產(chǎn)品設(shè)計(jì)論文甘草不同提取部位對(duì)a-葡萄糖苷酶活性的影響(編輯修改稿)
2024-11-12 08:54 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 能抑制蛋白及脂類糖基化 [8] 。具有抗癌、抗 HIV 病 5 毒、抗鼠白血病病毒、抗動(dòng)脈粥樣硬化等作用 [911]。因此開發(fā)新型 α 一葡萄糖苷酶抑制劑引起了研究者們極大的興趣。近年來，隨著糖尿病患者數(shù)量的逐年攀升，采用飲食療法． 定期服用降糖功能食品并作為糖尿病治療的輔助治療方案已得到世界各國的認(rèn)同 [12]。據(jù)國際糖尿病聯(lián)盟 2020 年最新統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)： 2020 年在世界范圍內(nèi)大約有 2． 85 億糖尿病患者。糖尿病已成為全球第四大導(dǎo)致死亡的疾病。我國目前有 9 000 多萬糖尿病患者 (2020 年最新數(shù)據(jù) )。在飲食療法基礎(chǔ)上配合運(yùn)動(dòng)治療、藥物治療等整體治療方案。有利于減少糖尿病發(fā)病率及死亡率 [1314]。開發(fā)新型、價(jià)廉、有效的預(yù)防或治療糖尿病的功能性食品具有重要意義。 研究的目的和意義 本研究利用提取、分離技術(shù)，從甘草中提取出不同的提 取物（ 總生物堿、總皂苷、總黃酮和總多糖 ），并進(jìn)行定性鑒定后，測(cè)定甘草不同提取部位對(duì) a葡萄糖苷酶活性的影響 ，為開發(fā)利用甘草資源提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 2. 材料與儀器 藥材 甘草 (購于蘭州黃河中藥材市場(chǎng) ) 試劑 乙醇，硫酸溶液，濃氨水，濃鹽酸，乙酸乙酯，氯仿，蒸餾水，水飽和的正丁醇，苯酚，碘鉍化鉀，磷酸一氫鈉，磷酸二氫鈉 , 十二烷基硫酸鈉， a葡萄糖苷酶溶液， PNPG，所有試劑均為分析純。 儀器 紫外可見分光光度計(jì)（上海精密科學(xué)儀器有限公司 752N） 電子天平（長(zhǎng) 沙湘平科技發(fā)展有限公司 ES2020H） 電子分析天平（梅特勒 托利多儀器上海有限公司 AB104N） 數(shù)顯恒溫水浴鍋（江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司 HH2 ） 高速離心機(jī)（常州國華電器有限公司 XYJ2） pH 計(jì)（上海精密科學(xué)儀器有限公司） 6 循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司） 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 RE52（上海亞榮生化儀器廠） 全波長(zhǎng)掃描儀 量筒、移液槍，圓底燒瓶、燒杯、回流冷凝管、濾紙、布氏漏斗、抽濾瓶、分液漏斗 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 3. 實(shí)驗(yàn)方法 甘草 中 各種成分的提取 甘草生物堿的提取 稱取 甘草 細(xì)粉 50g,加入 500ml 乙醇，加熱回流 2 小時(shí)，紗布過濾，濾渣再用 300ml 乙醇提取 2小時(shí)，紗布過濾，合并過濾，抽濾除去不溶性雜質(zhì)，濾液濃縮至浸膏狀約 30ml，用 1%硫酸溶解調(diào)PH 為 34，靜止過夜，濾液用濃氨水調(diào) PH 到 10， 抽濾，氯仿 萃取 3 次，蒸干，得總生物堿。避光，冷藏，待用做分定性檢測(cè)及酶動(dòng)力學(xué)測(cè)定。 甘草黃酮的提取 稱取 甘草 細(xì)粉 50g,加 500ml 乙醇，加熱回流 2 小時(shí)，用紗布過濾，濾渣用 500ml 乙醇再次加熱回流 2 小時(shí)， 用紗布過濾，合并濾液，抽濾除去不溶性雜質(zhì)，濃縮濾液至 30ml，分別用氯仿，乙酸乙酯， ，乙酸乙酯層萃取得黃酮類物質(zhì)，干燥得總黃酮。 避光，冷藏，待用做組分定性檢測(cè)及酶動(dòng)力學(xué)測(cè)定。 甘草皂苷的提取 稱取 甘草 細(xì)粉 50g，用乙醇 500ml 加熱回流 2h,趁熱抽濾，濾渣再用乙醇 500ml,加熱回流 2h，趁熱抽濾。合并濾液，抽濾除去不溶性雜質(zhì)，濃縮濾液至 30ml，分別用氯仿，乙酸乙酯，水飽和的正丁醇進(jìn)行萃取，正丁醇層濃縮至干得皂苷物質(zhì)。避光，冷藏，待用做組分定性檢測(cè)及酶動(dòng)力學(xué)測(cè)定。 7 甘草 多糖的提取 取粉碎的甘草根粉 50g， 加 水 煮沸 2 次 ，紗布 過濾，合并濾液， 離心， 濃縮， 加入 4 倍體積的乙醇靜止過夜， 多糖析出 ， 倒出乙醇 ， 在水浴鍋上加熱至乙醇揮發(fā)完全 60℃ 干燥得甘草多糖粗品 。sevag 法 除蛋白 ，水層加入 4 倍量乙醇沉淀，濾取沉淀物，依次乙醇，無水乙醇洗滌，除去脂溶性成分和水分，干燥即得多糖。避光，冷藏，待用做組分定性檢測(cè)及酶動(dòng)力學(xué)測(cè)定。 甘草 中各提取物的定性檢測(cè) 多糖的定性鑒定 ：濃硫酸 苯酚反應(yīng) 樣品 +6%苯酚 +濃硫酸 → 紅色。 皂苷的定性鑒定 ：皂苷 +氯仿 +濃硫 酸實(shí)驗(yàn) → 氯仿層呈現(xiàn)紅色或藍(lán)色 ， 硫酸層有綠色的熒光 。 生物堿的定性鑒定 ：碘化鉍鉀顯色 → 生物堿 +碘化鉍鉀 → 顯紅色 ， 橙紅色 。 黃酮的定性鑒定 ： 濃氨水反應(yīng) 樣品 +濃氨水 → 亮黃色 ， 或橙 紅 色 。 α 葡萄糖苷酶活性測(cè)定和各物質(zhì)對(duì)α 葡萄糖苷酶抑制活性的測(cè)定 α 葡萄糖苷酶活性的測(cè)定 取 1 組帶塞的試管，編號(hào) 1， 2， 3， 4， 5， 6， 7 反應(yīng)體系組成如表一，在 37℃下分別反應(yīng) 3， 6，9， 12， 15， 20， 30min 后，以 5%十二烷基硫酸鈉終止反應(yīng)，在 405nm 下測(cè)定其吸光度。 同時(shí)
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