植物組織培養(yǎng)第六章植物細胞培養(yǎng)(編輯修改稿)
2024-11-12 12:13 本頁面
【文章內容簡介】 切式 生物反應器 陳傳紅 制作 2021 / 5 氣升式 生物反應器 陳傳紅 制作 2021 / 5 陳傳紅 制作 2021 / 5 ? 植物細胞的生物反應器大規(guī)模培養(yǎng) 陳傳紅 制作 2021 / 5 ★ 細胞培養(yǎng)各時期特點： ? 延遲期 (lag phase)細胞很少分裂或剛剛開始分裂。 ? 對數生長期 （ logarithm phase ） 細胞數目迅速增長， ? 直線生長期 (linear phase)單位時間內細胞數目增長大致恒定。 ? 減緩期 (retara phase)細胞數目的增長速率減緩。 ? 靜止期 (stationary phase)細胞分裂停止，細胞數目恒定。靜止期初期是最佳的繼代時間 (計數、營養(yǎng) )。 第二節(jié) 植物細胞生長和活力的測定 陳傳紅 制作 2021 / 5 細胞培養(yǎng)的同步化方法 使細胞同步分裂，提高有絲分裂指數 (MI：所觀察的細胞總數中，正在進行有絲分裂的細胞的百分率。 ★物理方法 體積選擇法、冷處理法。 ★化學方法： ? 饑餓法： 控制營養(yǎng)液的供給 ? 抑制法： 添加化學抑制劑 ? 有絲分裂抑制法： 加入秋水仙素處理。 陳傳紅 制作 2021 / 5 影響細胞培養(yǎng)的因素 ? 培養(yǎng)基 ? 起始細胞密度和 細胞活力 ? 生長調節(jié)劑 ? pH 和 CO2 陳傳紅 制作 2021 / 5 細胞低溫保存法： ? 一般用 5100C，熱帶、亞熱帶植物用 10200C；結合高滲可抑制外植體生長。方法簡便，適于現(xiàn)代種質庫管理，材料恢復生長快。 ? (1) 低溫保存： 200C。 ? (2) 超低溫保存： 陳傳紅 制作 2021 / 5 陳傳紅 制作 2021 / 5 5 單細胞培養(yǎng)的技術關鍵 ? 細胞的起始密度測定： 血球計數板 ★ 細胞密度 ：單位體積內的細胞數目。 ★ 起始細胞密度： 開始培養(yǎng)時，單位體積內的細胞數目。在某一臨界密度以下，細胞不能分裂，甚至很快解體。 陳傳紅 制作 2021 / 5 ? ★ 不同培養(yǎng)方式要求不同： ? 懸浮培養(yǎng) ： () 105個 /mL ? 平板培養(yǎng)： 用植板率來衡量平板培養(yǎng)效果。 ? 植板率 = 形成細胞團的數目 /接種的總細胞數 100% ? 影響植板率的因素有： 細胞起始密度、細胞活力 (對數期 )。 陳傳紅 制作 2021 / 5 胡蘿卜懸浮細胞培養(yǎng)顯微計數 陳傳紅 制作 2021 / 5 ? （ 1）再培養(yǎng)法 即化凍后立即將材料轉移到新鮮培養(yǎng)基上進行再培養(yǎng)。 ? （ 2）熒光素雙醋酸脂（ FDA）染色法 ? （ 3） TTC法： 此法顯示細胞內脫氫酶的活性。脫氫酶使 TTC（氯化三苯四氮唑）還原生成一種紅色的物質，作為檢驗活細胞的方法。 植物細胞活力測定
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