家蠶核型多角體病毒lef-11與宿主相互作用項目申請書(編輯修改稿)
2025-07-04 09:03 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 pression and localization of LEF11 in Autographa californica nucleopolyhedrovirusinfected Sf9 cells. J Gen Virol, 20xx. 82(Pt 9): p. 228994. 7. Lin, G. and . Blissard, Analysis of an Autographa californica nucleopolyhedrovirus lef11 knockout: LEF11 is essential for viral DNA replication. J Virol, 20xx. 76(6): p. 27709. 8. Zhang, J., et al., Inhibition of BmNPV replication in silkworm cells using inducible and regulated artificial microRNA precursors targeting the essential viral gene lef11. Antiviral Res, 20xx. 104: p. 14352. 項目的研究內(nèi)容、研究目標 ,以及擬解決的關鍵問題。 研究內(nèi)容 西南大學基本科研業(yè)務費專項資金項目計劃任務書（學生項目） 7 1） LEF11 核細胞定位研究 通過免疫熒光技術鑒定家蠶 核型多角體病毒 LEF11 蛋白定位在細胞核內(nèi)，利用 BrdU 標記技術確定其定位于宿主細胞 DNA 復制中心。 2） LEF11 免疫共沉淀研究 通過過表達 LEF11,利用 免疫共沉淀和質(zhì)譜分析 技術，分析過表達后對宿主 蛋白表達 的影響。 3） LEF11 相互作用蛋白研究 通過 免疫熒光共定位 LEF11 與篩選的宿主蛋白并通過免疫共沉淀等試驗技術 鑒定與 LEF11 相互作用蛋白。 研究目標 1）鑒定 LEF11 核定位 ，分析其定位位置 。 2）揭示 LEF11 過表達對宿主細胞 蛋白表達的影響 。 3）通過篩選與 LEF11 相互 作用蛋白，鑒定 LEF11 與宿主相互用蛋白 。 擬解決的關鍵問題 鑒定 lef11 基因 與宿主細胞相互作用蛋白 。 擬采取的研究方案及可行性分析。 1） BmNPV LEF11 蛋白核定位信號鑒定 利用 LEF11 抗體免疫熒光分析 LEF11 蛋白亞細胞定位，同時借助 BrdU抗體對 LEF11 在細胞核內(nèi)進行精細定位 ； （ 該部分研究內(nèi)容已完成 ） 2） BmNPV LEF11 蛋白 過表達對宿主細胞 蛋白表達影響 ① 利用 LEF11 蛋白過表達后 ， 以 LEF11 為誘餌蛋白， 通過檢測蛋白條帶變化鑒定宿主細胞蛋白表達量差異的 變化。 ②通過質(zhì)譜分析篩選與 LEF11 相互作用的宿主蛋白。 3） lef11 基因 相互作用蛋白研究 通過免疫 熒光 和 免疫共沉淀 技術， 驗證與 LEF11 共定位的宿主蛋白及相互作用的蛋白。 （ 2） 技術路線 西南大學基本科研業(yè)務費專項資金項目計劃任務書（學生項目） 8 本項目的技術路線如下圖。 (3)關鍵技術 1) 免疫共沉淀技術。它決定了是否可以找到 LEF11 互作的宿主蛋白，是研究 lef11 基因?qū)λ拗骷毎{(diào)控的前提條件； 2) 穩(wěn)定高效的家蠶基因過表達技術。它決定了目標基因過表達的效率，是基因功能研究的控制性因素。 項目承擔單位已經(jīng)建立了以上關鍵技術的技術平臺，并能熟練運用以上 技術。同時，以上關鍵技術所涉及的儀器本單位都能提供和滿足。 （ 4）可行性分析 1） 在前期研究中，我們已經(jīng)建立了高效 蛋白相互作用研究 平臺。（相關數(shù)據(jù)已經(jīng)發(fā)表在病毒學權威雜志 Virus Research 上）。 同時，我們對 LEF11 核定位機制的研究也為此項目繼續(xù)深入鑒定基礎 （相關數(shù)據(jù)已經(jīng)發(fā)表在病毒學權威雜志Virus Research 上）。 本項目 選題既有理論意義，又有應用價值， 研究方案切實可行，技術路線合理，所用實驗技術方法先進，能夠按期完成預定研究任務。 2） 本項目承擔單位為 “家蠶基因組學國家重點實驗室 ”，本 實驗室完成了家蠶全基因組測序 和 家蠶 EST 數(shù)據(jù)庫構建，可為項目的實施提供了信息的支撐；西南大學基本科研業(yè)務費專項資金項目計劃任務書（學生項目） 9 本研究室有強大的基因組信息分析平臺、家蠶細胞系平臺、蛋白
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