn)品和人體健康的有害因子； C、微載體的材料是惰性的，不
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