【文章內(nèi)容簡介】 小腸運動，對大鼠有明顯的升壓作用 ,而且有作用迅速、消除快的特點 [22]。 陳皮還含有多酚類、 果膠（含量 15%30%）、肌醇 [23]等類成分。顧國明等 [24]從橘皮中首次得到麝香草酚和 β谷甾醇。 硅膠柱層析是實驗室分離黃酮類化 合物常用的分離方法之一。洗脫劑一般用甲醇和二氯甲烷的混合試劑，比例隨著所分離的化合物的極性而隨之變換，也可以用梯度洗脫的方法進(jìn)行洗脫。但當(dāng)黃酮類化合物極性較大時，在反復(fù)硅膠柱層析的過程中樣品損失會比較多，分離效果也常不夠理想。 功能性食品的研究與開發(fā)是近年來食品領(lǐng)域的發(fā)展前沿，代表著 2l世紀(jì)食品的一種發(fā)展潮流。新世紀(jì)人們對健康的意識變得越來越強對飲食的要求也越來越高，期待通過攝食一些有益于健康的食品或功能性食品來達(dá)到預(yù)防疾病或促進(jìn)健康的作用。 黃酮類化合物具有抗氧化、抗過敏、 抗炎、抗菌、抗突變、抗腫瘤、保肝作用，保護心腦血管系統(tǒng)和抗病毒以及殺蟲等廣泛的生理活性，且毒性較低，還可以用作 6 食品、化妝品的天然添加劑，如甜味劑、抗氧化劑、食用色素等，市場前景廣闊。黃酮類化合物的研究開展較早，目前，市場上開發(fā)的黃酮類產(chǎn)品主要有功能食品、功能性食品添加劑、藥物中間體等。 本課題運用各種現(xiàn)代提取技術(shù)、分離技術(shù)和精制方法，對陳皮 中的黃酮類活性成分進(jìn)行分離與純化。一方面，分離純化出黃酮單體化合物，為開發(fā)功能產(chǎn)品，以及新型、高效、具有自主知識產(chǎn)權(quán)的創(chuàng)新藥物奠定一定的基礎(chǔ)；另一方面，可充分利用和開發(fā)枳 實資源，增加其附加價值，提高其經(jīng)濟效益，有助于打開市場，帶動地方經(jīng)濟發(fā)展。 2 材料與方法 與 試劑 試劑 原料：陳皮 試劑：無水乙醇，蒸餾水，三氯甲烷，石油醚，乙酸乙酯 ，色譜乙腈 儀器 GWX9623MBE電熱鼓風(fēng)干燥 上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠 DZF6020MBE真空干燥箱 上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠 2XZ1 型旋片式真空泵 臨海市譚氏真空設(shè)備有限公司 CCA20 低溫冷卻水循環(huán)泵 鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司 RE52AA 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海亞榮生化儀器廠 SHZDⅢ循環(huán)水真空泵 鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司 DS5510DT超聲波清洗器 上海生析超聲儀器有限公司 ZF7 三用紫外分析儀 鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司 JY10002 電子天平 上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司 Paratons Module 2695 高效液相 色譜儀 Waters 公司 機理 吸附柱層析是利用吸附劑對混合式樣各組分的吸附力不同而使各組分分離。當(dāng)采用溶劑洗脫時，發(fā)生一系列吸附→解吸→再吸附→再解吸的過程，吸附力較強的組分，移動的距離小，后出柱；吸附力較弱的組分，移動的距離大，先出柱。 實驗步驟 7 提?。喝∫欢恳掖妓芤号c陳皮粉末，用乙醇提取橙皮中的物質(zhì)，再將乙醇溶液過濾，將得到的溶液用 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸為稠狀物。 萃?。簩⒊頎钗镉眠m量的蒸餾水溶解，再加入萃取劑氯仿適量，猛烈震蕩數(shù)分鐘，靜置一段時間，取下層液，蒸干 ，得 多黃酮 類 化合物提取物。 裝柱：取 g黃酮類化合物提取物溶于少量三氯甲烷。取一定量 200300 目的硅膠于燒杯中，加入適量石油醚，攪拌，以濕法裝柱裝入 6*30 層析柱中，再加入適量海沙，硅膠和海沙表面均要保持水平，待到石油醚液面到達(dá)海沙表面時，開始加入黃酮粗提取物溶液。 洗脫：待該溶液完全流入石油醚后，依次用 400 mL 濃度為 35%， 55%， 75%，85%， 95%的乙酸乙酯石油醚（即料液比為 1:2）進(jìn)行洗脫，每 50 mL 裝一瓶， 從第一瓶開始編號，依次為 1,2,3,4,5直到 95%的洗脫液不再下滴。 檢測：將得到的固體物質(zhì)用無水乙醇定溶至 25 mL，依次用 HPLC 進(jìn)行 測定，記錄數(shù)據(jù)。 稱取 3 份 15 g陳皮粉末， 150 mL 無水乙醇 (即料液比為 1： 10)，分別用索式提取法，加熱回流法，靜置提取法提取，分別對提取液進(jìn)行抽濾，并分別用 30 mL 原濃度的乙醇水溶液洗滌濾渣，合并濾液和洗滌液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干，萃取，再蒸干，稱量固體物質(zhì)量。 稱取 5 份 25 g陳皮粉末 ，分別加入 250 mL 濃度為 20％、 40％、 60%、 80％、100％ 的乙醇水溶液 (即料液比為 1： 10)，靜置提取 24 h。分別對提取液進(jìn)行抽濾，并分別用 50 mL 原濃度的乙醇水溶液洗滌濾渣，合并濾液和洗滌液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干，萃取，再蒸干，稱量固體物質(zhì)量。 稱取 5 份 50 g陳皮粉末，分別加入 500 mL 無水乙醇 (即料液比為 l： 10)，分別靜置提取 1 d， 2 d， 3 d， 4 d， 5 d。分別對提取液進(jìn)行抽濾，并分別用 100 mL 乙醇洗滌濾渣，合并濾液和洗滌液，用旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干，萃取，再蒸干，稱量固體物質(zhì)量。 工作曲線 稱取 20 mg 川陳皮素標(biāo)準(zhǔn)品，用無水乙醇定容至 50 mL 容量瓶中，配置成 8 mg/mL，記為 A 溶液。分別取 A 溶液 5 mL， 10 mL， mL， mL 定容至 50 mL，50 mL， 50 mL， 25 mL，濃度即為 mg/mL， mg/mL， mg/mL， mg/mL，用 HPLC 進(jìn)行定量檢測，測定五組標(biāo)準(zhǔn)溶液吸收峰面積的線性關(guān)系。 3結(jié)果與討論 方法對黃酮類化合物提取率結(jié)果與分析 本文研究不同方法提取方法對黃酮類化合物提取率的影響，其中 靜置提取法提取出 g，加熱回流提取法提取出 g，索式提取法提取出 g。由數(shù)據(jù)可知索氏提取法提取的量是最大的，可是考慮到實際情況 ，索氏提取法和加熱回流法都只能少量提取，但靜置提取法可以大批量的提取， 運用于實際生產(chǎn)， 且索氏提取法和加熱回流法相對靜置提取法來說消耗的能源較多且存在安全隱患，再就是靜置提取法的產(chǎn)量相對前兩者差距不是太大，所以最終決定采用靜置提取法提取。 醇濃度對黃酮類化合物提取率結(jié)果與分析 采用 20％、 40％、 60％、 80％、 100％的乙醇水溶液對枳實中的黃酮苷類化合物進(jìn)行提取實驗，研究提取液濃度對黃酮類化合物提取率的影響結(jié)果見圖 2。 圖 2 乙 醇濃度對黃酮類化合物提取率的影響 of alcoholconcentration on flavonoid glycosides extraction rate 由圖可知 ， 20%與 40%提取液提取出的量差別不大，而 40%到 100%提取液的提取率變化較大，且依次遞增， 5 個實驗組中提取出的質(zhì)量依次為 g， g， g， g， g，所以提取液濃度應(yīng)當(dāng)以 100%為最佳。 9 不同提取時間對 黃酮類化合物提取率的影響見圖 3。 圖 3 提取時間對黃酮 類化合物提取率的影響 of extraction time on flavonoid glycosides extraction rate 由圖可 知， 在 5 個試驗組中，浸提 5 d 提取率最大，為 g，此前 1 d 到 4 d的分別提取出是 g， g， g， g，總體變化趨勢不大。因為浸提 1 d到 4 d 的產(chǎn)量變化不大，只有 5 d 的突然加大到 g， 考慮到實際操 作 的效率問題，最后選擇提取時間為 1 d。 將配制好的 mg/mL， mg/mL， mg/mL， mg/mL， mg/mL的川陳皮素標(biāo)準(zhǔn)品做檢測，結(jié)果如表 1，圖 4. 表 1 川陳皮素標(biāo)準(zhǔn)品檢測結(jié)果 Standard test results of the nobiletin 濃度 (mg/mL) 保留時間（ min） 峰高（ mAU） 峰面積（ mAU*min） 10 圖 4 川陳皮素標(biāo)準(zhǔn) 工作曲線 Nobiletin standard working curve 由圖可以看出，川陳皮素標(biāo)準(zhǔn)溶液的曲線成線性關(guān)系，且經(jīng)計算得線性方程為Y=， Y 為峰面積， X 為川陳皮素濃度。 用 5 種不同濃度的洗脫劑（ 乙酸乙酯與石油醚 組成）洗脫之后， 得到結(jié)果如圖 5。 圖 5 洗脫劑洗脫之后 所得 樣品 After the eluent resulting sample 11 一共得到 37 組溶液，由洗脫過程中 得到的溶液的顏色 判斷 1,2,3 組為裝柱時留下的石油醚，所以不進(jìn)行后期的討論， 410 是濃度為 35%的洗脫劑洗脫所得溶液，1117 是濃度為 55%的洗脫劑洗脫所得溶液， 1824 時濃度為 75%的洗脫劑洗脫所得溶液， 2531 是濃度為 85%的洗脫劑洗脫所得溶液， 3237 是濃度為 95%的洗脫劑洗脫所得溶液。所得溶液較理論值少了 3 瓶，可能原因有兩點，一是實驗過程中的一些實際操作問